大肠杆菌的培养和分离.ppt

大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离1 1、微生物、微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物一、微生物的基础知识一、微生物的基础知识(1)(1)定义定义(2)种类种类(3)用途用途2、菌落、菌落（1）概念）概念（2）菌落是鉴定菌种的重要依据。）菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌细菌的菌落特征因落特征因种而异种而异 3 3、培养基、培养基（1 1）成分）成分细菌培养：蛋白胨、酵母提取液、氯化钠细菌培养：蛋白胨、酵母提取液、氯化钠霉菌培养：无机物或添加蔗糖的豆芽汁霉菌培养：无机物或添加蔗糖的豆芽汁（2 2）种类）种类分离分离(纯化纯化)细菌、细菌、保存菌种保存菌种固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基凝固剂凝固剂琼脂琼脂作用作用扩大培养细菌扩大培养细菌液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔4 4、生活环境、生活环境霉菌：中性偏酸霉菌：中性偏酸 细菌：中性偏碱细菌：中性偏碱二、无菌技术二、无菌技术1.1.无菌无菌操作的目的操作的目的 防止培养基被其他微生物污染防止培养基被其他微生物污染(及避免操作者被微生物感染及避免操作者被微生物感染)2、无菌技术包括、无菌技术包括(1)(1)将实验器具和培养基：将实验器具和培养基：高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌 (2)(2)接种环接种环(针针)、试管口、试管口:灼烧灼烧 灭菌灭菌 (3)实验操作空间：酒精实验操作空间：酒精+紫外线紫外线 消毒消毒（接种室（接种室(箱箱)、超净工作台）、超净工作台）(4)(4)双手双手:酒精酒精 消毒消毒 (5)实验操作应在实验操作应在 酒精灯火焰酒精灯火焰 旁进行旁进行(6)避免已灭菌处理的材料用具与避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品周围物品 相接触。相接触。(7)(7)棉塞棉塞(封口膜封口膜):):只让空气通过，而空只让空气通过，而空气中的微生物不能通过。气中的微生物不能通过。灼烧灭菌灼烧灭菌高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。致病微生物的过程。3.3.消毒与灭菌消毒与灭菌（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。作中最普通也是最重要的技术。三、分离细菌方法三、分离细菌方法2、涂布分离法、涂布分离法1、划线分离法、划线分离法 1、划线分离法、划线分离法2、涂布分离法、涂布分离法2、涂布分离法、涂布分离法2、培养：在、培养：在LB液体培养基上扩大培养液体培养基上扩大培养四、大肠杆菌的培养和分离1、大肠杆菌(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌(2)用途：基因工程技术中被广泛采用的工具3 3、分离、分离 灭菌灭菌 倒平板倒平板 培养培养 划线分离划线分离 LBLB液体和固体培养基及培养皿高压液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌蒸汽灭菌将固体培养基倒入将固体培养基倒入4 4个灭菌后的培养个灭菌后的培养皿中，制备平面培养基皿中，制备平面培养基在装有液体培养基的三角瓶中接种在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养大肠杆菌，培养12h12h平板划线法平板划线法培养皿倒置，培养皿倒置，37恒温培养恒温培养1224小时小时倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板操作倒平板操作接种到固体斜面培养基，菌落长成后，置于接种到固体斜面培养基，菌落长成后，置于44冰箱保存。冰箱保存。4 4、保存菌种、保存菌种 微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养