阎-实验二-土壤中微生物的分离纯化.ppt

实验二实验二 土壤中微生物的土壤中微生物的分离与纯化分离与纯化 实验实验 从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离微生物一、实验目的：一、实验目的：学习学习学习学习微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数及划线分离技术及划线分离技术及划线分离技术及划线分离技术二、实验原理二、实验原理vv采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用标微生物的纯培养：常用标微生物的纯培养：常用标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法稀释平板分离法稀释平板分离法稀释平板分离法和和和和划线分划线分划线分划线分离法离法离法离法vv在固体培养基上形成单个菌落。在固体培养基上形成单个菌落。在固体培养基上形成单个菌落。在固体培养基上形成单个菌落。vv分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养基，分离真菌用马丁基，分离真菌用马丁基，分离真菌用马丁基，分离真菌用马丁-孟加拉红培养基。孟加拉红培养基。孟加拉红培养基。孟加拉红培养基。vv依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目目目目v土壤是微生物的大本营土壤是微生物的大本营 从土壤中稀释分离微生物的方法如下：从土壤中稀释分离微生物的方法如下：（一）土壤悬液制备（一）土壤悬液制备 准备准备1 1瓶土壤悬液：称瓶土壤悬液：称1010克土壤放入带玻璃克土壤放入带玻璃珠的珠的9090mlml瓶装无菌水中，手摇振荡瓶装无菌水中，手摇振荡(10-20min)(10-20min)，使土样分散。，使土样分散。三、实验步骤：三、实验步骤：（二）倒固体琼脂培养基平板：（二）倒固体琼脂培养基平板：（二）倒固体琼脂培养基平板：（二）倒固体琼脂培养基平板：分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（350ml350ml350ml350ml瓶）瓶）瓶）瓶）熔化后，凉至熔化后，凉至熔化后，凉至熔化后，凉至45-5045-5045-5045-50度倒平板。度倒平板。度倒平板。度倒平板。（三（三（三（三 ）悬液稀释：方法见下图：）悬液稀释：方法见下图：）悬液稀释：方法见下图：）悬液稀释：方法见下图：（四）悬液涂布（四）悬液涂布（四）悬液涂布（四）悬液涂布(演示演示演示演示):):):):无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀从稀至浓将菌液涂布均匀从稀至浓将菌液涂布均匀从稀至浓将菌液涂布均匀)采用采用采用采用101010103 3 3 3，101010104 4 4 4，101010105 5 5 5稀释液稀释液稀释液稀释液0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板涂布牛肉膏蛋白胨平板涂布牛肉膏蛋白胨平板涂布牛肉膏蛋白胨平板（演示）（演示）（演示）（演示）平板涂布平板涂布简单易行，但易简单易行，但易造成机械损伤造成机械损伤Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod.sterile bent glass rod.五、划线分离五、划线分离vv每人用剩下的每人用剩下的1个平板做划线分离，从三角瓶个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离中取土壤悬液作划线分离平皿划线平皿划线分离法分离法（五）吹干（五）吹干 将已涂布好的平皿皿盖半揭开，置于无菌将已涂布好的平皿皿盖半揭开，置于无菌台上吹干。台上吹干。（六）培养：（六）培养：待吹干后，将平板用报纸包好（每个平待吹干后，将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养置于培养箱培养(温度温度?)?)。（七）检查结果（七）检查结果结果分析结果分析结果分析结果分析:1.1.1.1.计数：牛肉膏平板取单菌落数目在计数：牛肉膏平板取单菌落数目在计数：牛肉膏平板取单菌落数目在计数：牛肉膏平板取单菌落数目在30303030300300300300个个个个左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目在在在在10101010100100100100个左右的稀释度来计数个左右的稀释度来计数个左右的稀释度来计数个左右的稀释度来计数 2.2.2.2.我所计数的平板稀释度是：我所计数的平板稀释度是：我所计数的平板稀释度是：我所计数的平板稀释度是：单菌落单菌落单菌落单菌落数目：数目：数目：数目：、。3.3.3.3.计算：活菌数目计算：活菌数目计算：活菌数目计算：活菌数目/每克土壤每克土壤每克土壤每克土壤 （计算过程）（计算过程）（计算过程）（计算过程）个个个个/每克土壤每克土壤每克土壤每克土壤 4.4.4.4.对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析实验要求实验要求做做1 1个土样梯度分离个土样梯度分离倒倒1212个平皿个平皿(其中其中6 6个用于稀释涂布，个用于稀释涂布，6 6个个用于划线用于划线)v每组每组(5-6(5-6人人)试管斜面接种试管斜面接种1.1.两支试管呈两支试管呈“V V”字形字形 2.2.拔下试管塞拔下试管塞3.3.火焰上微烧一周火焰上微烧一周 4.4.接种环灼烧、冷却接种环灼烧、冷却5.5.接种接种、划线、划线 6.6.塞上塞子，灼烧接种环塞上塞子，灼烧接种环实验报告实验报告实验报告实验报告从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离微生物从土壤中稀释分离微生物的的的的原理、方法、步骤。原理、方法、步骤。原理、方法、步骤。原理、方法、步骤。2 2 2 2思考题思考题思考题思考题(1)(1)(1)(1)为什么融化后的培养基要冷却至为什么融化后的培养基要冷却至为什么融化后的培养基要冷却至为什么融化后的培养基要冷却至45454545左右才能倒平左右才能倒平左右才能倒平左右才能倒平板板板板?(2)(2)(2)(2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为为为为什么什么什么什么?(3)(3)(3)(3)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里?本次实验课结束本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请确保油镜头擦拭干净！所用器皿自己洗净！所用器皿自己洗净！请第三组同学留下值日请第三组同学留下值日下周再见！下周再见！