药物分析课件巴比妥类药物的分析学习资料.ppt

药物分析课件巴比妥类药物的分析一、结构特征与典型药物一、结构特征与典型药物n 巴巴比比妥妥类类药药物物是是巴巴比比妥妥酸酸的的衍衍生物，结构通式如下生物，结构通式如下5,55,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5,55,5取代的硫代巴比妥类药物取代的硫代巴比妥类药物1,5,51,5,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物本类药物的结构可大致分为两个部分：本类药物的结构可大致分为两个部分：1.1.环状丙二酰脲环状丙二酰脲、1,31,3二酰亚胺基团二酰亚胺基团决定巴比妥类药物的特性决定巴比妥类药物的特性2.2.取代基部分取代基部分区别各种巴比妥类药物区别各种巴比妥类药物戊巴比妥戊巴比妥返 回硫喷妥钠硫喷妥钠二、理化特征二、理化特征 1.1.性状性状 巴巴比比妥妥类类药药物物通通常常为为白白色色结结晶晶或或者者为为结结晶晶性性粉粉末末，具具有有一一定定的的熔熔点点。在在空空气气中中未未定定，加加热热都都能能升升华华。一一般般微微溶溶或或极极微微溶溶于于水水，易易溶溶于于乙乙醇醇；其其钠钠盐盐易易溶溶于于水水，难溶于有机溶剂。难溶于有机溶剂。2.2.弱酸性弱酸性 巴巴比比妥妥类类药药物物的的母母核核环环状状结结构构中中含含有有1 1，3-3-二二酰酰亚亚胺胺基基团团，能能使使其其分分子子发发生生酮酮式式-烯烯醇醇式式互互变变异异构构，在在水水溶溶液液中中发发生生二二级电离，其反应式为：级电离，其反应式为：由由于于本本类类药药物物具具有有弱弱酸酸性性（pKpKa a 值值为为7.37.38.48.4）故故可可与与强强碱碱反反应应生生成成水水溶溶性性的的盐盐类类，一一般般为为钠钠盐盐。成成盐盐反应为：反应为：由由弱弱酸酸与与强强碱碱形形成成的的巴巴比比妥妥钠钠盐盐，其其水水溶溶液液呈呈碱碱性性，加加酸酸酸酸化化后后，则则析析出出结结晶晶性性的的游游离离巴巴比比妥妥类类药药物物，可可用用有有机机溶溶剂剂将将其其提提取取出出来来。上上述述这这些些性性质质可可用用于于巴巴比比妥妥类类药药物物的的分分离离、鉴鉴别别、检检查查和和含含量量测定。测定。3.3.水解反应水解反应 巴巴比比妥妥类类药药物物及及其其钠钠盐盐的的六六元元环环状状结结构构比比较较稳稳定定，遇遇酸酸、氧氧化化剂剂、还还原原剂剂时时，一一般般情情况况下下不不会会破破裂裂，但但与与碱碱共共沸沸时时则则水水解开环，并产生解开环，并产生氨气氨气。n(1)(1)巴比妥类药物的水解巴比妥类药物的水解 主主要要是是酰酰亚亚胺胺基基团团的的性性质质，与与碱碱溶溶液液共共沸沸就就可可以以水水解解生生成成氨氨气气，生生成成的的氨氨气气可使红色石蕊试纸变蓝。反应式如下：可使红色石蕊试纸变蓝。反应式如下：JP(14)JP(14)采用这一反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥。采用这一反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥。(2)2)巴比妥类药物钠盐的水解巴比妥类药物钠盐的水解 本本类类药药物物钠钠盐盐的的水水溶溶性性比比较较大大，在在吸吸湿湿的的情情况况下下也也能能水水解解。水水解解的的速速度度与与温温度度和和pHpH值值有有关关。室室温温和和pH10pH10以以下下时时水水解解较较慢慢，pH11pH11以以上上随随着着碱碱度度的的增增加加水水解解速速度度也也随之加快。随之加快。4.4.与重金属反应与重金属反应 (1)(1)与与AgAg+的反应的反应可溶性的可溶性的白色白色(2)(2)与与CuCu2+2+的反应的反应巴比妥类药物巴比妥类药物+铜吡啶试液铜吡啶试液吡啶吡啶紫紫色色或或紫紫色沉淀色沉淀硫喷妥钠硫喷妥钠+铜吡啶试液铜吡啶试液吡啶吡啶绿色绿色 (3)(3)与与CoCo2+2+的反应的反应 这这一一反反应应的的现现象象与与铜铜盐盐反反应应的的现现象象相相似似，均均生生成成紫紫堇堇色色配配位位化化合合物物。本本反反应应要要求求在在无无水水的的条条件件下下进进行行，所所用用试试剂剂均均应应不不含含水水分分，以以使使反反应应灵灵敏敏，而而且且形形成成的的有有色色产产物物也也比比较较稳稳定定，常常用用无无水水乙乙醇醇或或甲甲醇醇；钴钴盐盐为为醋醋酸酸钴钴、硝硝酸酸钴钴或或氧氧化化钴钴；碱碱以以有有机机碱碱为为好好，一一般般采采用用异丙胺异丙胺。(4)(4)与与HgHg2+2+的反应的反应白色白色 5.5.与香草醛的反应与香草醛的反应 巴巴比比妥妥类类药药物物分分子子结结构构中中丙丙二二酰酰脲脲基基团团中中氢氢比比较较活活泼泼，可可与与香香草草醛醛在在浓浓硫硫酸酸存存在在下下发发生生缩缩合合反反应应，生生成成棕棕红红色色产产物物。BPBP（20002000）戊巴比妥采用此反应进行鉴别。）戊巴比妥采用此反应进行鉴别。加乙醇后，其反应产物可转变为加乙醇后，其反应产物可转变为棕红色棕红色 6.6.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 主主要要特特点点：随随着着电电离离级级数数的的不不同同，巴巴比比妥妥类类药药物物的的紫紫外外光光谱谱会会发发生生显显著著的的变变化化。也也就就是是说说，溶溶液液pHpH值值的的不不同同以以及及取取代代基基的的不同会对紫外光谱产生影响。不同会对紫外光谱产生影响。A.H2SO4溶液溶液（0.05mol/L）B.pH9.9缓冲液缓冲液C.NaOH溶液溶液（0.1mol/L）巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱n 在在酸酸性性溶溶液液中中，5 5，5-5-二二取取代代和和1 1，5 5，5 5三三取取代代巴巴比比妥妥类类药药物物不不电电离离，无无明明显显的的紫紫外外吸吸收收峰峰；在在pH10pH10的的碱碱性性溶溶液液中中，发发生生一一级级电电离离，形形成成共共轭轭体体系系结结构构，在在240nm240nm处处出出现现最最大大吸吸收收峰峰；在在pH13pH13的的强强碱碱性性溶溶液液中中，5 5，5-5-二二取取代代巴巴比比妥妥类类药药物物发发生生二二级级电电离离，引引起起共共轭轭体体系系延延长长，导导致致吸吸收收峰峰向向红红移移至至255nm255nm；1 1，5 5，5-5-三三取取代代巴巴比比妥妥类类药药物物，因因1 1位位取取代代基基的的存存在在，故故不不发发生生二二级级电电离离，最大吸收峰仍位于最大吸收峰仍位于240nm240nm。硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl HCl 溶液溶液 (0.1mol/L)(0.1mol/L)-NaOH NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L)(0.1mol/L)硫硫代代巴巴比比妥妥类类药药物物的的紫紫外外吸吸收收光光谱谱则则不不同同，在在酸酸性性或或碱碱性性溶溶液液中中均均有有较较明明显显的的紫紫外外吸吸收收。在在盐盐酸酸溶溶液液（0.1mol/L0.1mol/L）中中，两两个个吸吸收收峰峰分分别别 在在 287nm287nm和和 238nm238nm；在在 氢氢 氧氧 化化 钠钠 溶溶 液液（0.1mol/L0.1mol/L）中中，两两个个吸吸收收峰峰分分别别移移至至304nm304nm和和255nm255nm。另另外外，在在pH13pH13的的强强碱碱性性溶溶液液中中，硫硫代代巴巴比比妥妥类类药药物物在在255nm255nm处处的的吸吸收收峰峰消失，只存在消失，只存在304nm304nm处的吸收峰。处的吸收峰。7.7.色谱行为特征（主要用于鉴别）色谱行为特征（主要用于鉴别）（1 1）TLC:TLC:在在硅硅胶胶60F60F254254上上点点样样，氯氯仿仿-丙丙酮酮（4:14:1）为为展展开开剂剂，显显色色，在在紫紫色色背背景景上上可可观观察察到到白白色色的的斑斑点点。一一般般采采用用对对照照品品（或或标标准准品品）比比较较法法，要要求求供供试试品品斑斑点点的的R Rf f值值应应与与对对照照品品斑斑点的一致。点的一致。（2 2）HPLC:HPLC:与与对对照照品品比比较较保保留留行行为为，主主要要是是比比较保留时间和相对保留时间。较保留时间和相对保留时间。8.8.显微结晶显微结晶 巴巴比比妥妥类类药药物物可可根根据据其其本本身身或或与与某某种种试试剂剂的的反反应应产产物物的的特特殊殊晶晶型型，进进行行同同类类或或不不同同类类药药物物的的鉴鉴别别。此法亦适用于生物样品中微量巴比妥类药物的检验。此法亦适用于生物样品中微量巴比妥类药物的检验。（1 1）药药物物本本身身的的晶晶形形 取取药药物物或或从从酸酸性性溶溶液液中中，用用有有机机溶溶剂剂提提取取、经经酸酸化化、提提取取、纯纯化化后后，即即生生成成相相应应巴巴比比妥妥类类药药物物的的特特殊殊结结晶晶。在在显显微微镜镜下下观观察察结结晶晶形形状状：巴巴比比妥妥为为长长方方形形；苯苯巴巴比比妥妥在在开开始始时时呈呈球球形形，然后变成花瓣状的结晶。见课本然后变成花瓣状的结晶。见课本P101P101。（2 2）反反应应产产物物的的晶晶形形 鉴鉴于于某某些些巴巴比比妥妥类类药药物物可可与与重重金金属属离离子子反反应应，生生成成具具有有特特殊殊晶晶形形的的沉沉淀淀。因因此此，可可利利用用此此特特性性进进行行鉴鉴别别。例例如如，巴巴比比妥妥可可与与硫硫酸酸铜铜-吡吡啶啶试试液液进进行行反反应应，生生成成十十字字形形紫紫色色结结晶晶，如如课课本本P101P101图图5-45-4所所示示；苯苯巴巴比比妥妥反反应应后后，则则形形成成浅浅紫紫色色细细小小不不规规则则的的或或类类似似菱菱形形的的结结晶晶；其其他他巴巴比比妥妥类类药药物物不不能能形形成成结晶，可利用这一特性来区分之。结晶，可利用这一特性来区分之。返 回三、鉴别试验三、鉴别试验 1.1.丙二酰脲鉴别反应丙二酰脲鉴别反应 这这一一鉴鉴别别试试验验已已经经收收载载在在中中国国药药典典附附录录中中的的“一一般般鉴鉴别别试试验验”项项下下。包包括括银银盐盐反反应应和和铜铜盐盐反反应应，分分别别生生成成沉沉淀淀和和呈色，反应。呈色，反应。1.1.丙二酰脲鉴别反应丙二酰脲鉴别反应 已已经经收收载载在在中中国国药药典典附附录录中中的的“一一般般鉴鉴别别试试验验”项项下下。包包括括银银盐盐反反应应和和铜铜盐盐反反应应，分分别别生生成成沉沉淀淀和和呈呈色色，反反应应的的原原理理前前面面已已经经提到过，在此不再赘述。提到过，在此不再赘述。2.2.测定熔点测定熔点 巴巴比比妥妥类类的的钠钠盐盐酸酸 游游离离巴巴比比妥妥类类药药物物 过过滤滤 洗洗涤涤 干燥干燥 测熔点测熔点 例如：例如：司司可可巴巴比比妥妥钠钠的的鉴鉴别别 取取本本品品1g 1g 溶溶解解 强强力力搅搅拌拌 加加水水煮煮沸沸溶溶解解成成澄澄清清溶溶液液 放放冷冷 过过滤滤 结晶在结晶在7070干燥后，熔点约为干燥后，熔点约为9797。苯苯巴巴比比妥妥钠钠的的鉴鉴别别 中中国国药药典典的的方方法法：取取本本品品约约0.5g 0.5g 加加水水溶溶解解 加加过过量量稀稀盐盐酸酸 白白色色结结晶晶性性沉沉淀淀 过过滤滤 用用水水洗洗净净沉沉淀淀 105105干干燥燥，熔熔点点应为应为174174178178。水水稀醋酸稀醋酸 巴巴比比妥妥的的鉴鉴别别 取取本本品品0.5g0.5g，加加1mol/L1mol/L碳碳酸酸钠钠溶溶液液5ml5ml使使溶溶解解，加加4.5%4.5%（W/VW/V）对对硝硝基基氯氯苄苄的的乙乙醇醇溶溶液液10ml10ml，在在水水浴浴上上加加热热回回流流30min30min，放放置置1h1h后后，滤滤过过，所所得得沉沉淀淀用用乙乙醇醇进进行行重重结结晶晶后后，在在100105100105干干燥燥，测测定定衍衍生生物物的的熔熔点点，应应为为150150左左右右。巴巴比比妥妥与与对对硝硝基氯苄的衍生化反应为：基氯苄的衍生化反应为：3.3.利用特殊取代基或元素的鉴别试验利用特殊取代基或元素的鉴别试验 （1 1）利用不饱和取代基的鉴别试验）利用不饱和取代基的鉴别试验 具具有有不不饱饱和和取取代代基基的的巴巴比比妥妥类类药药物物，中中国国药药典典收收载载了了司司可可巴巴比比妥妥钠钠。其其分分子子结结构构中中含含有有烯烯丙丙基基，可可与与碘碘、溴溴或或高高锰锰酸酸钾钾作作用用，发发生生加加成成或或氧氧化化反反应应，而使碘、溴或高锰酸钾褪色而使碘、溴或高锰酸钾褪色。与与碘试液碘试液反应反应 与与高高锰锰酸酸钾钾的的反反应应 含含不不饱饱和和取取代代基基的的巴巴比比妥妥类类药药物物，具具有有还还原原性性，在在碱碱性性溶溶液液中中与与高高锰锰酸酸钾钾反应，使紫色的高锰酸钾还原成棕色的二氧化锰。反应，使紫色的高锰酸钾还原成棕色的二氧化锰。（2 2）利用芳环取代基的鉴别试验）利用芳环取代基的鉴别试验 硝硝化化反反应应 含含芳芳香香取取代代基基的的巴巴比比妥妥类类药药物物，如如取取苯苯巴巴比比妥妥或或其其钠钠盐盐，与与硝硝酸酸钾钾和和硫硫酸酸共共热热，可可发发生生硝化反应，生成黄色硝基化合物。硝化反应，生成黄色硝基化合物。黄色黄色 与与硫硫酸酸-亚亚硝硝酸酸钠钠的的反反应应 苯苯巴巴比比妥妥与与硫硫酸酸-亚亚硝硝酸酸钠钠反反应应生生成成橙橙黄黄色色产产物物，并并随随即即转转变变为为橙橙红红色色。本本反反应应确确切切的的原原理理不不清清，可可能能为为苯苯环环上上的的亚亚硝硝基基反反应应。此此鉴鉴别别试试验验为为中中国国药药典典收收载载的的方方法法，可可用用于于区区别别苯苯巴巴比比妥和其他不含苯环取代基的巴比妥类药物。妥和其他不含苯环取代基的巴比妥类药物。与与甲甲醛醛-硫硫酸酸的的反反应应 苯苯巴巴比比妥妥与与甲甲醛醛-硫硫酸酸反反应应，生生成成玫玫瑰瑰红红色色产产物物。此此鉴鉴别别方方法法也也为为中中国国药药典典收收载载，可用于区别苯巴比妥和其他巴比妥类药物。可用于区别苯巴比妥和其他巴比妥类药物。（3 3）硫元素的鉴别试验）硫元素的鉴别试验 巴巴比比妥妥类类分分子子结结构构中中含含有有硫硫的的药药物物，如如硫硫喷喷妥妥钠钠，可可将将其其硫硫元元素素转转变变为为无无机机硫硫离离子子，而而显显硫硫化化物物的的反反应应。如如硫硫喷喷妥妥钠钠在在氢氢氧氧化化钠钠试试液液中中与与铅铅离离子子反反应应生生成成白白色色沉沉淀淀；加加热热后后，沉沉淀淀转转变变成成黑黑色色的的硫硫化化铅铅。此此鉴鉴别别试试验验可可用用于于硫硫代代巴巴比比妥妥类类与与巴比妥类药物的区别巴比妥类药物的区别。返 回 四、特殊杂质检查四、特殊杂质检查 特特殊殊杂杂质质是是指指在在特特定定药药物物的的生生产产和和贮贮存存过过程程中中引引入入的的杂杂质质。药药物物中中特特殊殊杂杂质质的的检检查查主主要要是是根根据据药药物物和和杂杂质质在在物物理理化化学学性性质质上上的的差差异异来来进进行行的的。我我们们分分别别以以苯苯巴巴比比妥妥和和司司可可巴比妥钠为例。巴比妥钠为例。1.1.苯巴比妥的特殊杂质检查苯巴比妥的特殊杂质检查 （1 1）酸度（指示剂法）酸度（指示剂法）酸酸度度的的检检查查主主要要是是控控制制副副产产物物苯苯基基丙丙二二酰酰脲脲。苯苯基基丙丙二二酰酰脲脲是是由由于于中中间间体体（）的的乙乙基基化化反反应应不不完完全全，而而与与脲脲素素缩缩合合生生成成的的。因因其其分分子子中中5 5 位位碳碳原原子子上上的的氢氢受受相相邻邻丙丙羧羧基基的的影影响响，致致使使酸酸性性比比苯苯巴巴比比妥妥强强，能能使使甲甲基基橙橙指指示剂呈红色。示剂呈红色。（2 2）溶液的澄清度）溶液的澄清度 本本项项检检查查主主要要是是控控制制苯苯巴巴比比妥妥中中乙乙醇醇不不溶溶性性杂杂质质，利利用用苯苯巴巴比比妥妥酸酸这这些些杂杂质质在在乙乙醇醇溶溶液液中中的溶解度比苯巴比妥小的特性进行检查。的溶解度比苯巴比妥小的特性进行检查。（3 3）中性或碱性物质）中性或碱性物质 中中性性或或碱碱性性物物质质是是由由中中间间体体（）形形成成的的酰酰胺胺、酰酰脲脲或或分分解解产产物物等等杂杂质质，不不溶溶于于氢氢氧氧化化钠钠试试液液但但溶溶于于乙乙醚醚；而而苯苯巴巴比比妥妥具具有有酸酸性性，溶溶于于氢氢氧氧化化钠钠试试液液，故故采采用用提提取取重重量量法法测测定定其其含含量量。检检测测方方法法为为：取取本本品品1.0g 1.0g 置置分分液液漏漏斗斗中中 加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液10ml10ml溶溶解解 加加水水5ml5ml与与乙乙醚醚25ml 25ml 分分取取醚醚层层 用用水水振振摇摇洗洗涤涤3 3次次（每每次次5ml5ml）取取醚醚液液过过滤滤 滤滤液液于于105105蒸干，在蒸干，在105105干燥干燥1h1h，遗留残渣不得过，遗留残渣不得过3mg3mg。2.2.司可巴比妥钠的特殊杂质检查司可巴比妥钠的特殊杂质检查（1 1）溶液的澄清度）溶液的澄清度 此此项项检检查查主主要要是是控控制制水水不不溶溶性性杂杂质质，巴巴比比妥妥类类药药物物的的钠钠盐盐极极易易溶溶于于水水，因因此此本本品品的的水水溶溶液液应应澄澄清清，否则表明含有水不溶性杂质。否则表明含有水不溶性杂质。需需注注意意的的是是，因因本本品品的的水水溶溶液液易易与与空空气气中中的的二二氧氧化化碳碳作作用用，而而析析出出司司可可巴巴比比妥妥，故故进进行行该该项项目目检检查查时时，溶溶解解样样品品的的水水应应新新沸沸放放冷冷以以消消除除水水中中二二氧氧化化碳的干扰。碳的干扰。（2 2）中性或碱性物质）中性或碱性物质 检检查查的的杂杂质质是是合合成成过过程程中中产产生生的的中中性性或或碱碱性性副副产产物物以以及及司司可可巴巴比比妥妥钠钠的的分分解解产产物物，如如酰酰脲脲（）、酰酰胺（胺（）类化合物。）类化合物。()()返 回五、含量测定五、含量测定 银量法银量法 溴量法溴量法 巴比妥类药物的含巴比妥类药物的含 酸碱滴定法酸碱滴定法 量测定方法量测定方法 紫外分光光度紫外分光光度 提取重量法提取重量法 HPLC HPLC法、法、GCGC法法 （一）（一）银量法银量法 基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。中国药典均采用银量法测定其含量。优点优点：操作简便，专属性较强。：操作简便，专属性较强。缺点缺点：受温度影响较大；滴定终点以溶液出：受温度影响较大；滴定终点以溶液出现浑浊为终点指示难以观察。现浑浊为终点指示难以观察。1.1.原理原理 反应摩尔比：反应摩尔比：1:11:1 溶剂系统：甲醇溶剂系统：甲醇3 3无水碳酸钠无水碳酸钠 终点指示：电位法指示（终点指示：电位法指示（AgAg玻璃电极系统）玻璃电极系统）自身指示法自身指示法 2.2.测定方法与计算测定方法与计算 例如例如:异戊巴比妥及其钠盐的测定：异戊巴比妥及其钠盐的测定：取取本本品品约约0.2g 0.2g 加加甲甲醇醇40ml40ml使使溶溶解解 新新鲜鲜配配制制的的3%3%无无水水碳碳酸酸钠钠溶溶液液15ml15ml，照照电电位位法法，用用硝硝酸酸银银滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴 定定，即即 得得。每每 1ml1ml硝硝 酸酸 银银 滴滴 定定 液液（0.1mol/L0.1mol/L）相相当当于于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3（或或24.83mg24.83mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO3 3）。）。原料药：直接滴定法（容量分析法）原料药：直接滴定法（容量分析法）D%=3.3.注意事项注意事项 （1 1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制 （2 2）硝酸银滴定液应新鲜配制）硝酸银滴定液应新鲜配制 （二）（二）溴量法溴量法 凡凡在在5 5位位取取代代基基含含有有不不饱饱和和键键的的巴巴比比妥妥类类药药物物，其其不不饱饱和和键键能能与与溴溴定定量量地地发发生生加加成成反反应应，故故可可采采用用溴溴量量法法测测定定其其含含量量。中中国国药药典典收收载载的的司司可可巴巴比比妥妥钠钠采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示：采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示：（定量过量）（定量过量）Br2 +2KI 2KBr +I2（剩余）（剩余）I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6 溴滴定液的配制：溴滴定液的配制：取溴酸钾取溴酸钾3.0g3.0g与溴化钾与溴化钾15g15g，加水适量使，加水适量使之溶解成之溶解成1000ml1000ml，摇匀。，摇匀。反应的摩尔比：反应的摩尔比：1:21:2 司司可可巴巴比比妥妥钠钠的的测测定定方方法法：取取本本品品约约0.1g 0.1g 加加水水 10ml10ml振振 摇摇 使使 溶溶 解解 精精 密密 加加 溴溴 滴滴 定定 液液（0.1mol/L0.1mol/L）25ml 25ml 盐盐酸酸5ml5ml，立立即即密密塞塞并并振振摇摇1min1min，在在暗暗处处静静置置15min 15min 加加KIKI试试液液10ml 10ml 摇摇匀匀 用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每1ml1ml溴溴滴滴 定定 液液（0.1mol/L0.1mol/L）相相 当当 于于 13.01mg13.01mg的的C C1212H H1717N N2 2NaONaO3 3。原料药原料药 剩余滴定法剩余滴定法 注意事项：注意事项：（1 1）操作中要防止溴和碘的逸失。）操作中要防止溴和碘的逸失。（2 2）平行条件进行空白试验可以减少）平行条件进行空白试验可以减少溴和碘逸失带来的误差。溴和碘逸失带来的误差。（三）（三）酸碱滴定法（酸量法）酸碱滴定法（酸量法）巴巴比比妥妥类类药药物物呈呈弱弱酸酸性性，可可作作为为一一元元酸酸以以标标准准碱碱液液直直接接滴滴定定，或或在在非非水水溶溶液液中中用用强强碱碱溶溶液液直直接滴定。常用的方法如下：接滴定。常用的方法如下：1.1.在在水乙醇混合溶剂水乙醇混合溶剂中滴定中滴定 基基于于本本类类药药物物在在水水中中的的溶溶解解度度较较小小，滴滴定定时时多多在在醇醇溶溶液液或或含含水水的的醇醇溶溶液液中中进进行行，这这样样可可避避免免反反应应中中产产生生的的弱弱酸酸盐盐易易于于水水解解而而影影响响滴滴定定终终点点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。例如例如：异戊巴比妥的含量测定异戊巴比妥的含量测定 取取本本品品约约0.5g0.5g，精精密密称称定定，加加乙乙醇醇20ml20ml溶溶解解后后，加加麝麝香香草草酚酚酞酞指指示示剂剂6 6滴滴，用用氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴定定，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正，即即得得。每每1ml1ml氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3。原料药原料药 直接滴定法（有空白校正）直接滴定法（有空白校正）T T滴定度，每滴定度，每1ml1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mgmg数数 V V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（滴定时，供试品消耗滴定液的体积（mlml）V VO O滴定时，空白消耗滴定液的体积（滴定时，空白消耗滴定液的体积（mlml）f f浓度校正因子浓度校正因子 2.2.在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定 表表面面活活性性剂剂是是一一种种所所谓谓“两两亲亲”分分子子，即即其其分分子子是是由由亲亲水水基基团团和和亲亲脂脂基基团团两两部部分分组组成成。当当表表面面活活性性剂剂在在水水溶溶液液中中浓浓度度很很低低时时，基基本本上上呈呈单单分分子子状状态态存存在在，但但当当超超过过某某一一浓浓度度时时（临临界界胶胶束束浓浓度度），多多余余的的表表面面活活性性剂剂分分子子在在溶溶液液中中不不再再分分散散，而而是是聚聚集集成成有有一一定定分分子子组组成数的聚集物，称为胶束或胶团。成数的聚集物，称为胶束或胶团。胶胶束束具具有有增增溶溶作作用用，水水溶溶液液中中胶胶束束的的存存在在能能使使不不溶溶或或微微溶溶于于水水的的有有机机化化合合物物的的溶溶解解度度增增加加，并并显显著著改改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。本本法法是是在在有有机机表表面面活活性性剂剂的的胶胶束束水水溶溶液液中中进进行行滴滴定定，用用指指示示剂剂或或电电位位法法指指示示终终点点。常常用用的的有有机机表表面面活活性性剂剂有有：溴溴化化十十六六烷烷基基三三甲甲基基苄苄铵铵(CTMA)(CTMA)和氯化四癸基二甲基苄铵和氯化四癸基二甲基苄铵(TDBA)(TDBA)。采采用用本本法法测测定定巴巴比比妥妥和和苯苯巴巴比比妥妥的的结结果果的的相相对对标标准准差差（RSDRSD）均均小小于于0.3%0.3%，并并优优于于在在水水-乙乙醇混合溶液中的滴定方法。醇混合溶液中的滴定方法。3.3.非水滴定法非水滴定法 巴巴比比妥妥类类药药物物在在非非水水溶溶液液中中的的酸酸性性增增强强，用用碱碱性性标标准准溶溶液液滴滴定定时时，终终点点较较为为明明显显，可可获获得得比比较较满满意意的的结结果果。测测定定时时常常用用的的有有机机溶溶剂剂有有二二甲甲基基甲甲酰酰胺胺、甲甲醇醇、氯氯仿仿、丙丙酮酮、无无水水乙乙醇醇、苯苯、吡吡啶啶、甲甲醇醇-苯苯（15158585）、乙乙醇醇-氯氯仿仿（1 11010）等等；常常用用的的滴滴定定剂剂有有甲甲醇醇钾钾（钠钠）的的甲甲醇醇（或或乙乙醇醇）溶溶液液、氢氢氧氧化化四四丁丁基基铵铵的的氯氯苯苯溶溶液液等等；常常用用的的指指示示剂剂为为麝麝香香草草酚酚蓝蓝等等，也也可可用用玻玻璃璃-甘甘汞汞电电极极系系统，以电位法指示终点。统，以电位法指示终点。（四）紫外分光光度法（四）紫外分光光度法 巴巴比比妥妥类类药药物物在在酸酸性性介介质质中中几几乎乎不不电电离离，无无明明显显的的紫紫外外吸吸收收。但但在在碱碱性性介介质质中中电电离离为为具具有有紫紫外外吸吸收收特特征征的的结结构构，因因而而可可采采用用紫紫外外分分光光光光度度法法测测定定其其含含量量。本本法法灵灵敏敏度度高高，专专属属性性强强，广广泛泛应应用用于于巴巴比比妥妥类类药药物物的的原原料料及及其其制制剂剂的的含含量量测测定定，以以及及固固体体制制剂剂的的溶溶出出度度和和含含量量均均匀匀度度检检查查，也也常常用用于于体体内内巴巴比比妥类药物的检测。妥类药物的检测。1.1.直接测定的紫外分光光度法直接测定的紫外分光光度法 本本法法是是将将供供试试品品溶溶解解后后，根根据据溶溶液液的的pHpH，在在最最大大吸吸收收波波长长（maxmax）处处，直直接接测测定定对对照照品品溶溶液液和和供供试试品品溶溶液液的的吸吸收收度度，再再计计算算药药物物的的含含量量。中中国国药药典典对对注注射射用用硫硫喷喷妥妥钠钠的的含含量测定采用本法。量测定采用本法。Beer-Lambert Beer-Lambert定律定律 A=-A=-T=ElC ACT=ElC AC 单组分定量的方法单组分定量的方法：1.1.吸收系数法（绝对法）吸收系数法（绝对法）2.2.标准曲线法标准曲线法 3.3.对照法对照法 教材中以注射用硫喷妥钠的含量测定为例：教材中以注射用硫喷妥钠的含量测定为例：取取装装量量差差异异项项下下的的内内容容物物，混混合合均均匀匀，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于硫硫喷喷妥妥钠钠0.25g0.25g），置置500ml500ml量量瓶瓶中中，加加水水稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，量量取取此此溶溶液液用用0.4%0.4%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含5g5g的的溶溶液液；另另取取硫硫喷喷妥妥对对照照品品，加加0.4%0.4%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含5g5g的的溶溶液液。照照分分光光光光度度法法，在在304nm304nm波波长长处处测测定定吸吸收收度度，根根据据每每支支的的平平均装量计算。每均装量计算。每1mg1mg硫喷妥相当于硫喷妥相当于1.091mg1.091mg的的C C1111H H1717N N2 2NaSNaS。2.2.提取分离后的紫外分光光度法提取分离后的紫外分光光度法 提提取取分分离离的的主主要要目目的的是是消消除除干干扰扰物物质质对对测测定定的的影影响响。根根据据巴巴比比妥妥类类药药物物具具有有弱弱酸酸性性，在在氯氯仿仿等等有有机机溶溶剂剂中中易易溶溶，而而其其钠钠盐盐在在水水中中易易溶溶的的特特点点。测测定定时时取取供供试试液液适适量量，加加酸酸酸酸化化后后，用用氯氯仿仿提提取取巴巴比比妥妥类类药药物物。氯氯仿仿提提取取液液加加pH7.2pH7.27.57.5缓缓冲冲溶溶液液，振振摇摇，分分离离弃弃去去水水相相缓缓冲冲液液层层。再再用用0.45mol/L0.45mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液提提取取氯氯仿仿层层中中的的巴巴比比妥妥类类药药物物，将将碱碱提提取取液液调调节节至至适适宜宜pHpH，然然后选择相应的吸收波长进行测定。后选择相应的吸收波长进行测定。USP USP（2424）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法 样样品品 溶溶解解 酸酸化化 氯氯仿仿提提取取 精精密密量量取取适适量量氯氯仿仿液液 蒸蒸气气浴浴上上挥挥干干 乙乙醇醇、pH9.6pH9.6缓缓冲冲液液 供试品溶液（样品液）供试品溶液（样品液）苯苯巴巴比比妥妥对对照照品品 乙乙醇醇、pH9.6pH9.6缓缓冲冲液液 标标准准溶溶液液（对照液）（对照液）240nm 240nm为测定波长为测定波长多组分混合物不经分离的定量方法多组分混合物不经分离的定量方法 计算分光光度法计算分光光度法n解方程组法解方程组法n双波长分光光度法双波长分光光度法n差示分光光度法差示分光光度法n导数光谱法导数光谱法n三波长法三波长法 3.3.差示紫外分光光度法（差示紫外分光光度法（A A法法）本本法法是是利利用用巴巴比比妥妥药药物物在在不不同同pHpH值值溶溶液液中中的的电电离离级级数数不不同同，因因而而产产生生紫紫外外吸吸收收光光谱谱的的情情况况不不同同，以以此此为为依依据据设设计计测测定定方方法法。该该法法常常用用于于巴巴比比妥妥类类药药物物的的制制剂剂分分析，也可用于体内巴比妥类药物的监测。析，也可用于体内巴比妥类药物的监测。（1 1）测定方法测定方法 取取两两份份相相等等的的供供试试溶溶液液，分分别别制制成成两两种种不不同同的的化化学学环环境境（如如在在其其一一中中加加酸酸、碱碱或或缓缓冲冲液液改改变变溶溶液液的的pHpH，或或在在其其一一中中加加能能与与供供试试品品发发生生某某种种化化学学反反应应的的试试剂剂），然然后后将将两两者者分分别别稀稀释释至至同同样样浓浓度度，一一份份置置样样品品池池中中，另另一一份份置置参参比比池池中中，于于适适当当波波长长处处，测测其其吸吸收收度的差值（度的差值（A A值）。值）。（2 2）必要条件必要条件 a.a.供供试试品品在在不不同同的的化化学学环环境境中中以以不不同同的的分分子子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。b.b.干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。光谱行为不变。（3 3）定量依据）定量依据 供供试试品品在在两两种种不不同同的的化化学学环环境境中中分分别别以以x x、y y表示，干扰物用表示，干扰物用z z表示。表示。也也就就是是说说，吸吸收收度度差差值值（A A）仅仅与与待待测测组组分分的的浓浓度度有有关关，而而与与干干扰扰组组分分无无关关，即即干干扰扰组组分分的的干干扰扰被被消除。消除。可用对照法或标准曲线法定量可用对照法或标准曲线法定量（4 4）特点特点 保保留留了了通通常常的的分分光光光光度度法法简简易易快快速速、直直接接读读数数的的优优点点，又又无无需需事事先分离，并能消除干扰。先分离，并能消除干扰。以复方巴比妥散中苯巴比妥的测定为例：以复方巴比妥散中苯巴比妥的测定为例：利利用用复复方方苯苯巴巴比比妥妥散散中中的的阿阿司司匹匹林林和和水水杨杨酸酸等等成成分分在在pH5.91pH5.91和和8.048.04条条件件下下的的紫紫外外吸吸收收光光谱谱重重合合，A A=0=0，而而苯苯巴巴比比妥妥在在240nm240nm波波长长处处，在在pH5.91pH5.91和和8.048.04条条件件下下A A的的值值最最大大。因因此此A A大大小小只只与与苯苯巴巴比比妥妥浓浓度度成成正正比比，是是该该法法用用于于苯苯巴巴比比妥妥的定量依据。的定量依据。返 回n思考题思考题n1.1.如何根据巴比妥类药物的结构特征来选如何根据巴比妥类药物的结构特征来选择分析方法？择分析方法？n2.2.巴比妥类药物的紫外吸收光谱有何特征巴比妥类药物的紫外吸收光谱有何特征？n3.3.巴比妥类药物的含量测定方法及其原理巴比妥类药物的含量测定方法及其原理是什么？是什么？练习与思考 n练习题练习题nAA型题型题 1.1.苯巴比妥中检查的特殊杂质是苯巴比妥中检查的特殊杂质是 A.A.巴比妥巴比妥 B.B.间氨基酚间氨基酚 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.中性或碱性物质中性或碱性物质 E.E.氨基酚氨基酚 2.2.司可巴比妥钠中国药典规定的含量测司可巴比妥钠中国药典规定的含量测定方法为定方法为 A.A.中和法中和法 B.B.溴量法溴量法 C.C.碘量法碘量法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.E.高锰酸钾法高锰酸钾法3.3.于于NaNa2 2COCO3 3溶溶液液中中加加AgNOAgNO3 3试试液液，开开始始生生成成白白色色沉沉淀淀经经振振摇摇即即溶溶解解，继继续续加加AgNOAgNO3 3试试液液，生成的沉淀则不再溶解，该药物应是生成的沉淀则不再溶解，该药物应是A.A.盐酸可待因盐酸可待因 B.B.咖啡因咖啡因C.C.新霉素新霉素 D.D.维生素维生素C CE.E.异戊巴比妥异戊巴比妥4.4.与与NaNONaNO2 2H H2 2SOSO4 4反反应应生生成成橙橙黄黄至至橙橙红红色产物的药物是色产物的药物是A.A.苯巴比妥苯巴比妥B.B.司可巴比妥司可巴比妥C.C.巴比妥巴比妥D.D.硫喷妥钠硫喷妥钠E.E.硫酸奎宁硫酸奎宁 5.5.中中国国药药典典（20002000年年版版）采采用用AgNOAgNO3 3滴滴定定液液（0.1 0.1 mol/Lmol/L）滴滴定定法法测测定定苯苯巴巴比比妥妥的的含含量时，指示终点的方法应是量时，指示终点的方法应是A.KA.K2 2CrOCrO4 4溶液溶液B.B.荧光黄指示液荧光黄指示液C.Fe(III)C.Fe(III)盐指示液盐指示液D.D.电位法指示终点法电位法指示终点法E.E.永停滴定法永停滴定法 6.6.银银量量法法测测定定苯苯巴巴比比妥妥钠钠含含量量时时,若若用用自自身身指指示示法法来来判判断断终终点点,样样品品消消耗耗标标准准溶液的摩尔比应为溶液的摩尔比应为A.1:2 A.1:2 B.2:1B.2:1C.1:1C.1:1D.1:4D.1:4E.E.以上都不对以上都不对7.7.下列巴比妥类药物水溶液中酸性最小下列巴比妥类药物水溶液中酸性最小的药物是的药物是A.A.苯巴比妥苯巴比妥B.B.巴比妥巴比妥C.C.异戊巴比妥异戊巴比妥D.D.异戊巴比妥钠异戊巴比妥钠E.E.以上都不对以上都不对 8.8.用用酸酸量量法法测测定定巴巴比比妥妥类类药药物物含含量量时时，适适用的溶剂为用的溶剂为A.A.碱性碱性B.B.水水C.C.酸水酸水D.D.醇水醇水E.E.以上都不对以上都不对9.9.司司可可巴巴比比妥妥钠钠（分分子子量量为为260.27260.27）采采用用溴