药物分析07-1第七章芳香胺类药物的分析.ppt

PharmaceuticalAnalysis第七章 芳香胺类药物的分析Analytical of Aromatic aminesPharmaceuticalAnalysis芳香胺芳香胺(Aromatic aminesAromatic amines)芳胺类芳胺类 芳烃胺类芳烃胺类（1）（2）例：例：benzocaine,procaine hydrochloride例：例：paracetamol,lidocaine hydrochloride例：例：adrenaline,dopamine hydrochloride（1）（2）例：例：oxprenolol,carteolol hydrochloride药物分析 Page 2PharmaceuticalAnalysis第一节第一节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析结结 构构 (StructureStructure)1.芳伯氨基芳伯氨基：重氮化偶合反应；与芳醛缩合成：重氮化偶合反应；与芳醛缩合成SchiffSchiff碱；易氧化变色等碱；易氧化变色等2.水解水解：受光线、热、碱的影响；盐酸丁卡因：受光线、热、碱的影响；盐酸丁卡因BABA，其余药物，其余药物PABA3.弱碱性弱碱性：叔胺氮原子，生物碱沉淀剂反应，非水溶剂滴定：叔胺氮原子，生物碱沉淀剂反应，非水溶剂滴定4.溶解性溶解性：游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸：游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。化学性质化学性质 (FeatureFeature)苯佐卡因苯佐卡因(benzocaine),盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride),盐酸丁卡因盐酸丁卡因(tetracaine hydrochloride).1.对氨基苯甲酸酯类对氨基苯甲酸酯类药物分析 Page 3PharmaceuticalAnalysis2.酰胺类酰胺类paracetamol acedapsonelidocaine hydrochloride1.水解水解2.醋酸醋酸 乙醇乙醇/硫酸硫酸 醋酸乙酯醋酸乙酯3.对乙酰氨基酚三氯化铁对乙酰氨基酚三氯化铁4.弱碱性：叔胺氮原子生物沉弱碱性：叔胺氮原子生物沉淀剂淀剂沉淀沉淀5.酰胺氮原子与金属离子络合显色酰胺氮原子与金属离子络合显色bupivacaine hydrochloride结结 构构 (StructureStructure)化学性质化学性质 (FeatureFeature)对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚(paracetamol),醋氨苯砜醋氨苯砜(acedapsone),盐酸利多卡因盐酸利多卡因(lidocaine hydrochloride),盐酸布比卡因盐酸布比卡因(bupivacaine hydrochloride).(共性共性)(特性特性)药物分析 Page 4PharmaceuticalAnalysis芳伯氨基芳伯氨基：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺 NaNO2/HCl 碱性碱性-萘酚萘酚 有色偶氮染料（橙黄到猩红色）有色偶氮染料（橙黄到猩红色）潜在芳伯氨基潜在芳伯氨基：对乙酰氨基酚、醋氯苯砜：对乙酰氨基酚、醋氯苯砜 盐酸或硫酸加热水解盐酸或硫酸加热水解 NaNO2/HCl 碱性碱性-萘酚萘酚 有色偶氮染料（红色）有色偶氮染料（红色）区别盐酸丁卡因区别盐酸丁卡因：（乳白色）（乳白色）（一）重氮化偶合反应（一）重氮化偶合反应鉴别试验 (Identification)Identification)药物分析 Page 5PharmaceuticalAnalysis（二）与三氯化铁反应（二）与三氯化铁反应（蓝紫色）（蓝紫色）（三）与金属离子反应（三）与金属离子反应1.与铜和钴离子反应与铜和钴离子反应（具有芳酰胺结构的，如盐酸利多卡因）（具有芳酰胺结构的，如盐酸利多卡因）硫酸铜硫酸铜/碳酸钠试液碳酸钠试液蓝紫色配合物蓝紫色配合物 氯化钴氯化钴/酸性溶液酸性溶液亮绿色细小钴盐沉淀亮绿色细小钴盐沉淀显黄色（溶于氯仿）显黄色（溶于氯仿）2.羟肟酸铁盐反应（具有芳酰胺结构的，如盐酸普鲁卡因胺）羟肟酸铁盐反应（具有芳酰胺结构的，如盐酸普鲁卡因胺）浓过氧化氢浓过氧化氢/加热至沸加热至沸 羟肟酸羟肟酸 三氯化铁三氯化铁 羟肟酸铁羟肟酸铁（紫红色）（紫红色）3.与汞离子反应与汞离子反应 芳酰胺类，如盐酸利多卡因芳酰胺类，如盐酸利多卡因 硝酸汞硝酸汞/硝酸，煮沸硝酸，煮沸 对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因 硝酸汞硝酸汞/硝酸，煮沸硝酸，煮沸黄色黄色红色红色或或橙黄色橙黄色鉴别试验 (Identification)Identification)药物分析 Page 6PharmaceuticalAnalysis（四）水解产物反应（四）水解产物反应1.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因10氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液白色白色（加热变为油状物）（加热变为油状物）继续加热继续加热 蒸气（二乙氨基乙醇）蒸气（二乙氨基乙醇）（能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色）（能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色）加热至油状物消失加热至油状物消失 放冷、加盐酸放冷、加盐酸 白色白色（能溶于过量的盐酸）（能溶于过量的盐酸）2.苯佐卡因氢氧化钠试液苯佐卡因氢氧化钠试液 煮沸煮沸 乙醇乙醇 加入碘试液加入碘试液/加热加热 黄色黄色（碘仿臭气）（碘仿臭气）（五）制备衍生物测熔点（五）制备衍生物测熔点1.盐酸利多卡因盐酸利多卡因 三硝基苯酚三硝基苯酚 三硝基苯酚利多卡因（三硝基苯酚利多卡因（mp.228232）盐酸布比卡因盐酸布比卡因 三硝基苯酚布比卡因（三硝基苯酚布比卡因（mp.194）2.盐酸丁卡因盐酸丁卡因 25硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液/5醋酸溶液醋酸溶液 丁卡因硫氰酸盐（丁卡因硫氰酸盐（mp.131）鉴别试验 (Identification)Identification)药物分析 Page 7PharmaceuticalAnalysis（六）紫外特征吸收光谱（六）紫外特征吸收光谱药物药物溶剂溶剂浓度浓度(g/mL)max(nm)备注备注对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚HCl(10.3g/L)-甲醇甲醇(1:99)0.4%NaOH10249860980BP2003,8257715Chp2005用于含量测定用于含量测定苯佐卡因苯佐卡因氯仿氯仿278USP24与对照吸收相同，与对照吸收相同，两者之差不超过两者之差不超过3.0%盐酸丁卡因盐酸丁卡因pH6磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液10310同上，两者之差不超过同上，两者之差不超过2.0%盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺0.1mol/L NaOH10273580610BP2003水水5280Chp2005，片剂和注射，片剂和注射剂鉴别剂鉴别醋氨苯砜醋氨苯砜无水乙醇无水乙醇5256，284Chp2005鉴别试验 (Identification)Identification)药物分析 Page 8PharmaceuticalAnalysis（七）红外吸收光谱（七）红外吸收光谱盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺 波数波数cm-1 波数波数cm-1 鉴别试验 (Identification)Identification)酯羰基酯羰基C=O 1692 酯基酯基C-O 1271,1170,1115 二乙胺盐二乙胺盐N-H 2585 2645（略向高波数）（略向高波数）1550（N-H 酰胺酰胺带）带）1280（N-H酰胺酰胺带带）药物分析 Page 9PharmaceuticalAnalysis（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质工艺：工艺：对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚的有色氧化产物的有色氧化产物乙醇溶液的澄清度与颜色乙醇溶液的澄清度与颜色：中间体对氨基酚的有色氧化产物在乙醇中显橙红色：中间体对氨基酚的有色氧化产物在乙醇中显橙红色或棕色。（比浊，比色）或棕色。（比浊，比色）有关物质：有关物质：中间体、副产物及分解产物（例：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、中间体、副产物及分解产物（例：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等）乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等）药典规定：以对氯乙酰苯胺为对照品，药典规定：以对氯乙酰苯胺为对照品，TLC限度检查。限度检查。对氨基酚的检查对氨基酚的检查特殊杂质检查 (Detection of specific impurities)(Detection of specific impurities)药物分析 Page 10PharmaceuticalAnalysis对氨基酚对氨基酚乙酰化不完全或贮藏不当引起水解毒性较大并有色泽乙酰化不完全或贮藏不当引起水解毒性较大并有色泽检查方法：检查方法：检查方法：检查方法：取本品取本品1.0g，加甲醇溶液（，加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液氰化钠试液1ml，摇匀，放置，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对加对氨基酚氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005%）。）。注：对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。注：对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。特殊杂质检查 (Detection of specific impurities)(Detection of specific impurities)药物分析 Page 11PharmaceuticalAnalysis（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查限度：限度：限度：限度：水解产物对氨基苯甲酸，不得超过水解产物对氨基苯甲酸，不得超过1.2%。检查方法：检查方法：检查方法：检查方法：TLC法，对氨基苯甲酸对照品对照，对二甲氨基苯甲醛法，对氨基苯甲酸对照品对照，对二甲氨基苯甲醛溶液显色。溶液显色。黄色黄色特殊杂质检查 (Detection of specific impurities)(Detection of specific impurities)药物分析 Page 12PharmaceuticalAnalysis容量分析方法色谱法分光光度法亚硝酸钠滴定法非水溶液滴定法含量测定(Assay)(Assay)spectrometryspectrometrysodium nitrite methodsodium nitrite methodnon-aqueous titrimetrynon-aqueous titrimetryvolumetric analysisvolumetric analysischrometographychrometography药物分析 Page 13PharmaceuticalAnalysis亚硝酸钠滴定法sodium nitrite methodsodium nitrite method原理：原理：条件：条件：1、加入适量溴化钾加快反应、加入适量溴化钾加快反应 2、加入过量盐酸、加入过量盐酸1:2.563、室温、室温10 30 4、滴定管尖端插入液面下滴定、滴定管尖端插入液面下滴定终点指示方法：终点指示方法：1、永停法、永停法2、外指示剂法（碘化钾淀粉）、外指示剂法（碘化钾淀粉）药物分析 Page 14PharmaceuticalAnalysis非水溶液滴定法非水溶液滴定法 non-aqueous titrimetrynon-aqueous titrimetrynon-aqueous titrimetry盐酸丁卡因盐酸丁卡因盐酸利多卡盐酸利多卡因因侧链烃胺的叔胺氮侧链烃胺的叔胺氮侧链哌啶环的叔胺氮侧链哌啶环的叔胺氮弱碱性弱碱性高氯酸非水滴定高氯酸非水滴定高氯酸非水滴定高氯酸非水滴定注：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰注：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰盐酸丁卡因加醋酐以突出终点；盐酸丁卡因加醋酐以突出终点；例例：盐酸利多卡因的非水滴定反应过程：盐酸利多卡因的非水滴定反应过程：指示剂：结晶紫指示剂：结晶紫指示剂：萘酚苯甲醇指示剂：萘酚苯甲醇盐酸布比卡因盐酸布比卡因药物分析 Page 15PharmaceuticalAnalysis分光光度法(spectrometry)(spectrometry)对乙酰氨基酚在对乙酰氨基酚在257nm波长处有最大吸收，中国药典波长处有最大吸收，中国药典2005版采用百版采用百分吸收系数（分吸收系数（）法，测定对乙酰氨基酚的含量。）法，测定对乙酰氨基酚的含量。【含量测定】【含量测定】取本品约取本品约40mg，精密称定，置，精密称定，置250ml量瓶中，加量瓶中，加0.4%氢氢氧化钠溶液氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，至，至100ml量瓶中，加量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外可，加水至刻度，摇匀，照紫外可见分光广度法（药典见分光广度法（药典Chp2005版附录版附录A），在），在257nm的波长处测定吸的波长处测定吸光度，按光度，按C8H9NO2的吸收系数（的吸收系数（）为）为715计算，即得。计算，即得。例：对乙酰氨基酚、片剂、咀嚼片、注射液、栓剂、胶囊、颗粒剂例：对乙酰氨基酚、片剂、咀嚼片、注射液、栓剂、胶囊、颗粒剂药物分析 Page 16PharmaceuticalAnalysis比色法芳伯氨基的重氮化偶合反应生成有色偶氮染料芳伯氨基的重氮化偶合反应生成有色偶氮染料专属性差专属性差盐酸普鲁卡因与盐酸普鲁卡因与1,2-萘醌萘醌-4-磺酸钠溶液反应生成棕红色化合物磺酸钠溶液反应生成棕红色化合物适用于盐酸普鲁卡因及其制剂的常规分析适用于盐酸普鲁卡因及其制剂的常规分析快速荧光测定 盐酸普鲁卡因胺结构中的芳伯氨基与荧胺反应，生成荧光物，盐酸普鲁卡因胺结构中的芳伯氨基与荧胺反应，生成荧光物，可在可在400nm、485nm波长处测定荧光强度波长处测定荧光强度 较重氮化法灵敏、简便，适用于普鲁卡因胺制剂的测定。较重氮化法灵敏、简便，适用于普鲁卡因胺制剂的测定。药物分析 Page 17PharmaceuticalAnalysis 以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸（及其降解产物对氨基苯甲酸（PABA），不需分离提取，准确简便。），不需分离提取，准确简便。色谱条件色谱条件（色谱柱、流动相、检测器）（色谱柱、流动相、检测器）测定方法测定方法（供试品溶液、对照品溶液的制备，进样量，计算方法）（供试品溶液、对照品溶液的制备，进样量，计算方法）高效液相色谱法(HPLC)(HPLC)药物分析 Page 18PharmaceuticalAnalysis体内药物分析应用示例：对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度测定应用示例：对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度测定色谱条件：色谱条件：Nova-PackC18柱（柱（4m,150mm3.9mm），），Nova-PackC18预柱预柱柱温：柱温：25，流动相为甲醇水（，流动相为甲醇水（50:50）流速：）流速：0.8ml/min二极管阵列检测器，检测波长二极管阵列检测器，检测波长254nm血浆样品制备：血浆样品制备：取静脉血取静脉血34ml，置含肝素抗凝剂的离心管中，离心分离，置含肝素抗凝剂的离心管中，离心分离5min(3000rpm)，上清液为待测血浆。吸取上述血浆，上清液为待测血浆。吸取上述血浆1ml，加饱和，加饱和硫酸锌溶液硫酸锌溶液1ml，沉淀蛋白后，加入乙醚，沉淀蛋白后，加入乙醚5ml涡旋混合涡旋混合1min，离心，离心20min(3000rpm)。精密吸取乙醚液。精密吸取乙醚液3.0ml于于50 氮气流吹干，冷氮气流吹干，冷 至至室温，以蒸馏水室温，以蒸馏水500l溶解残渣，取溶解残渣，取10l进样。进样。对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：配制对乙酰氨基酚甲醇溶液（配制对乙酰氨基酚甲醇溶液（10mg/ml），并用甲醇逐），并用甲醇逐级稀释成浓度为级稀释成浓度为0.01mg/ml5mg/ml的对照品溶液，的对照品溶液，4 冰箱存放冰箱存放备用。备用。意义：准确快速意义：准确快速意义：准确快速意义：准确快速 有效帮助临床医生确诊，提高医疗质量。有效帮助临床医生确诊，提高医疗质量。有效帮助临床医生确诊，提高医疗质量。有效帮助临床医生确诊，提高医疗质量。药物分析 Page 19