项目四金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色.ppt

检样25g(ml)+225ml75氯化钠肉汤BHI肉汤血平板，Baird-parker平板涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告36 1 24hr 36 1 24hr 36 1 24hr 呈金黄色，有呈金黄色，有时也为白色，大而突时也为白色，大而突起，圆形，不透明，起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环。表面光滑，有溶血环。Why?Why?血平板鉴定血平板鉴定-菌落形态特征菌落形态特征 灰色到黑玉色，圆灰色到黑玉色，圆形，光滑突起，湿润，形，光滑突起，湿润，边缘常为淡色（米黄色边缘常为淡色（米黄色或灰色），周围为一混或灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一浊带，在其外缘常有一透明圈。透明圈。Why?Why?Baird-parkerBaird-parker鉴定鉴定-菌落形态特征菌落形态特征革兰氏阳性菌，球形，组成葡萄状，无芽胞，革兰氏阳性菌，球形，组成葡萄状，无芽胞，无荚膜，直径约为无荚膜，直径约为0.5 m0.5 m1 m1 m鉴定鉴定-革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检试管法试管法鉴定鉴定-血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验：挑取、血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker Baird-Parker 平板或血平板或血平板上可疑菌落平板上可疑菌落1 1 个或以上，分别接种到个或以上，分别接种到5 mL BHI5 mL BHI和营养琼脂小斜面，和营养琼脂小斜面，36 36 1 1 培养培养18 h18 h24 h24 h。吸取吸取1 1：4 4兔血浆兔血浆0.5ml0.5ml放入灭菌试管中，再加入培放入灭菌试管中，再加入培养后的的养后的的BHIBHI肉汤肉汤0.5ml0.5ml，振荡均匀，放在，振荡均匀，放在36361 水水浴锅，每半小时观察一次，至少观察浴锅，每半小时观察一次，至少观察6小时。小时。阳性反应阴性反应不凝固不凝固少量、少量、零散凝零散凝固固明显的块明显的块状凝固状凝固巨大块巨大块凝固凝固完全凝固，完全凝固，倒置不流动倒置不流动项目四项目四 金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验革兰氏染色革兰氏染色一、革兰氏染色步骤一、革兰氏染色步骤涂片 热固定初染媒染脱色 复染革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性菌菌体体呈呈红红色色者为者为G G番番红红复复染染番番红红复复染染菌菌体体仍仍呈呈深深紫紫色者为色者为G G+乙乙醇醇(或或丙丙酮酮)脱色脱色细细 菌菌涂片涂片草草酸酸铵铵结结晶晶紫初染紫初染卢卢哥哥氏氏碘碘液媒染液媒染 二、二、革兰氏染色原理革兰氏染色原理 G G菌细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障菌细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。碘复合物在细胞膜上。呈紫色。GG菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。项目项目革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌项目项目革兰阳革兰阳性菌性菌革兰阴革兰阴性菌性菌强度强度厚度厚度肽聚糖层数肽聚糖层数肽聚糖含量肽聚糖含量糖类含量糖类含量坚韧坚韧20-80nm20-80nm15-5115-51层层占细胞壁干占细胞壁干重的重的50%-80%50%-80%约约45%45%较疏松较疏松10-15nm10-15nm1-31-3层层占细胞壁干占细胞壁干重的重的10%-20%10%-20%15%-20%15%-20%脂类含量脂类含量磷壁酸磷壁酸外膜外膜脂蛋白脂蛋白脂多糖脂多糖1%-4%1%-4%+-11%-22%11%-22%-+G+G+和和G G细胞壁化学组成及结构比较细胞壁化学组成及结构比较 1 1、G+G+细菌的细胞壁。厚而致密，由肽聚糖和细菌的细胞壁。厚而致密，由肽聚糖和磷壁酸组成，以金黄色葡萄球菌为代表。磷壁酸组成，以金黄色葡萄球菌为代表。2 2、G-G-细菌的细胞壁。分两层，外层为脂蛋细菌的细胞壁。分两层，外层为脂蛋白和脂多糖层，内层为肽聚糖层，以大肠白和脂多糖层，内层为肽聚糖层，以大肠杆菌为代表。杆菌为代表。三、常用的染色方法三、常用的染色方法1 1、染色的基本原理、染色的基本原理主要是通过细胞及细胞物质对燃料的毛细现象、渗主要是通过细胞及细胞物质对燃料的毛细现象、渗透、吸附等物理因素，以及各种化学反应进行的。透、吸附等物理因素，以及各种化学反应进行的。2 2、染料种类、染料种类染料按其组成成分可以分为天然染料和人工染染料按其组成成分可以分为天然染料和人工染料料染料按其电离后染料离子所带电荷的性质分为染料按其电离后染料离子所带电荷的性质分为酸性染料、碱性染料、中性（复合）染料和单酸性染料、碱性染料、中性（复合）染料和单纯染料四大类纯染料四大类 3 3、染色方法、染色方法（1 1）单染色法）单染色法 用一种染料使微生物染色，如美蓝、用一种染料使微生物染色，如美蓝、孔雀绿、碱性番红、结晶紫和中性红等。孔雀绿、碱性番红、结晶紫和中性红等。（2 2）复染色法）复染色法 又称鉴别染色法又称鉴别染色法 是用两种或两种以是用两种或两种以上染料进行染色，有协助鉴别微生物的作用。上染料进行染色，有协助鉴别微生物的作用。最常用的鉴别染色法为革兰氏染色法。最常用的鉴别染色法为革兰氏染色法。（3 3）特殊染色法）特殊染色法 针对一些特殊情况而进行染色的针对一些特殊情况而进行染色的方法。方法。