高迁移率族蛋白B1在伴有神经浸润胃癌组织中的表达及意义分析.docx

高迁移率族蛋白B1在伴有神经浸润胃癌组织中的表达及意义分析拓婷，朱飞虎延安市人民医院肛肠科 陕西延安716000摘要目的分析高迁移率族蛋白Bl (HMGB1)在伴有神经浸润(PNI)的胃癌 组织中的表达及意义。方法 回顾性分析我院2017年2月至2019年2月期间收 治的82例胃癌患者，根据病理是否合并PNI将患者分别纳入观察组(n=38)和 对照组(n=44),比较两组临床资料。采用免疫组化方法分析癌组织HMGB1的表 达，比较阳性组与阴性组临床病理特点，包括性别、年龄、肿瘤大小、TNM分 期及是否合并淋巴结转移。结果观察组合并糖尿病的比例明显高于对照组 (63.16%和38.64%),差异有统计学意义(P<0.05) ； HMGB1在伴有PNI的 胃癌组织中阳性率为73.68%,高于未伴有PNI胃癌组织47.73%,差异有统计学 意义(PV0.05)；在合并PNI胃癌患者中，HMGB1阳性组肿瘤直径与3cm、TNM IH-IV、淋巴结转移的比例分别为82.14%、78.57%、92.86%,均明显高于阴性组 50.00%> 40.00%> 60.00%,差异有统计学意义(PV0.05)。结论合并糖尿病的 胃癌患者可能更容易发生神经浸润，而PNI胃癌组织中HMGB1的表达高于未 伴有PNI的胃癌组织，且其与肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移关系密切。关键词胃癌；神经浸润；高迁移率族蛋白B1；临床病理；淋巴结转移The expression and significance of HMGB1 in gastric cancer with perineural invasionTuo Ting , Zhu FeihuAnorectal Department of Yan'an people's Hospital, Yan'an, Shaanxi, 716000Abstract Objective To analyze the expression and significance of HMGB1 in gastric cancer with perineural invasion(PNI). Methods 82 patients with gastric cancer treated in our hospital from February 2017 to February 2019 were analyzed retrospectively. According to whether with PNI , they were included into the observation group (n = 38) and the control group (n=44), and the clinical data of the two groups were compared. The expression of HMGB 1 in cancer tissue was analyzed by immunohistochemistry. The clinicopathological characteristics of positive group and negative group were compared, including sex, age, tumor size, TNM stage and lymph node metastasis. Results The proportion of diabetes in the observation group was significantly higher than that in the control group (63.16% and 38.64%),the difference was of statistically significant (P < 0.05);The positive rate of HMGB1 in gastric cancer with PNI was 73.68%, which was higher than 47.73% in gastric cancer without PNI (P < 0.05);In gastric cancer with PNI,tumor diameter 2 3cm, TNM III - IV, lymph node metastasis in the HMGB1 positive group was 82.14%, 78.57%, 92.86%, respectively,significantly higher than that of the negative group (50.00%, 40.00%, 60.00%),the difference was of statistically significant (P < 0.05). Conclusion Gastric cancer patients with diabetes mellitus are more likely to have PNI, and the expression of HMGB1 in gastric cancer with PNI is higher than that in gastric cancer without PNI, which is closely related to tumor size, clinical stage and lymph node metastasis. Keywords Gastric cancer; Perineural invasion; HMGB1; Clinicopathology; Lymph node metastasis胃癌是临床上消化道肿瘤中最常见的类型，调查显示胃癌的年发生率为 138.6/10万，且其病死率在所有癌症致死病因中仅次于呼吸系统恶性肿瘤而居第 2位。胃癌的临床特点包括发病率及转移率高、病死率高，早期诊断率低等， 其治疗效果不佳也多与转移率高关系密切。神经浸润(PNI)目前被认为是一种 新的肿瘤转移途径，是指肿瘤周围神经被侵及、包绕，或者瘤细胞直接进入到神 经纤维间隙，从而造成肿瘤的转移扩散。高迁移率族蛋白Bl (HMGB1)是一 种仅合成或表达于增殖细胞中的核内多肽，既往临床重多重视其在炎症反应中的 作用，现在认识到其在多种肿瘤组织尤其是转移瘤中具具有高表达的特点，可通 过促进肿瘤细胞侵袭迁移而引起肿瘤的转移、进展。目前关于胃癌PNI与 HMGB1关系的临床研究尚不多见，因此本研究分析了 HMGB1在伴有PNI的胃 癌组织中的表达及临床意义，现报告如下。1资料与方法一般资料回顾性分析我院2017年2月至2019年2月期间收治的82例胃癌 患者，纳入标准：年龄218岁；术前均经病理检查(脱落细胞学或胃镜)证 实为胃癌，术后病理进一步证实；术前未接受放化疗及生物免疫等手段治疗；临床及病理资料完整。排除标淮：合并严重的免疫系统疾病以及长期应用免 疫抑制剂治疗者；合并其他脏器、系统的严重病变，或其合并其他恶性肿瘤的 患者。82例患者中包括男性的患者49例，女性的患者33例。患者的年龄52-84 岁，平均年龄为64士 10.2岁。1.1 研究方法患者均行胃癌根治术治疗，收集患者的的临床及病理资料，根据 术后病理结果将伴有PNI的38例患者纳入观察组，余44例未伴有PNI者纳入 对照组。比较两组患者的临床资料包括性别、年龄、饮酒、吸烟以及高血压、糖 尿病等。饮酒标准：饮酒史3年，100ml/d；吸烟标准:吸烟史5年，220 支/d。同时测定所有患者的胃癌组织HMGB1的表达，根据表达是否阳性将患者 分别纳入阳性组、阴性组，比较两组患者的临床病理特征包括性别、年龄、临床 分期及肿瘤大小、临床分期、是否有淋巴结转移等。其中临床分期的依据为国际 抗癌联盟TNM分期标准（2010年第七版）。1.2 HMGB1表达的测定1.2.1 免疫组织化学方法术毕将胃癌组织送检制备石蜡切片，然后进行免疫组化 染色。采用Envision两步法进行，阴性对照选择PBS替代一抗。首先将石蜡包 埋的组织以411m进行连续切片；脱蜡使用二甲苯，然后再使用梯度酒精进行逐 级水化；为了阻断内源性过氧化物酶活性，将其放置在3%双氧水、甲醇室温下 予以作用30 min；然后使用乙二胺四乙酸缓冲液进行抗原热修复，时间为90s； 加上一抗HMGB1,放置在4。条件下进行孵育过夜，再使用磷酸盐缓冲液 （PBS）进行充分的冲洗；加入Envision二抗,在室温下进行孵育，时间为30 min； 在光镜控制下使用二氨基联苯胺（DAB）进行显色，使用苏木精进行复染，然 后进行一系列的脱水、风干及封片步骤，封片材料为中性树脂。其中鼠单克隆抗 体HMGB1由北京博奥森生物技术有限公司提供，二抗、DAB、PBS等试剂由 福州迈新公司提供。1.2.2 阳性结果的判读使用双盲法即每张切片均由两名病理科医生进行独立读 片，分别作出判断。HMGB1蛋白阳性表现为显微镜下呈现为呈棕色，位置在细 胞核或者细胞质内；具体为在显微镜下观察显色癌细胞比例和染色强度，然后进 行半定量化评分，标准：肿瘤组织内未发现棕色染色组织，或W10%细胞膜/浆/核染色时判定为G)；肿瘤组织出现>10%细胞膜/浆/核部分染色，可以是弱、中、 高度完全染色判断为阳性。1.3 统计学方法 使用SPSS19.0统计学软件，方法选择t检验、卡方检验，均以 P<0.05为差异有显著性。2结果PNI及无PNI胃癌患者临床资料的比较 观察组与对照组在性别、年龄、饮酒、吸烟及合并高血压方面比较，差异无显著性(P>0.05)；但是观察组合并糖尿病的比例明显高于对照组，差异有显著性(P<0.05) o见表1表1神经浸润及无神经浸润胃癌患者临床病理资料的比较组别 例数 性别(男) 年龄(岁) 饮酒吸烟n(%)糖尿病 高血压观察组3822 (57.89)63.78±9.1317(44.74)16 (42.11)24 (63.16)16 (42.11)对照组4427 (61.36)65.20 ±10.0718(40.91)18 (40.91)17 (38.64)15 (34.09)t/ X 2 值0.3710.6650.1220.0124.9040.557>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05<0.05>0.05HMGB1在观察组及对照组中的表达 HMGB1蛋白表达在显微镜下细胞质或细胞核内呈现棕色，本研究中HMGB1在伴有PNI的胃癌组织中有28例出现 阳性表达，阳性率为73.68%(28/38),高于未伴有PNI胃癌组织的47.73%(21/44), 差异有统计学意义(x2=5.173, P<0.05) o2.1 伴有PNI胃癌患者HMGB1表达与临床病理学指标的关系在伴有PNI胃癌 中，HMGB1阳性组与阴性组比较，年龄、性别无显著性(P>0.05)；但是阳性 组肿瘤直径23cm、TNMIII-IV>淋巴结转移的比例均明显高于阴性组，差异有 显著性(P<0.05)；见表2。表2伴有PNI胃癌患者HMGB1表达与临床病理学指标的关系P 值>0.05>0.05<0.05<0.05<0.05组另IJ例数性别(男)n(%)年龄(岁)肿瘤大小n(%)TNMn(%)淋巴结转移n(%)23cm<3cmI -IIII1-IV阳性组2816(57.14)64.26 ±7.5423(82.14)5(17.86)6(21.43)22(78.57)26(92.86)阴性组106(60.00)63.18±8.105(50.00)5(50.00)6(60.00)4(40.00)6(60.00)t/x 2 值0.1870.3823.9275.0745.9833讨论胃癌在我国是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，近20年来随着环境污染的 加剧、生活习惯及饮食结构的改变，其发病率出现逐年上升的趋势，已经成为威 胁我国居民健康及生命安全的重要疾病。胃癌患者早期常常缺乏典型症状，且 恶性程度高，一旦发病则出现快速进展，患者就诊时常常处于中晚期。因此，虽 然近年来手术及介入、药物等胃癌治疗措施均有了较大的进展，但是胃癌的临床 疗效仍然不满意，患者预后较差6刀。胃癌恶性程度高最主要的原因在于解剖上 胃具有丰富的血供和淋巴管，而胃癌细胞的侵袭迁移能力较强，因而癌细胞容易 经过血道及淋巴循环等途径进行转移。近些年来，恶性肿瘤神经浸润的机制及意 义不断被深入研究，临床上也越来越重视PNI在恶性肿瘤中的重要意义网。目前 研究认为PNI是恶性肿瘤的一种新的转移方式，可能独立于既往的血道转移、 淋巴转移、种植转移以及直接转移，且与恶性肿瘤的预后关系密切。胃周围不仅 存在者丰富的血供和淋巴，尚分布着来自腹腔神经丛、迷走神经等内脏神经；且 癌周围也存在在胃癌细胞及其分娩的细胞因子和受体、基质细胞及周围基质、神 经细胞，这为胃癌细胞向周围神经浸润提供了必要的条件和基础微环境。目前胃 癌PNI的具体机制尚不明确，但是研究指出合并PNI的胃癌患者其预后更差叫 本研究对比了合并PNI的观察组与未合并PNI的对照组的临床资料，发现两组 在性别、年龄、饮酒、吸烟及合并高血压方面比较，差异无显著性(P>0.05)； 但是观察组合并糖尿病的比例明显高于对照组，差异有显著性(P<0.05)。既 胃癌PBI的发生与年龄、性别及饮酒、吸烟、高血压等无明显相关性，但是糖尿 病与PNI的发生可能存在关联，说明胃癌患者如合并糖尿病则增大了其发生神 经浸润的风险。分析其原因可能是因为糖尿病患者长期存在高血糖状态加重了其 神经病变，进而导致了神经浸润的发生助。高迁移率族蛋白B1常位于真核生物的细胞核内，是一种生物学功能多样的 核内蛋白。既往认为HMGB1在细胞外具有强大的致炎效应，且被认为是新型的 炎性细胞因子之一。随着对HMGB1研究的深入，发现HMGB1在核内主要 与DNA结合，不仅可以起到稳定核小体结构的作用，还与DNA的一系列生命活动关系密切如参与重组、修复、调控等。此外，HMGB1与肿瘤关系密切，通 过结合不同受体可以发挥不同作用如促进基质降解、诱发新生血管形成、调节神 经轴突生长能力等，进而促进肿瘤的发生、发展以及肿瘤的转移等过程1。 Chuang等观察了胃癌患者血清HMGB1浓度与临床与病理指标的关系，发现 患者血清HMGB1水平与胃癌肿块大小、淋巴结转移及患者的预后均存在显著的 相关性。在本研究中，合并PNI的胃癌组织HMGB1的阳性表达率为73.68%, 显著高于未伴有PNI胃癌组织的47.73%,差异有统计学意义(P<0.05)。另一 方面，在伴有PNI胃癌中，HMGB1阳性组与阴性组比较，年龄、性别无显著性 (P>0.05)；但是阳性组其肿瘤直径23cm、TNMHI-W、淋巴结转移的比例均 明显高于阴性组，差异有显著性(P<0.05),这进一步提示HMGB1可能参与 了胃癌PNI的发生与发展。综上所述，合并糖尿病的胃癌患者可能更容易发生神经浸润；而神经浸润胃 癌组织中HMGB1的表达高于未伴有PNI的胃癌组织，且其与肿瘤大小、临床 分期及淋巴结转移关系密切，有望成为胃癌的靶向治疗及预后评估中的新的指 标。参考文献1 Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statisticJ.CAC ancer J Clin,2012,61(2):69-90.陆俊，黄昌明,郑朝辉，等.腹腔镜根治性全胃切除术治疗老年原发性胃癌患者的 倾向评分配比预后分析J.中华消化外科杂志,2016,15(3):221-227.3 丁珊珊，杨冰.神经周围浸润在早期宫颈癌中的意义J.实用医学杂 志,2015,31(24):4105-4107.4陆长艳，王忠昊，张昊，等.肝细胞癌患者行TACE前后HMGB1表达变化及其对 预后的影响J.国际肿瘤学杂志,2018,45(5):277-280.5尹红，罗保平,李春亭，等.腹腔镜辅助与开腹远端胃癌根治术对机体血清炎性 因子水平及近期疗效的影响J.海南医学,2017,28(10):1575-1577.6高欣欣，王新.影响胃癌患者预后的独立危险因素研究进展J.肿瘤预防与治 疗,2016,29(2):123-127.7韩新影，刘红正,李秀清，等.胃癌组织中VGLL4、YAP蛋白表达与胃癌患者预后的关系J.海南医学,2017,28(23):3883-3886.8张树朋，梁月祥,吴亮亮，等.神经浸润对胃癌患者生存预后的影响J.中国肿瘤 临床,2019,46(7):330-336.9陈路川，魏晟宏,叶再生，等.神经浸润对1801例胃癌术后预后的影响J.中华消 化外科杂志,2017,16(3):262-268.10贾如江，侯丽艳,兰春根，等.高血糖对胰腺癌患者神经浸润及预后的影响J.中 华肝胆外科杂志,2017,23(2): 136-137.11王伶利，晏维，付妤.高迁移率族蛋白B1在肠道炎症和肿瘤中的作用J.临床 消化病杂志,2015,27(1):49-51.12王艳军，王高雄,黄天从，等.高迁移率族蛋白1通过调控Erkl/2、CyclinDl及 MMP14蛋白促进肝内胆管细胞癌进展J.第三军医大学学报,2019,41(5):430-436. 13杨超，孙航，吴传新.HMGB1在肝脏炎症微环境及肝细胞癌发生发展中的作用 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