细胞生物学第2次实验.ppt

细胞生物学与遗传学教研室细胞生物学与遗传学教研室遵义医学院遵义医学院遵义医学院遵义医学院20092009年年9 9月研制月研制第二次实验第二次实验 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内细胞内DNADNA和和RNARNA的原位显示的原位显示 实验目的实验目的 1.1.掌握酸、碱性蛋白以及掌握酸、碱性蛋白以及DNADNA和和RNARNA在细胞内的在细胞内的分布情况；分布情况；2.2.了解酸、碱性蛋白以及了解酸、碱性蛋白以及DNADNA和和RNARNA显色反应的显色反应的原理和方法。原理和方法。实验原理实验原理 1.1.由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同为碱性蛋白。可用不同pHpH值的固绿染色，值的固绿染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。核酸的存在会影响实验结果核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理用三氯醋酸处理2.2.甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内结合，从而同时显示细胞内DNADNA和和RNARNA的分的分布部位。布部位。实验用品实验用品 95%乙醇乙醇 三氯醋酸三氯醋酸 甲基绿甲基绿-派洛宁派洛宁 0.1%酸性固绿酸性固绿 0.1%碱性固绿碱性固绿 操作流程操作流程 暴露暴露 胸腔胸腔双毁髓法双毁髓法处死处死取心脏血取心脏血晾干晾干 制制 血涂片血涂片固固定定10min 9025min洗洗涤涤1min反反复复冲冲洗洗 三氯醋酸三氯醋酸95%乙醇 0.1%酸性固绿酸性固绿 5min 0.1%碱性固绿碱性固绿 30min 晾晾干干镜检镜检冲洗冲洗5秒秒晾晾干干洗洗涤涤甲基绿派洛宁甲基绿派洛宁5min染染色色冲洗冲洗 5 秒秒 结果观察结果观察 酸性蛋白酸性蛋白碱性蛋白碱性蛋白DNA和和RNA的显示的显示l 使用三氯醋酸处理的目的使用三氯醋酸处理的目的l 两人一组，每组制三张血涂片两人一组，每组制三张血涂片 注意事项注意事项 1.1.请回答细胞化学法在本次实验中的应用。请回答细胞化学法在本次实验中的应用。2.2.通过本次实验学到哪些基本操作技能？通过本次实验学到哪些基本操作技能？3.3.请描述本次实验的显微观察结果。请描述本次实验的显微观察结果。作业作业 小结小结 l 评价本次实验的得失评价本次实验的得失l 本次实验需要巩固的概念本次实验需要巩固的概念 细胞化学法细胞化学法l 本次实验需要掌握的实验技能本次实验需要掌握的实验技能 1.1.双毁髓处死蟾蜍的方法双毁髓处死蟾蜍的方法 2.2.血涂片制作方法血涂片制作方法 3.3.染色的规范操作方法染色的规范操作方法 4.4.洗涤方法（流水冲洗）洗涤方法（流水冲洗）5.5.正确的镜检方法（显微观察技术）正确的镜检方法（显微观察技术）