氨基酸的分离鉴定-滤纸层析法.ppt

氨基酸的分离鉴定氨基酸的分离鉴定滤滤纸层析法纸层析法 通过氨基酸的分离：1.学习纸层析法的基本原理；2.掌握滤纸层析的操作方法。目目 的的一一.滤滤纸层析法是用滤纸作为惰性支持物纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。以水（被滤纸纤维结合）的分配层析法。以水（被滤纸纤维结合）作为作为固定相固定相，以有机溶剂为，以有机溶剂为流动相流动相，样，样品点在滤纸上进行展层，氨基酸在两相品点在滤纸上进行展层，氨基酸在两相中不断分配，因为中不断分配，因为分配系数分配系数不同，故样不同，故样品随流动相移动的速率不同，从而被分品随流动相移动的速率不同，从而被分开，形成距原点距离不等的层析点。开，形成距原点距离不等的层析点。原原 理理原理原理二二.氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是置是用用Rf值值(比移比移)来表示的来表示的 Rf=原点到层析中心的距离原点到层析中心的距离/原点原点到溶剂前沿的距离到溶剂前沿的距离(在一定的条件下某种物质的在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。离氨基酸。)显色原理显色原理无色物质的纸层析图谱可用光谱法无色物质的纸层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。氨基（紫外光照射）或显色法鉴定。氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色剂。剂。器器 材材1、玻璃钟罩玻璃钟罩 2、毛细管、毛细管 3、喷雾器、喷雾器 4、培养皿、培养皿 5、层析滤纸、层析滤纸(新华一号新华一号)6、烘箱、烘箱 7、铅笔（直尺）、铅笔（直尺）8、裁纸刀、裁纸刀 9、一次性手套一次性手套 10、分液漏斗、分液漏斗 11、吹风机、吹风机12、移液管等常规仪器、移液管等常规仪器1、物质的量为0.008摩尔/升的赖氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸溶液及它们的混合液(各组份物质的量均为0.008摩尔/升)。2、扩展剂 正丁醇：甲酸：水=70:17:8（体积比）3、显色剂 2.5茚三酮丙酮溶液。试试 剂剂1、准备滤纸准备滤纸 取层析滤纸(15*17cm，距下端2 cm处用铅笔划一条与底边平行的直线，在此直线上每间隔相等距离作一记号，一共做五个记号（点样用）。2、点样点样 用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号上，自然风干（或冷风）后再点一次样，每点在纸上扩散的直径，最大不超过5 mm。操操 作作（单向上行层析法）（单向上行层析法）操作操作3、展层、展层 用订书机将滤纸订成筒状，纸的两边不能接触。将滤纸竖直立于培养皿中（有铅笔线的一端朝下），用玻璃钟罩盖住，用层析柱与漏斗从钟罩上口处加展开剂至培养皿高度2/3处，盖上上口盖子，待溶剂前沿上升至距顶端约1cm时取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机冷风吹干。4、显色显色 用喷雾器均匀喷上2.5茚三酮丙酮溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(65)即可显出各层析斑点。5、计算各种氨基酸的计算各种氨基酸的Rf值。值。1、整个实验为什么要戴手套进行，且滤纸要妥善保存？2、为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？3、为什么几种氨基酸在滤纸上会出现上下分布？结合实验原理说说选择其他氨基酸可能会有什么现象。思思 考考 题题祝实验成功！祝实验成功！The end谢谢！