1[1].2.2 基因工程的基本操作程序.ppt

v（三）人工合成（三）人工合成蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列推测推测推测推测目的基因目的基因化学合成化学合成(二二)基因表达载体的构建基因表达载体的构建核心核心（1 1）用一定的）用一定的_切切割质粒，使其出现一个切口，割质粒，使其出现一个切口，露出露出_。（2 2）用）用_切断目切断目 的基因，使其产生的基因，使其产生_ _ _。（3 3）将切下的目的基因片段插入质粒的）将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形成了一个重组，形成了一个重组 DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA连接酶连接酶相同相同1.1.过程过程:质粒质粒DNADNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种1.1.过程过程:二、二、基因表达载体的构建基因表达载体的构建2.2.作用作用a、使目的基因在受体细胞中稳定存在、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代并遗传给子代b、同时使目的基因能表达和发挥作用、同时使目的基因能表达和发挥作用思考：思考：作为基因工作为基因工程程表达载体，只需含有表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？目的基因就可以完成任务吗？3.3.基因表达载体的基因表达载体的组成：组成：复制原点复制原点+启动子启动子+目的基因目的基因+终止子终止子+标记基因标记基因它们有什么作用？它们有什么作用？常用的受体细胞：常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化：转化：1、将目的基因导入植物细胞、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌）农杆菌转化法转化法机理机理:能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物,对对大多数单子叶植物无感染能力大多数单子叶植物无感染能力Ti质粒质粒的的TDNA可转移至受体细可转移至受体细胞并整合到其染色体上胞并整合到其染色体上转化过程转化过程:Ti质粒质粒目的基因目的基因构建构建表达表达载体载体导入导入植植物物细细胞胞插入插入植物细胞植物细胞染色染色DNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌（2）基因枪法）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生利用压缩气体产生的动力的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入打入受体细胞中受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。，使目的基因与其整合并表达的方法。（3）花粉管通道法）花粉管通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在花粉管通道法就是在植物受粉后植物受粉后，花粉形成的，花粉形成的花粉管还未愈合花粉管还未愈合前前，剪去柱头剪去柱头，然后，然后，滴加滴加DNA（含目的基因）含目的基因），使目的基，使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。因借助花粉管通道进入受体细胞。2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞方法方法:显微注射技术显微注射技术操作程序操作程序:提纯含目的基提纯含目的基因表达载体因表达载体取受精卵取受精卵显微注射显微注射移植到子宫移植到子宫受精卵发育受精卵发育新性状动物新性状动物早期胚胎早期胚胎3、将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞常用法：常用法：Ca2+处理处理常用菌：常用菌：大肠杆菌大肠杆菌微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：Ca2+处理处理大肠杆菌大肠杆菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态细感受态细胞吸收胞吸收DNA(四四)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检测检测导入检测：导入检测：方法方法 DNADNA分子杂交分子杂交表达检测表达检测转录检测转录检测翻译检测翻译检测分分子子检检测测法法鉴定鉴定抗虫鉴定抗虫鉴定抗病鉴定抗病鉴定活性鉴定活性鉴定个体水平的鉴定个体水平的鉴定分子杂交分子杂交抗原抗原-抗体杂交抗体杂交目的基因是否导入受体细胞目的基因是否导入受体细胞DNA附着在膜上附着在膜上硝化纤维素硝化纤维素加探针加探针报告基因（含荧光素分子）报告基因（含荧光素分子）变性变性DNA杂交杂交（如检测（如检测SARS病毒等）病毒等）abcd1下列关于基因结构的认识中，正确的是下列关于基因结构的认识中，正确的是（）A大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列B乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子C大肠杆菌基因与大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的聚合酶结合位点位于编码区的下游下游D水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列2（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是是（）A编码区都有能编码蛋白质的序列编码区都有能编码蛋白质的序列B编码区都是连续的编码区都是连续的C非编码区都能调控遗传信息的表达非编码区都能调控遗传信息的表达D非编码区都有非编码区都有RNA聚合酶结合的位点聚合酶结合的位点DACD3、构建基因组、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的文库时，首先应分离细胞的A、染色体、染色体DNAB、线粒体、线粒体DNAC、总、总mRNAD、tRNA4、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是的描述正确的是A、某生物的全套基因就是一个基因文库、某生物的全套基因就是一个基因文库B、将含有某种生物不同的许多、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个片段，导入某个生物生物体内，则这个生物就是一个基因文库体内，则这个生物就是一个基因文库C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文文库库AC5、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分分子片段为子片段为ATGTGTACAC，要使其数量增多，可用，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是技术进行人工复制，复制时应给予的条件是双链双链DNA分子为模板分子为模板ATGTG或或TACAC模板链模板链四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸四种核苷酸四种核苷酸DNA聚合酶聚合酶热热稳定稳定DNA聚合酶聚合酶引物引物温度变化温度变化恒温恒温ABCDD6、在基因工程中，把选出的目的基因（共、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入个）放入DNA扩扩增仪中扩增增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是苷酸的个数是A.540个个 B.8100个个 C.17280个个D.7560个个B7、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是方便方法是A、化学合成法、化学合成法B、基因组文库法、基因组文库法C、cDNA文库法文库法D、聚合酶链式反应、聚合酶链式反应8、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因利用利用PCR技术技术扩增目的基因扩增目的基因反转录法反转录法通过通过DNA合成仪利合成仪利用化学方法人工合成用化学方法人工合成ABC DAD9、（多选）一个基因表达载体的构建应包括、（多选）一个基因表达载体的构建应包括A目的基因目的基因B启动子启动子C终止子终止子D标记基因标记基因ABCD10、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是A启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，聚合酶识别和结合的部位，是起始密码是起始密码B启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，短片段，对对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选基因从而便于筛选D基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别不同而有所差别A