中国药品检检验标准操作规范___重金属检查法.pdf

重金属检查法 1 简述1.1 重金属是指在规定实验条件下能与显色剂作用显色的金属杂质。中国药典 2010年版二部附录 H 采用硫代乙酰胺试液或硫化钠试液作显色剂，以铅(Pb)的限量表示。1.2 由于实验条件不同，分为三种检查方法。第一法适用于溶于水、稀酸或有机溶剂如乙醇的药品，供试品不经有机破坏，在酸性溶液中进行显色，检查重金属；第二法适用于难溶或不溶于水、稀酸或乙醇的药品，或受某些因素（如自身有颜色的药品、药品中的重金属不呈游离状态或重金属离子与药品形成配位化合物等）干扰不适宜采用第一法检查的药品，供试品需经有机破坏，残渣经处理后在酸性溶液中进行显色，检查重金属，第三法用来检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的药品中的重金属。检查时，应根据中国药典品种项下规定的方法选用。1.3 三种方法显示的结果均为微量重金属的硫化物微粒均匀混悬在溶液中所呈现的颜色；如果重金属离子浓度大，加入显色剂后放置时间长，就会有硫化物聚集下沉。1.4 重金属硫化物生成的最佳pH 值是 3.03.5，经实验，重金属检查选用醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 调节 pH 值为适宜。显色剂硫代乙酰胺试液用量经实验也以2ml 为佳，显色时间一般为 2min。经实验，以每27ml 中含 1020g 的 Pb与显色剂所产生的颜色为最佳目视比色范围。在规定实验条件下，与硫代乙酰胺试液在弱酸条件下产生的硫化氢显色的金属离子有银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钴与镍等。1.5 由于在药品生产过程中遇到铅的机会较多，且铅易蓄积中毒，故以铅作为重金属的代表，用硝酸铅配制标准铅溶液。2 仪器与用具2.1 纳氏比色管 50ml，应选择外表面无划痕，色泽一致，无瑕疵，管的内径和刻度线的高度均匀一致的质量好的玻璃比色管进行实验。2.2 配制与贮存标准铅溶液用的玻璃容器均不得含铅。3 试药与试液3.1 标准铅溶液准确称取在105干燥至恒重的硝酸铅0.1599g，置 1000ml 量瓶中，加硝酸5ml 与水 50ml 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置 l00ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，限当日使用(每 Iml 相当于 10g 的 Pb)。3.2 硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲液(pH3.5)与维生素 C 等均按中国药典2010 年版二部附录的规定。3.3 稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖约5g，置瓷坩埚中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml，滤过，贮于滴瓶中备用。临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用。4 操作方法4.1 第一法4.1.1 取 25ml 纳氏比色管三支，编号为甲、乙、丙。4.1.2 甲管中加一定量的标准铅溶液与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成 25ml。4.1.3 乙管中加按该品种项下规定的方法制成的供试液25ml。4.1.4 丙管中加与乙管相同量的供试品，按该品种项下规定的方法制成溶液，在加水或溶剂稀释成 25ml 前，加与甲管相同量的标准铅溶液，然后加水或溶剂稀释使成25ml。4.1.5 如供试液略带颜色，可在甲管中滴加稀焦糖溶液少量或其他无干扰的有色溶液，使其色泽与乙管、丙管一致。4.1.6 在甲、乙、丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置 2min，同置白纸上，自上向下透视，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅予甲管，试验无效，应取样按第二法重新检查。4.1.7 如在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，仍不能使颜色一致时，应取样按第二法重新检查。4.1.8 供试品如含高铁盐而影响重金属检查时，可在甲、乙、丙三管中分别加相同量的维生素 C 0.51.0g，再照上述方法检查。4.1.9 配制供试液时，如使用的盐酸超过Iml（或与盐酸Iml 相当的稀盐酸），氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，甲管溶液应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水 15ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水或各品种项下规定的溶剂稀释成20ml。4.2 第二法4.2.1 取 25ml 纳氏比色管两支，编号为甲、乙。4.2.2 除另有规定外，当按第一法检查，丙管中量出的颜色浅于甲管，或供试液带颜色，即使在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，仍不能使颜色一致，需改用第二法检查时，取各品种项下规定量的供试品，按炽灼残渣检查法(中国药典 2010 年版二部附录 N)进行炽灼处理，然后取遗留的残渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml微热溶解后，移至乙管中，加水稀释成2sml。4.2.3 直接取该品种炽灼残渣检查项下在500600炽灼的遗留残渣，再按 4.2.2 自“,加硝酸 0.5ml 蒸干至氧化氮蒸气除尽后，,”起，依法操作至“移至乙管中，加水稀释成 25ml”。4.2.4 如不取炽灼残渣项下遗留的残渣，则可取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸 0.5lml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在 500600炽灼使完全灰化，再按4.2.2自“,放冷，加盐酸2ml,”起，依法操作至“移至乙管中，加水稀释成25ml”。4.2.5 如供试品为溶液，贝n 取各品种项下规定量的溶液，蒸发至干，再按4.2.2 自“,按炽灼残渣检查法,”起，依法操作至“移至乙管中，加水稀释成25ml”。4.2.6 取配制供试液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水 15ml，微热溶解后，移至甲管中，加标准铅溶液一定量，加水稀释成25ml。4.2.7 在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置 2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。4.3 第三法4.3.1 取 25ml 纳氏比色管两支，编号为甲、乙。4.3.2 除另有规定外，取规定量的供试品置乙管中，加氢氧化钠试液 5ml 使溶解，再加水稀释使成 25ml。4.3.3 取一定量的标准铅溶液置甲管中，氢氧化钠试液5ml 并加水使成 25ml。4.3.4 在甲、乙两管中分别加硫化钠试液5 滴，摇匀，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。5 注意事项5.1 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制，限当日使用(每 1ml 相当于 l0g 的 Pb)；配制与贮存标准铅溶液使用的玻璃容器，均不得含有铅。5.2 硫代乙酰胺试液与重金属反应受溶液的pH 值、硫代乙酰胺试液加入量、显色时间等因索的影响，经实验，本重金属检查选用醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 调节 pH 值，显色剂硫代乙酰胺试液用量2ml，显色时间为2min，是最有利显色反应进行、使呈色最深的条件，故配制醋酸盐缓冲液(pH3.5)时，要用 pH 计调节溶液的 pH 值，应注意控制硫代乙酰胺试液的加入量及硫代乙酰胺试液显色剂的显色时间。5.3 为了便于目视比较，第一、二和第三法中的标准铅溶液用量以2.0ml(相当与 20g 的Pb)为宜，小于 1.Oml 或大于 30ml，呈色太浅或太深，均不利于目视比较，故在检查时，如供试品取样量与标准铅溶液的取用量均未指明时，常以标准铅溶液为2.0ml 来计算供试品的取样量，并进行试验。5.4 如需取炽灼残渣项下遗留的残渣作重金属检查时，则炽灼温度必须控制在500600。实验证明，炽灼温度在700以上时，多数金属盐都有不同程度的损失以铅为例，在700经6h 炽灼，损失达68%。某些供试品（如安乃近、诺氟沙星等）在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属，应改用石英坩埚或铂坩埚操作。5.5 炽灼残渣加硝酸处理，必须蒸干，至氧化氮蒸气除尽，否则会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢，因氧化析出乳硫，影响检查蒸干后残渣加盐酸处理，使重金属转化为氯化物，在水浴上蒸干以赶除多余的盐酸，加水溶解，加入酚酞指示液 1 滴，再逐滴加入氨试液，边加边搅拌，直到溶液刚显微粉红色为止，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)使供试液的 pH 值调节至 3.5。5.6 供试品中如含有高铁盐，在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢进一步氧化析出乳硫，影响检查，加入维生素C 可将高铁离子还原为亚铁离子而消除干扰。5.7 如供试品自身为重金属的盐，在检查这类药品中的其他金属时，必须先将供试品本身的金属离子除去，再进行检查。如在枸橼酸铁铵中检查铅盐时，利用 Fe3+在一定浓度的盐酸中形成 HFeCl62-，用乙醚提取除去，再调节供试液至碱性，用氰化钾试液掩蔽微量的铁后进行检查；右旋糖酐铁注射液中重金属检查，也是在一定浓度的盐酸中，用醋酸异丁酯提取除去铁盐后进行检查。5.8 药品本身生成的不溶性硫化物，影响重金属检查，可加入掩蔽剂以避免干扰。如硫酸锌和葡萄糖酸锑钠中铅盐检查，是在碱性溶液中加入氰化钾试液，或在中性溶液中加入酒石酸，使锌离子或锑离子生成稳定的络合物，再依法检查。5.9 为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂的重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过 1ml(或与盐酸 Iml 相当的稀盐酸)或使用氨试液超过2ml，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。5.10 在检查时，标准管（甲管）、供试品管（乙管）与监测管（丙管）应平行操作，同时按顺序加入试剂，试剂加入量、操作条件等应一致。6 记录与计算6.1 记录6.1.1 必须记录标准铅贮备液的来源及标准铅溶液的制备。6.1.2 必须记录检查所采用的方法，供试品取样量，供试液的制备或供试品处理的方法，标准铅溶液取用量等检查各操作过程，以及操作过程中使用的特殊试剂，试剂名称和用量或对检查结果有影响的试剂用量，实际过程中出现的现象及实验结果等。6.2 计算6.2.1 标准铅溶液浓度计算1mol 硝酸铅Pb(NO3)2的质量为 331.21g，含铅(Pb)为 207.2g；称取硝酸铅0.1599g，配成1000ml 贮备液，含 Pb量为：g/ml0.100100021.3311061599.02.207贮备液依法稀释10倍后所得标准铅溶液浓度为每Iml 含 10g 的 Pb。6.2.2 重金属限量计算进行检查时，如取供试品1.0g，与标准铅溶液2.0ml 制成的对照液比较，计算重金属限量。重金属限量(ppm)6.2.3 标准铅溶液取样量计算根据取供试品量及限量计算，如取供试品 2.0g，依法检查，规定含重金属不得过百万分之五，应取标准铅(Pb)溶液（l0gml）多少毫升？V=重金属限量(ppm)供试品重(g)/标准铅溶液浓度（g/ml）=52.0/10=1.0ml 例如葡萄糖注射液中重金属检查，“取本品适量（约相当于葡萄糖3g）,依法检查，按葡萄糖含量计算，含重金属不得过百万分之五”，计算标准铅溶液取用量。V=5310=1.5ml 7 结果判定7.1 第一法，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，乙管所呈颜色浅于甲管，判为符合规定。如丙管中显出的颜色浅于甲管，试验无效，应取样按第二法重新检查。如供试液略带颜色，在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，仍不能使甲管、乙管、丙管颜色一致时，应取样按第二法重新检查。7.2 第二、三法，甲管与乙管比较，乙管所呈颜色浅于甲管，判为符合规定。修订人：蔡美明（江苏省食品药品检验所）戴向东（广西壮族自治区食品药品检验所）（百万分之二十）（）供试品质量（）标准铅溶液浓度（）标准铅溶液体积（ppm2010/1.02.0g/ml/gml