18全国艾滋病检测技术规范要点.ppt

全国艾滋病检测技术规范要点 卫生部临床检验中心联系：13613225357一、一、特点概述特点概述1 1全全国国艾艾滋滋病病检检测测技技术术规规范范（20042004年年版版）是是 参参 考考 国国 际际 标标 准准 ISO/DISISO/DIS 15189-200415189-2004、ISO/DISISO/DIS 15190-200415190-2004和和 GuidelinesGuidelines forfor UsingUsingHIVHIV TestingTestingTechnologiesTechnologiesinin SurveillanceSurveillanceWHO/CDS/CSR/EDC/2001.16WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16UNAIDS/01.22EUNAIDS/01.22EISBNISBN9713-92-063-79713-92-063-7对对全全国国艾艾滋滋病病检检测测技技术术规规范范(试试行行)进进行行全全面面修修订订而而成成，与与国国际际检检测测技技术和策略紧密接轨。术和策略紧密接轨。2.对原有章节的修改和完善：样品的采集和处理，HIV抗体的检测（目的、要点、方法及结果报告）,HIVP24抗原检测（方法、结果报告和解释），艾滋病检测实验室安全防护等。3.配合VCT(自愿咨询检测)和当前防治工作的需求，新增了以下内容:HIV抗体检测的替代策略，婴幼儿HIV感染诊断，HIVRNA定量测定（病毒载量测定），CD4+/CD8+T淋巴细胞检测，职业暴露预防和补充实验室意外事故紧急处理措施。4.按技术规范要求，对每章内容均标明了“范围”和“规范性引用文件”。一、一、对原有章节的修改和完善：对原有章节的修改和完善：1.样品的采集和处理（1）规定了样品的采集和处理适用范围：用于艾滋病病毒（HIV）检测的血清、血浆和全血样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+T淋巴细胞测定和HIV分离培养。（2 2）应根据实验要求选用适当的抗凝剂：如）应根据实验要求选用适当的抗凝剂：如CD4+/CD8+TCD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用淋巴细胞测定可选用K3EDTAK3EDTA或肝素或或肝素或枸橼酸钠，枸橼酸钠，HIVHIV病毒分离、核酸定性病毒分离、核酸定性/定量检测可定量检测可选用选用K3EDTAK3EDTA或枸橼酸钠。或枸橼酸钠。（3 3）样品的保存）样品的保存用于用于CD4+/CD8+TCD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过存，样品采集时间超过48h48h则不可检测。则不可检测。（4 4）样品的运送）样品的运送应采用应采用WHOWHO提出的三级包装系统：提出的三级包装系统：第第一一层层容容器器：装装样样品品，要要求求防防渗渗漏漏。样样品品应应置置于于带带盖盖的的试试管管内内，试试管管上上应应有有明明显显的的标标记记，标标明明样样品品的的编编号号或或受受检检者者姓姓名名、种种类类和和采采集集时时间间。在在试试管管的的周周围围应应垫垫有有缓缓冲冲吸吸水水材材料料，以以免免碰碰碎碎。随随样样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。第第二二层层容容器器：要要求求耐耐受受性性好好、防防渗渗漏漏、容容纳纳并并保保护护第第一一层层容容器器，可可以以装装若若干干个个第第一一层层容容器器。将将试试管管装装入入专专用用带带盖盖的的容容器器内内，容容器器的的材材料料要要易易于于消消毒处理。毒处理。第第三三层层容容器器：放放在在一一个个运运输输用用外外层层包包装装内内，应应易易于于消消毒毒。在在第第三三层层容容器器外外面面要要贴贴标标签签（数数量量，收收、发件人）。发件人）。（5）样品的接收打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。2 2HIVHIV抗体的检测抗体的检测（1 1）HIVHIV抗抗体体的的检检测测规规定定了了HIVHIV抗抗体体的的检检测测方方法法、检测程序、检测报告及检测策略；其检测程序、检测报告及检测策略；其适用范围为：适用范围为：各各级级各各类类医医疗疗机机构构、疾疾病病预预防防控控制制机机构构、检检验验检检疫疫机机构构、采采供供血血机机构构及及卫卫生生保保健健机机构构。可可作作为为对对HIVHIV感感染染者者/AIDS/AIDS病病人人的的诊诊断断、报报告告和和处处理理的的实实验室依据。并规定了规范性引用文件。验室依据。并规定了规范性引用文件。（2）HIV抗体检测实验室应符合全国艾滋病检测工作规范（1997年版）中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。应符合实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）对 II级 生 物 安 全 实 验 室（BSL-2）的各项要求。（3 3）HIVHIV抗体检测的目的和要点抗体检测的目的和要点HIVHIV抗抗体体检检测测的的目目的的：HIVHIV抗抗体体检检测测可可用用于于监监测测、诊诊断、血液筛查。断、血液筛查。以以监监测测为为目目的的的的检检测测是是为为了了解解不不同同人人群群HIVHIV感感染染率率及及其其变变化化趋趋势势而而进进行行的的检检测测，检检测测的的人人群群包包括括各各类类高危人群和一般人群。高危人群和一般人群。以以诊诊断断为为目目的的的的检检测测是是为为了了确确定定个个体体HIVHIV感感染染状状况况而而进进行行的的检检测测，包包括括临临床床检检测测和和自自愿愿咨咨询询检检测测、术术前检测、根据特殊需要进行的体检等。前检测、根据特殊需要进行的体检等。以以血血液液筛筛查查为为目目的的的的检检测测是是为为了了防防止止输输血血传传播播HIVHIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。HIV抗体检测的要点：筛查试验阳性不能出阳性报告。严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。严格按照试剂盒说明书操作。注意防止样品间交叉污染。（4）HIV抗体检测的筛查方法常用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA）快速检测（RT）及其它检测 随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测（VCT）的迫切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种：明胶颗粒凝集试验（明胶颗粒凝集试验（PAPA）：）：PAPA是是HIVHIV血血清清抗抗体体检检测测的的一一种种简简便便方方法法，是是将将HIVHIV抗抗原原致致敏敏明明胶胶颗颗粒粒作作为为载载体体，与与待待检检样样品品作作用用，混匀后保温（一般为室温）。混匀后保温（一般为室温）。当当待待检检样样品品含含有有HIVHIV抗抗体体时时，经经抗抗原原致致敏敏的的明明胶胶颗颗粒粒与与抗抗体体发发生生抗抗原原-抗抗体体反反应应，根根据据明明胶胶颗颗粒粒在在孔中的凝集情况判读结果。孔中的凝集情况判读结果。PAPA试试剂剂有有两两种种，HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2抗抗原原共共同同致致敏敏的的PAPA试试剂剂（AFD AFD HIV-1/2 HIV-1/2 PAPA），已已经经我我国国食食品品药药品品监监督督管管理理局局（SFDASFDA）注注册册批批准准；HIV-1HIV-1、HIV-2HIV-2抗抗原原分分别别致致敏敏的的PAPA试试剂剂（SERODIA-HIV-1/2SERODIA-HIV-1/2）可可初初步步区分区分HIV-1HIV-1型和型和HIV-2HIV-2型，目前我国尚未引进。型，目前我国尚未引进。斑点EIA（dot-EIA）：以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：与与斑斑点点EIAEIA相相似似，也也是是以以硝硝酸酸纤纤维维膜膜为为载载体体。区区别别在在于于不不用用酶酶标标记记抗抗体体，而而代代之之以以红红色色的的胶胶体体金金（或或胶胶体体硒硒）A A蛋蛋白白，用用渗渗滤滤（或或层层析析）法法作作为为洗洗涤方法。涤方法。试试剂剂稳稳定定，可可室室温温长长期期保保存存。试试验验时时不不需需任任何何设设备备，迅迅速速、简简便便、特特异异性性较较好好，敏敏感感性性约约相相当当于于中中度度敏敏感感的的ELISAELISA，适适用用于于应应急急检检测测、门门诊诊急急诊诊个体检测。个体检测。目目前前已已有有在在国国内内被被SFDASFDA批批准准注注册册的的国国外外进进口口试试剂和国内产品。一般可在剂和国内产品。一般可在1010 30min30min内判读结果。内判读结果。艾滋病唾液检测卡：艾滋病唾液检测卡：在在硝硝酸酸纤纤维维膜膜上上包包被被人人工工合合成成的的HIVgp41/gp36HIVgp41/gp36蛋蛋白白抗抗原原，可可同同时时检检测测含含在在唾唾液液中中的的HIV-1/HIV-2HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。抗体，原理为酶免疫间接法。主主要要检检测测唾唾液液中中的的HIV HIV IgAIgA与与IgGIgG抗抗体体，敏敏感感性性特特异异性性与与ELISAELISA相相近近，可可避避免免静静脉脉穿穿刺刺。但但样样品品预预处理时间长且售价较高。处理时间长且售价较高。以以唾唾液液为为样样品品测测定定HIVHIV抗抗体体的的ELISAELISA、免免疫疫印印迹迹法（法（WBWB）试剂美国试剂美国FDAFDA已批准。已批准。其其它它快快速速筛筛查查试试验验方方法法：家家庭庭HIVHIV检检测测（Home Home Access SystemAccess System）等。等。尿液HIV抗体检测 1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂，我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。（5 5）HIVHIV抗体筛查检测中初筛和复检试验的抗体筛查检测中初筛和复检试验的检测和报告方法检测和报告方法根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测（复检）。初筛试验：以第三代ELISA（双抗原夹心法）为例。备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。实验结果实验结果阴阴性性对对照照（NCNC），HIV-1HIV-1阳阳性性对对照照（PC1PC1），HIV-2HIV-2阳性对照（阳性对照（PC2PC2）NC NC 必必须须0.250.25方方可可用用，排排除除NC0.25NC0.25的的值值，计计算算NCNC平均值。平均值。NCNC界限范围：界限范围：0.60.6倍倍NCNC均值均值NCNC1.41.4倍倍NCNC均值。均值。符合以下条件的实验成立：符合以下条件的实验成立：两个以上的两个以上的NCNC可用（可用（0.250.25）。PC1-NCPC1-NC均值均值 0.40.4，PC2-NCPC2-NC均值均值 0.40.4Cut offCut off值值 =阴性对照均值阴性对照均值 +0.100+0.100小于小于Cut offCut off为阴性，大于或等于为阴性，大于或等于Cut offCut off为阳性为阳性4 4）报告：）报告：对对HIVHIV抗抗体体筛筛查查试试验验，呈呈阴阴性性反反应应者者可可出出具具“HIVHIV抗体阴性抗体阴性”报告（可用附表报告（可用附表1 1）；）；对对初初筛筛试试验验呈呈阳阳性性反反应应者者不不能能出出阳阳性性报报告告，可可出出具具“HIVHIV抗体待复查抗体待复查”报告（附表报告（附表1 1）。）。如如需需送送上上级级实实验验室室进进行行复复测测或或确确认认，需需要要填填写写“HIVHIV抗抗体体复复测测送送检检单单”（附附表表2 2），经经1 1名名检检验验人人员员和和1 1名名具具有有中中级级以以上上技技术术职职称称的的人人员员审审核核签签字字。送送当当地地艾艾滋滋病病筛筛查查中中心心实实验验室室，再再转转送送艾艾滋滋病病确确认认实实验验室室，或或在在本本实实验验室室复复检检后后直直接接送送确确认认实实验验室。室。复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。（6 6）HIVHIV抗体确认试验结果报告抗体确认试验结果报告确确认认试试验验由由确确认认实实验验室室根根据据检检测测结结果果出出具具“HIVHIV抗抗体体确确认认检检测测报报告告单单”（附附表表3 3），报报告告HIVHIV抗抗体体阳阳性性（+）、HIVHIV抗抗体体阴阴性性（-）及及HIVHIV抗抗体体不不确确定定（）。）。符符合合HIV-1HIV-1抗抗体体阳阳性性判判断断标标准准，报报告告“HIV-1HIV-1抗抗体体阳阳性性（+）”，并并按按规规定定做做好好检检测测后后咨咨询询、保保密密和和疫情报告工作。疫情报告工作。符符合合HIVHIV抗抗体体阴阴性性判判断断标标准准，报报告告“HIVHIV抗抗体体阴阴性性（-）”。如如果果近近期期有有高高危危行行为为，如如性性乱乱、注注射射毒毒品品等等，或或有有急急性性流流感感样样症症状状等等情情况况，为为排排除除因因“窗窗口口期期”而而出出现现的的假假阴阴性性结结果果，建建议议高高危危行行为为后后3 3个个月月时时再再做做抗抗体体检检测测。也也可可进进行行HIV-1 HIV-1 P24P24抗抗原原或或HIVHIV核酸检测，作为辅助诊断。核酸检测，作为辅助诊断。符符合合HIVHIV抗抗体体不不确确定定判判断断标标准准，报报告告“HIVHIV抗抗体体不不确确定定（）”，在在备备注注中中应应注注明明“3 3个个月月后后复复检检”，同时进行以下处理：，同时进行以下处理：1)1)随随访访复复检检：每每3 3个个月月随随访访复复检检1 1次次，连连续续2 2次次，共共6 6个个月月。如如果果检检测测时时暴暴露露时时间间已已超超过过3 3个个月月，则则在在3 3个个月月后后随随访访1 1次次即即可可。将将前前后后2 2份份样样品品同同时时检检测测，仍仍呈呈不不确确定定或或阴阴性性则则报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性，如如果果在在随随访访期期间间发发生生带带型型进进展展，符符合合HIVHIV抗抗体体阳阳性性判判定定标标准准则报告则报告HIV-1HIV-1或或HIV-2HIV-2抗体阳性。抗体阳性。2)2)必必要要时时可可做做HIV-1 HIV-1 P24P24抗抗原原或或HIVHIV核核酸酸测测定定，但但检检测测结结果果只只能能作作为为辅辅助助诊诊断断依依据据，确确认认报报告告要要依依据血清学随访结果。据血清学随访结果。省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品，送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。3 3HIV P24HIV P24抗原的检测抗原的检测规规定定了了P24P24抗抗原原的的检检测测方方法法、适适用用范范围围和和规规范范性性引引用文件。用文件。（1 1）适用范围：）适用范围：HIV-1HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。抗体不确定或窗口期的辅助诊断。HIV-1HIV-1抗抗体体阳阳性性母母亲亲所所生生婴婴儿儿早早期期的的辅辅助助鉴鉴别别诊诊断。断。第第四四代代HIV-1HIV-1抗抗原原/抗抗体体ELISAELISA试试剂剂检检测测呈呈阳阳性性反反应，但应，但HIV-1HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。抗体确认阴性者的辅助诊断。监测病程进展和抗病毒治疗效果。监测病程进展和抗病毒治疗效果。（2 2）HIV P24HIV P24抗原检测方法抗原检测方法P24P24抗抗原原的的检检测测通通常常是是采采用用ELISAELISA夹夹心心法法，已已知知抗抗体体包包被被固固相相反反应应板板孔孔底底，加加入入待待测测血血清清，若若血血清清中中含含有有P24P24抗抗原原则则与与包包被被抗抗体体形形成成抗抗原原-抗抗体体复复合合物物，再再加加入入酶酶（HRPHRP）标标记记的的HIV-1HIV-1抗抗体体与与抗抗原原结结合，加底物显色，在酶标仪上读结果。合，加底物显色，在酶标仪上读结果。为为了了提提高高检检测测血血清清中中P24P24抗抗原原的的敏敏感感性性，需需先先将将血血清清中中免免疫疫复复合合物物解解离离后后再再进进行行测测定定，目目前前已已发发展展了了ICD ICD P24P24抗抗原原（immunimmun-complex-complex disassociatedisassociate，免免疫疫复复合合物物解解离离，ICDICD）测测定定试试剂剂，用用于于HIV-1 HIV-1 P24P24抗原测定。抗原测定。即即使使将将复复合合物物解解离离，敏敏感感性性提提高高，也也只只能能在在大大约约50%50%无症状感染者中检出无症状感染者中检出P24P24抗原。抗原。4 4）结果报告和解释）结果报告和解释HIV-1 HIV-1 P24P24抗抗原原的的阳阳性性结结果果必必须须经经过过中中和和试试验验确确认认，若若阳阳性性标标本本的的ODOD值值比比中中和和反反应应前前减减少少50%50%以以上上，才才确定为确定为HIV P24HIV P24抗原结果阳性。抗原结果阳性。HIV-1 HIV-1 P24P24抗抗原原阳阳性性仅仅作作为为HIVHIV感感染染窗窗口口期期的的辅辅助助诊断依据，不能据此确诊。诊断依据，不能据此确诊。HIV-1P24HIV-1P24抗抗原原检检测测的的敏敏感感性性为为3030 9090，低低于于病病毒毒载载量量测测定定。HIV-1P24HIV-1P24抗抗原原阴阴性性结结果果只只表表示示在在本本试试验中无反应，不能排除验中无反应，不能排除HIVHIV感染。感染。婴婴幼幼儿儿经经过过胎胎盘盘或或哺哺乳乳从从母母亲亲获获得得的的HIVHIV抗抗体体不不能能用用于于诊诊断断是是否否经经母母婴婴传传播播感感染染HIVHIV。婴婴幼幼儿儿体体内内从从母母亲亲得得到到的的HIVHIV抗抗体体持持续续存存在在时时间间最最长长不不超超过过1818个个月。月。在在1818月月龄龄以以前前可可以以用用多多种种不不同同的的非非抗抗体体依依赖赖性性的的检检验验方方法法对对新新生生儿儿HIVHIV感感染染进进行行辅辅助助诊诊断断，包包括括：HIV P24HIV P24抗原检测、病毒分离培养、抗原检测、病毒分离培养、RNARNA或或DNADNA测定。测定。4 4艾滋病检测实验室安全防护艾滋病检测实验室安全防护规规规规定定了了全全国国各各级级各各类类艾艾滋滋病病实实验验室室的的安安全全防防护护，规范性引用文件规范性引用文件（1 1）实验室生物安全级别）实验室生物安全级别1 1）艾滋病血清学检测）艾滋病血清学检测艾艾滋滋病病血血清清学学检检测测（包包括括筛筛查查和和确确认认实实验验室室）、免免疫疫学学和和核核酸酸检检测测应应在在符符合合级级生生物物安安全全实实验验室室（BSL-2BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。要求的艾滋病检测实验室中进行。2 2）HIVHIV分离、研究分离、研究HIVHIV分分离离、细细胞胞培培养养及及研研究究工工作作应应在在级级生生物物安安全全实验室（实验室（BSL-3BSL-3）中进行。中进行。（2 2）实验室管理要求）实验室管理要求1 1）建立安全制度建立安全制度实实验验室室的的仪仪器器设设备备、建建筑筑和和设设施施的的安安全全性性应应符符合合实实验验室室生生物物安安全全通通用用要要求求GB GB 19489-200419489-2004和和本本规范规范要求。要求。根根据据本本规规范范制制订订本本实实验验室室的的安安全全工工作作制制度度或或安安全全标标准准操操作作程程序序（S-SOPS-SOP），该该制制度度或或程程序序应应适适用用于于现现有有的的实实验验条条件件，并并与与实实验验室室其其它它规规定定相相一致。一致。无无论论是是否否发发生生意意外外事事故故，每每年年都都要要对对安安全全工工作作制制度度或或安安全全标标准准操操作作程程序序及及其其实实施施情情况况进进行行检检查查和修订，并有记录。和修订，并有记录。制制定定意意外外事事故故处处理理预预案案。建建立立意意外外事事故故的的登登记记和报告制度。和报告制度。实实验验室室主主任任负负责责组组织织对对突突发发事事件件和和职职业业暴暴露露事事故进行调查、登记、处理和报告。故进行调查、登记、处理和报告。2 2）人员培训和管理）人员培训和管理向向管管理理人人员员和和所所有有检检测测人人员员提提供供并并完完成成与与工工作作相相关关的的充充足足有有效效的的技技术术培培训训。强强化化全全员员安安全全培培训训和和“普普遍遍性性防防护护原原则则”安安全全意意识识。所所有有工工作作人人员员必必须须经经过过HIVHIV检检测测技技术术和和省省级级以以上上艾艾滋滋病病实实验验室室安安全全培培训训，包包括括上上岗岗培培训训和和复复训训，并并接接受受实实验验室室管管理理人人员员的的监监督督。实实验验室室的的安安全全责责任任人人要要对对工工作作和和环环境境的的安安全全负负责责，所所有有工工作作人人员员都都有有责责任任保保护护自自己和他人的安全。己和他人的安全。必必须须告告知知新新上上岗岗人人员员实实验验室室工工作作的的潜潜在在危危险险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。实实验验室室主主任任应应了了解解所所有有工工作作人人员员。在在安安排排工工作作区区域域时时，要要根根据据人人员员的的工工作作种种类类和和所所涉涉及及的的生生物物材料，对实验室环境做好安全检查。材料，对实验室环境做好安全检查。新新调调入入人人员员、外外来来合合作作、进进修修和和学学习习的的人人员员在在进进入入实实验验室室之之前前必必须须经经过过实实验验室室主主任任的的批批准准。非非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。严严格格执执行行实实验验室室工工作作人人员员年年度度采采血血检检测测HIVHIV抗抗体体和和备备案案制制度度，工工作作人人员员血血清清应应长长期期保保留留。实实验验室室工工作作人人员员从从事事工工作作前前必必须须进进行行HIVHIV抗抗体体和和乙乙肝肝、丙丙肝肝等等肝肝炎炎病病毒毒标标记记物物的的检检测测；注注射射乙乙肝肝疫疫苗苗；每每半年半年-1-1年进行年进行1 1次次HIVHIV抗体检测，并保留血清样品。抗体检测，并保留血清样品。3 3）建立严格的保密制度并定期检查）建立严格的保密制度并定期检查与与HIV/AIDSHIV/AIDS相相关关检检测测项项目目的的所所有有资资料料均均应应严严格格保保密密，包包括括送送检检单单与与检检测测记记录录的的保保管管、报报告告单单的的发放和工作人员年度采血检测等。发放和工作人员年度采血检测等。艾艾滋滋病病检检测测实实验验室室所所有有人人员员应应具具有有高高度度的的保保密密意识。不可对无关人员透露检测结果。意识。不可对无关人员透露检测结果。保保密密制制度度纳纳入入年年度度考考核核，发发现现问问题题及及时时处处理理并并根据情况修订保密制度。根据情况修订保密制度。4 4）严格质量管理）严格质量管理按按要要求求做做好好安安全全操操作作的的管管理理以以及及检检测测试试剂剂的的选选择、检测工作的室内质控和室间质评。择、检测工作的室内质控和室间质评。对对所所有有检检测测报报告告严严格格把把关关，杜杜绝绝漏漏报报、误误报报现现象的发生。象的发生。5 5）对存放试剂和有毒物区域的监控）对存放试剂和有毒物区域的监控冷冷藏藏柜柜、冰冰箱箱、培培养养箱箱和和存存放放生生物物试试剂剂、化化学学危危险险品品、放放射射性性物物质质的的容容器器置置于于工工作作人人员员视视线线之之外的地点时应上锁。外的地点时应上锁。应应设设有有专专门门储储存存阳阳性性血血清清、质质控控品品的的低低温温冰冰柜柜和和/或血清库毒种库，并应上锁，专人管理。或血清库毒种库，并应上锁，专人管理。各级实验室血清库各级实验室血清库/毒种库的设置按有关规定执行。毒种库的设置按有关规定执行。6 6）建立应付突发事件的措施）建立应付突发事件的措施在在紧紧急急预预案案中中要要包包括括在在紧紧急急事事件件发发生生时时通通知知实实验验室室主主任任、设设备备管管理理员员、实实验验室室工工作作人人员员和和设设备备安全员。安全员。实实验验室室主主任任和和设设备备安安全全员员要要遵遵循循有有关关规规定定，报报告告、调调查查和和处处理理突突发发事事件件以以及及可可能能发发生生的的意意外外职职业暴露。业暴露。（3 3）废弃物处置和消毒）废弃物处置和消毒1 1）废弃物处置：）废弃物处置：废废弃弃物物处处置置应应符符合合实实验验室室生生物物安安全全通通用用要要求求（GB 19489-2004GB 19489-2004）。）。从从艾艾滋滋病病实实验验室室出出来来的的所所有有废废弃弃物物，包包括括不不再再需需要要的的样样品品、培培养养物物和和其其它它物物品品，均均应应视视为为感感染染性性废废弃弃物物，应应置置于于专专用用的的密密封封防防漏漏容容器器中中，安安全全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。2 2）HIVHIV常用的消毒方法常用的消毒方法物理消毒方法：物理消毒方法：高压蒸汽消毒，高压蒸汽消毒，121121，保持，保持1515 20min;20min;干干燥燥空空气气烘烘箱箱消消毒毒（干干烤烤消消毒毒），140140，保保持持2 2 3h3h。HIVHIV常用的化学消毒方法：常用的化学消毒方法：HIVHIV最最常常用用的的化化学学消消毒毒剂剂是是0.5%0.5%次次氯氯酸酸钠钠、70%70%乙乙醇和醇和2%2%戊二醛，保持戊二醛，保持1010 30 min30 min。废弃物缸：废弃物缸：0.5%0.5%次氯酸钠。次氯酸钠。生物安全柜工作台面和仪器表面：生物安全柜工作台面和仪器表面：70%70%乙醇。乙醇。溢出物：溢出物：0.5%0.5%次氯酸钠。次氯酸钠。污污染染的的台台面面和和器器具具：40%40%甲甲醛醛水水溶溶液液，也也可可以以用用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%2%戊二醛消毒。戊二醛消毒。一、一、配合配合VCT(自愿咨询检测自愿咨询检测)和当前防治和当前防治工作的需求，工作的需求，新增有关内容新增有关内容:1.HIV抗体检测的替代策略除常规检测程序以外，可以根据不同的目的，对HIV流行强度不同的地区和不同人群采用不同的替代策略，见表1。（1 1）替替代代策策略略（全全国国HIVHIV感感染染疫疫情情报报告告检检测测策策略）略）检测程序及结果报告检测程序及结果报告先先用用一一种种筛筛查查试试剂剂检检测测，出出现现阴阴性性反反应应则则报报告告“HIVHIV抗抗体体阴阴性性（-）”。出出现现阳阳性性反反应应则则用用两两种种不不同同原原理理或或不不同同厂厂家家的的试试剂剂复复测测（其其中中包包括括进进口口第三代第三代ELISAELISA试剂）。试剂）。两两种种试试剂剂复复测测均均为为阳阳性性，且且其其中中第第三三代代ELISAELISA试试剂剂复复测测样样品品ODOD值值与与临临界界值值（CutoffCutoff）的的比比值值（S/COS/CO）6.06.0者者可可作作阳阳性性考考虑虑，上上报报疫疫情情（附附表表4 4）。两两种种试试剂剂复复测测结结果果均均为为阳阳性性，但但第第三三代代ELISAELISA试试剂剂复复测测S/COS/CO比比值值在在1.01.0 5.95.9之之间间，或或两两种种试试剂剂复复测测结结果果呈呈一一阴阴一一阳阳，应应进进一一步步作作确确认认试试验验，按照确认试验的标准判断结果（图按照确认试验的标准判断结果（图3 3）。）。图图3 3 替代策略替代策略（HIVHIV感染疫情报告检测策略）检测流程感染疫情报告检测策略）检测流程2 2）替替代代策策略略（HIVHIV感感染染高高流流行行地地区区高高危危人人群群VCTVCT检测策略）检测策略）应应在在确确认认中中心心实实验验室室和和确确认认实实验验室室或或以以上上实实验验室室指指定定的的筛筛查查实实验验室室进进行行，用用高高质质量量筛筛查查试试剂剂检检测测及及判判断断结结果果（见见6.2.26.2.2）。使使用用该该策策略略判判断断结结果果，阳阳性性报报告告须须由由确确认认中中心心实实验验室室和和确确认认实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。检测程序及结果报告：检测程序及结果报告：先先用用第第一一种种筛筛查查试试剂剂（ELISA-1ELISA-1）检检测测，出出现现阴阴性性反反应应报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性；出出现现阳阳性性反反应应则则报报告告“HIVHIV抗抗体体待待复复查查”，并并用用第第一一种种和和第第二种酶联试剂（二种酶联试剂（ELISA-1ELISA-1和和 ELISA-2ELISA-2）复检。复检。两两种种ELISAELISA试试剂剂检检测测结结果果均均阴阴性性则则报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性；两两种种ELISAELISA试试剂剂检检测测结结果果均均阳阳性性，且且S/COS/CO比比值值均均大大于于或或等等于于6.06.0者者，用用第第三三种种筛筛查查试试剂剂（高高特特异异性性筛筛查查试试剂剂）检检测测，如如果果第第三三种种试试剂剂检检测测结结果果为为阳阳性性，在在符符合合使使用用该该策策略略条条件件的的地地区区和和人人群群中中可可以以出出具具“HIV-1HIV-1抗抗体体阳阳性性（+）”报报告告，使使用用“HIVHIV抗抗体体替替代代策策略略检检测测报报告单告单”（附表（附表5 5）。）。下下列列情情况况均均需需做做确确认认试试验验，按按照照确确认认试试验验的的结结果果出出报报告告：两两种种ELISAELISA试试剂剂检检测测结结果果一一阴阴一一阳阳、两两种种ELISAELISA试试剂剂检检测测结结果果均均阳阳性性但但一一种种或或二二种种S/COS/CO在在1.01.05.95.9之之间间、第第三三种种筛筛查查试试剂剂检检测结果为可疑或阴性。测结果为可疑或阴性。图图4替代策略替代策略（高危人群（高危人群VCT检测策略）检测流程检测策略）检测流程3 3）替替代代策策略略（高高流流行行地地区区一一般般人人群群及及其其它它地地区区各类人群各类人群VCTVCT检测策略，图检测策略，图5 5）检测程序及结果报告：检测程序及结果报告：先先用用一一种种高高敏敏感感性性筛筛查查试试剂剂检检测测，出出现现阴阴性性反反应应报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性；出出现现阳阳性性则则用用第第二二种种筛筛查查试试剂（高特异性）复检。剂（高特异性）复检。第第二二种种筛筛查查试试剂剂检检测测阴阴性性则则用用第第三三种种筛筛查查试试剂剂（另另一一种种高高特特异异性性试试剂剂）检检测测；第第二二种种筛筛查查试试剂剂检检测测为为阳阳性性则则按按疑疑似似阳阳性性咨咨询询，建建议议进进一一步步做做确确认试验，按确认试验的结果报告。认试验，按确认试验的结果报告。第第三三种种筛筛查查试试剂剂检检测测为为阴阴性性则则报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性；第第三三种种试试剂剂检检测测为为阳阳性性按按疑疑似似阳阳性性咨咨询询，建建议议进进一步做确认试验，按确认试验的结果报告。一步做确认试验，按确认试验的结果报告。图图5 5 替代策略替代策略（一般人群（一般人群VCTVCT策略）的检测及结果报告流程图策略）的检测及结果报告流程图2.2.婴幼儿婴幼儿HIVHIV感染诊断（根据替代策略制定）感染诊断（根据替代策略制定）婴儿随访和检测服务流程婴儿随访和检测服务流程婴儿随访和检测服务流程婴儿随访和检测服务流程纳入当地艾滋病综合防治系统纳入当地艾滋病综合防治系统婴儿婴儿912912月龄进行月龄进行HIVHIV抗体检测抗体检测视为视为HIVHIV抗体（抗体（-）常规儿童保健）常规儿童保健1818月龄时再进行月龄时再进行HIVHIV抗体检测抗体检测结果（结果（+）用另一种检测试剂再次检测用另一种检测试剂再次检测结果（结果（-）结果（结果（+）结果（结果（-）对对HIVHIV（+）产妇进行咨询，指导人工喂养产妇进行咨询，指导人工喂养2.婴幼儿HIV感染诊断（根据替代策略制定）婴儿随访和检测服务流程婴儿随访和检测服务流程3 3HIV RNAHIV RNA定量测定（病毒载量测定）定量测定（病毒载量测定）（1 1）实实验验室室功功能能分分区区 实实验验室室原原则则上上应应分分为为4 4个个独立工作区独立工作区1 1）试试剂剂准准备备区区、样样品品处处理理区区、扩扩增增区区和和扩扩增增产产物物分分析析区区，并并设设在在不不同同房房间间。前前两两区区为为扩扩增增前前区区，后两区为扩增后区。各区的功能是：后两区为扩增后区。各区的功能是：试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。样样品品处处理理区区：样样品品登登记记、分分装装；核核酸酸提提取取、保保存和加样。存和加样。扩增区：核酸扩增。扩增区：核酸扩增。扩扩增增产产物物分分析析区区：扩扩增增产产物物的的测测定定、结结果果分分析析、登记及报告。登记及报告。2 2）扩扩增增前前区区与与扩扩增增后后区区应应严严格格分分开开，须须使使用用不不同同的房间，两区之间最好有一定的间隔。的房间，两区之间最好有一定的间隔。3 3）使使用用商商品品化化试试剂剂盒盒可可在在样样品品处处理理区区进进行行少少量量试试剂配制。剂配制。4 4）在在满满足足下下列列操操作作和和清清洁洁处处理理要要求求的的前前提提下下样样品品处理区和试剂准备区可设在同一房间内：处理区和试剂准备区可设在同一房间内：在生物安全柜内操作。在生物安全柜内操作。每每个个实实验验人人员员、实实验验组组分分别别使使用用各各自自的的试试剂剂及耗材。及耗材。盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。后进行清洁及消毒。（2）人员进行HIV核酸检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格，并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。（3）设施和设备1）根据检测项目配备相应的设施和设备。2）各区域的设施和设备应为区域性专用，开展特定试验时应根据要求在相应区域放置专用设备。以下是各区域应配备的设备：以下是各区域应配备的设备：试试剂剂准准备备区区：冰冰箱箱、洁洁净净工工作作台台、离离心心机机、加加样器、振荡器、废弃物容器。样器、振荡器、废弃物容器。样样品品处处理理区区：冰冰箱箱、生生物物安安全全柜柜、离离心心机机、加加样样器器、振振荡荡器器、恒恒温温水水浴浴、上上下下水水设设备备、废废弃弃物物容器。容器。扩扩增增区区：核核酸酸扩扩增增设设备备、冰冰箱箱、离离心心机机、加加样样器、废弃物容器。器、废弃物容器。扩扩增增产产物物分分析析区区：冰冰箱箱、离离心心机机、加加样样器器、电电泳泳仪仪、振振荡荡器器、恒恒温温水水浴浴、上上下下水水设设备备、废废弃弃物物容器、核酸污染物处理设备等。容器、核酸污染物处理设备等。配备配备-80-80冰箱。冰箱。3 3）各各区区域域应应备备有有工工作作人人员员专专用用的的工工作作服服或或一一次次性性工工作作服服、帽帽子子和和鞋鞋套套，必必要要时时配配备备防