植物化学2.ppt

操作：生药粉未用酒精回流提取6小时，冷却，过滤，反复提取三次，滤液合并，浓缩至干。残渣用2%盐酸溶解，过滤，滤液用氯仿洗涤，氯仿液中除含杂质外，还有少量生物碱盐酸盐。将氯仿仿蒸干后，用5%盐酸溶解，过滤，滤液用氯仿提二次，蒸干氯仿得Homolyeorine盐酸液。乙醇重结晶，熔点286（分解）。氯仿洗涤后的酸水液加碳酸钠碱化，氯仿提取，这时在氯仿层与碱水层之间析出石蒜碱固体，滤取后用2%盐酸溶解，浓缩，析出石蒜碱盐酸盐，熔点212。紫花石蒜鳞茎粉末乙醇热提乙醇液减压浓缩,2%HCl溶解,过滤酸水液CHCl3提取CHCl3液酸水液蒸干Na2CO3碱化CHCl3提取残渣5%HCl溶解CHCl3液不溶物碱水液CHCl3提取5%NaOH提取(石蒜碱)雷氏铵盐处理CHCl3液蒸干HomolycorineNaOH液CHCl3液假石蒜碱HClCHCl3液5%NaOH提取NaOH液CHCl3液HCl酸化5%HCl提取Na2CO3碱化HCl液CHCl3提取Na2CO3碱化CHCl3液CHCl3提取浓缩蒸干残留物多花水仙素5%CHCl溶解 Na2CO3调pH 乙酸乙酯提取Ph78.08.79.5-11多花水仙素加兰他敏PluvlineLycoramine川乌AconitumcarmichaeliDebxj是重要中药，有温中止痛、散寒燥湿的功效，其中主要生物碱有乌头碱,次乌头碱，新乌头碱，及川乌甲碱等乌头碱类二萜类生物碱，分离方法主要根据其盐酸盐在氯仿中溶与不溶而分为二部分，而后再分别通过氧化铝柱层析分离之。10%碳酸钠溶液润湿，磨匀，用2倍量苯于室温浸泡一周川乌粉末(20Kg)苯浸液2%盐酸提取56次氨水碱化水洗涤数次干燥酸水液白色沉淀甲（22.3g)用氯仿提取无水碳酸钾干燥碱水滤液氯仿液乙(45g)。二部分总碱得率为0.32%。过滤氯仿提取数次浓缩2%CHCl提取5-6次甲+2%CHCl氯仿液残留物酸水液用氨水碱化,乙醚提取,浓缩糖浆状物氨水碱化乙醚提取浓缩酸水液碱水液乙醚液结晶(11.2g)氧化铝柱析次乌头碱(乙醇重结晶,熔点186-187C)结晶溶于少量氯仿乌头碱(乙醇重结晶,熔点198C)乙醚洗脱新乌头碱(丙酮重结晶,熔点204C)上述乙部分按甲部分同样方法处理可得5.18g混合结晶与一些糖浆状物的盐酸盐不溶于氯仿的生物碱。甲、乙二部分糖桨物合并（约40g），用氧化铝柱层析，乙醚洗脱，同样配合薄层层析检查，可分别得到塔拉地萨敏，尚未鉴定的川乌碱甲及川乌碱乙。7、长春碱与长春新碱1:0.3(生药:水)拌匀6%酒石酸进行氨水调节pH6-7长春花全草干粉苯渗漉液酸液生药的6.5倍量苯渗漉液-液逆相萃取氯仿萃取减压浓缩加甲醇(1:1.5)减压氯仿液总弱生物碱甲醇液纯化总若生物碱家无水乙醇(1:0.5W/V);放置过夜,滤去结晶家水溶解,氨水碱化生物碱硫酸盐结晶氯仿液加5%硫酸-无水乙醇-pH3.8-4.1,放置氯仿萃取无水硫酸钠干燥,蒸干氧化铝柱析,苯-氯仿(比重1:3)洗脱)游离弱碱前段,中段,后段在无水乙醇中加5%硫酸无水乙醇液至pH3.8-4.1,放置前段硫酸长春碱中段经氧化铝柱析长春次碱,长春新碱后段(条件同前段)硫酸长春新碱8、喜树中的生物碱R212喜果甙NONOR3NNHHOHOR2OHOH喜树碱：R1=OH，R2=R3=HC6H11O6去氧喜树碱：R1=R2=R3H10-羟基喜树碱：R1=R2=OH，R3=H10-甲氧基喜树碱：R1=OH，R2=OCH3，R3=HOCH311-羟基喜树碱：R1=OH，R2=H，R3=OHN11-甲氧基喜树碱：R1=OH，R2=H，R3=CCH3喜树次碱喜树果粉+80%乙醇渗漉渗漉液减压浓缩浓缩液氯仿提取氯仿液氨水碱化乙醇:乙酸乙酯浓缩碱水液提取液氯仿提取减压蒸干母液喜树碱粗品喜树次碱残留物减压蒸干氯仿溶解硅胶柱析残留物NaOH处理喜树碱氯仿硅胶柱析10-羟基喜树碱胶质去氧喜树碱11-羟基喜树碱氧化铝柱析喜树碱喜果甙10-羟基喜树碱11-羟基喜树碱9三尖杉中的生物碱三尖杉中的生物碱o三尖杉碱：R=Ho4RO3H2OHOHCH3OHOHCH3R=COC（CH2）2CR=COC（CH2）3CCH2COOCH3CH3CH2COOCH3CH3三尖杉酯碱高三尖杉酯碱渗漉三尖杉枝叶粗粉+8倍量85%乙醇浸泡（24h）渗漉液浓缩饱和酒石酸pH2-3过滤碳酸钠PH9以上氯仿提取浓水液滤液减压浓缩饱和碳酸钠调节pH6,7,8,9氯仿液总生物碱+6%柠檬酸依次用氯仿提取pH8-9氯仿液+10倍量无水乙醇热溶,放置三尖杉碱,乙醚重结晶浓缩pH6.7缓冲液碳酸钠pH9pH7-8氯仿液氯仿浓缩液缓冲提取液氯仿萃取氯仿液氯仿液三尖杉碱pH5缓冲液*氯仿液pH5缓冲提取液浓缩氯仿提取饱和碳酸钠碱化混合碱氯仿液氯仿洗脱混合碱+少量氯仿氧化铝柱析硅胶柱析高三尖杉酯碱,三尖杉酯碱*氯仿液pH3缓冲液提取同法处理的(+)乙酰三尖杉碱10.常山生物碱NONCHCCH2异常山碱ON常山根粉+90%乙醇渗漉乙醇渗漉液浓缩盐酸酸化过滤酸水液氯仿萃取酸水液氯仿液碳酸钠碱化氯仿提取氯仿液饱和HCl的乙醇溶液总碱+5倍量无水乙醇提取常山碱盐酸盐混合结晶+水碳酸钠碱化氯仿萃取氯仿液氯仿萃取碳酸钠碱化过滤加水减压蒸干异常山碱母液常山碱结晶11.毛叶轮环藤中箭毒碱的分离H3COH3COHON-CH3HON-CH3OOCH2CH2OHOOH3C-NH3C-NOHOCH3OCH3左旋箭毒碱d-异谷树碱OCH3H3COH3C-NON-CH3O 防己碱OCH3OCH3H3COH3CNOHN-CH3HOHOH3COHomoaromoline11.毛叶轮环藤中箭毒碱的分离分离方法主要利用酚性生物碱能溶于苛性碱溶液而大致与非酚性分离。浓缩“银不换”粗粉用95%乙醇渗漉渗漉液浓缩液用2%盐酸氨水碱化氯仿提取浓缩酸水液碱水液氯仿液总生物碱（得率为3%）苯在热水浴上分次捏溶苯洗脱中性氧化铝柱层析丙酮处理粉防已碱苯不溶物苯溶物浓缩 丙酮处理丙酮母液粉防已碱加苯溶解5%NaOH氯仿提取氨水碱化盐酸中和酚性部分NaOH液苯溶物(非酚性部分)丙酮粉防已碱中性氧化铝柱层析(苯洗脱)非酚性部分母液粉防已碱Homoaromoline碱性硅胶柱层析氯仿甲醇（20：50V/V)洗脱酚性部分左旋箭毒碱尚未鉴定的晶IV12.士的宁与马钱子碱马钱子为番木鳖Strychnosnux-vomicaL.的种子，味极苦，剧毒，民间有将用毒饵除兽。含生物碱主要为士的宁（式18-22）及马钱子碱（式18-23），士的宁硝酸盐或盐酸盐为中枢兴奋剂。马钱子碱供分析试剂用之，对各种硝酸盐呈特殊红色反应，灵敏度极高，有色金属分析中用马钱子碱测定铋含量。13、国产美登木中的抗癌成分美登素、国产美登木中的抗癌成分美登素美登素（maytansine）是近年来从卫矛科和鼠李科的几种植物中分到的一个柄型大环酰胺化合物，结构新颖，抗实验瘤普广，活性很强，引起大家的重视。但此成分在植物中含量极微，分离难度较高。OCH3NCH3ClCH3OOHCH3OH3CONOCH3H3CHONCH3H3COOHHO云南美登木茎粉+乙醇热提乙醇液减压浓缩无醇残留液乙酸乙酯处理不溶物乙酸乙酯液水液（I）1）稀NaOH液提，2）稀HCl液提碱液（II）乙酸乙酯液（IV）酸液（III）水洗至中性，减压浓缩残留物残留物1）乙酰化，2）Cl4-80%甲醇分配CCl4层80%甲醇层 加水65%甲醇 氯仿萃取65%甲醇层氯仿层（VI）减压浓缩，2%CHCl提，水洗氯仿液（Vib）酸液（Via）干燥，蒸干残留物Al2O3干柱层析，SiO2柱层析，SiO2GF254制备板层美登素第四章强心甙强心甙：存在于植物中的具有强心作用的甾体配糖体。目前我国临床上常用的有：西地兰，狄戈辛，洋地黄毒甙，黄夹桃甙，铃兰桃甙及毒毛旋花子甙等。强心甙在中草药中主要分布在玄参科,夹竹桃科和百合科植物的果,叶和根中。如毛花及紫花洋地黄叶，夹竹桃果，铃兰草，羊角拗种子等。一、强心甙的性质强心甙是中性化合物，大部分为结晶，味苦，一般有旋光性（左旋）,能溶于乙醇,甲醇或水,难溶于氯仿，醚，苯等极性小的溶剂中。甙易被无机酸水解成甙元与糖元二部分。酶也能水解掉一部分糖。甙元比甙的极性小，较易溶于氯仿，乙酸乙酯等有机溶剂中，一般含糖部分愈多的甙在极性溶剂中的溶解度愈大。酶甙元+几分子糖甙（原生甙即配糖体）次生甙+一个糖（末位葡萄糖）OCHOCHOOHCOHHCOHHOCHHCOHHCOHHOCHRHCOHHOCHOHCH2OHCH3HO3葡萄糖鼠李糖R=CH3、CHO或CH2OH-去氧糖CHOCHOCHOCHOHOCHCH2CH2CH2HCOCH3HCOHHCOCH3HCOCH3HOCHHCOHHOCHHOCHHOCHHCOHHOCHHCOHCH3CH3CH3CH3黄夹糖洋地黄毒糖夹竹桃糖沙门糖强心甙的鉴别生药粉末用稀乙醇热提后，过滤，提取液浓缩至沙量后供试验。(1)试样1ml加费林溶液1ml，煮沸3分钟，如有暗红色沉淀析出示有单糖，过滤，滤液加10%盐酸至酸性，继续加热煮沸10分钟，用碳酸钠中和后再加费林溶液1ml，煮沸3分钟。若有暗红色沉淀析出，即说明试样中含有带还原糖的甙或双糖。(2)Molish反应：于试样1ml加3滴3%-萘酚乙醇溶液，沿试管壁加1ml浓硫酸，如二液层间显蓝紫色环，证明试样含糖或甙。(3)Keller-Kiliani反应：于试样中加1ml0.5%三氯化铁醋酸溶液，沿管壁加浓硫酸1ml，二液面间显棕色或其它颜色，而醋酸层显蓝色，证明样品中含-去氧糖。(4)将试样滴在滤纸上，滴加Kedede试剂，显红棕色为阳性反应，证明含，不饱和内酯环强心甙。Kedde（3，5-二硝基苯甲酸）：检查强心甙、-不饱和内酯(喷洒剂:1g3,5-二硝基苯甲酸溶于50ml甲醇,加入1NKOH50ml)(5)Legal试验：试液加Legal试剂，显红色反应，证明含，不饱和内酯环。Legal:1g亚硝基铁氰化钠溶于100ml2N氢氧化钠-乙醇(1:1)的水溶液.这些反应对强心甙纯品较为明显，如生药提取浓缩液的颜色较深，则用第二、第三、第五反应则很难鉴别，只有待提到较纯的总甙后再反复试验，并配合纸层析及薄层检查，才能得出较确切的结论。三、强心甙的提取分离1、原生甙的提取汁液生药粉末+硫酸铵(1:1)残渣+乙酸乙酯(氯仿)滤液乙醇(80%)热提滤液浓缩液浓缩液+水过滤滤液(水液)进一步用下术集中方法提纯:乙醚液(叶绿素,油脂等杂质)(1)铅盐法:滤液(水液)+乙醚水液+醋酸铅水溶液(不产生沉淀为止)过滤滤液+乙醇50%乙醇液按常法用饱和硫酸钠水溶液、稀硫酸、或通硫化氢铅。过滤，滤液浓缩至小体积后即析出总甙。(2)吸附法：滤液用新煅烧的氧化镁或活性碳吸附，再用甲醇或其它适当溶剂解析，浓缩即得总甙。有时先用铅盐法或用溶剂法处理后，再用吸附剂吸附纯化。(3)溶剂法：滤液用氯仿等极性小的溶剂洗涤除去脂溶性杂质，然后加乙醇使成20%左右浓度，再加氯仿或乙酸乙酯提取，蒸干溶液即得总甙。(4)化学法：一些含醛基的强心甙，如铃兰甙等和Girard试剂TNH2NHCOCH2N+(CH)3Cl-或Girard试剂P(NHNHCOCH+NCl-）加热片刻，使结成水溶性腙，水液用氯仿等溶剂洗涤，以去不含醛基的杂质，再加酸至酸性，腙即水解，含醛基强心甙沉淀析出。或用氯仿等溶剂提取，蒸去溶剂即得总甙。2、次生甙的提取30-40C保持6-12小时以上，发酵酶解生药粉末+等量水拌区湿润发酵液+乙酸乙酯按上述提取原生甙方法提取和纯化即得次生甙。也可先提出原生甙再进行酶解。即将原生甙单体或总甙的水溶液加原植物中分离出来的酶或其它来源性质相同的酶，如能酶解-D-葡萄糖甙的苦杏仁酶在30-40C保持6-12小时以上，使酶完全后用有机溶剂提取，即得相应的次生甙。苦杏仁酶的制备：乙醚液（去除油脂）苦杏仁种子（100g）磨碎+乙醚浸泡二次苦杏籽凉干，去皮+0.1N氨过滤醋酸至PH4，过滤蛋白质水250ml及150ml水浸泡过夜浸提液滤液+酒精200ml过滤沉淀放置冰箱，过夜滤液+四倍量酒精滤出析出的杏仁酶沉淀，酒精洗后即置干燥器中干燥，备用（约可得500mg）。酶解：取试样100mg，加40mg苦杏仁酶及10-20ml水溶解后放置室温2昼夜，时时振摇，配合薄层层析检查，至水解完全后用氯仿等溶剂提取甙元。水液可用以析出葡萄糖。3、强心甙的分离和纯化上述方法所得总甙，一般应先选择适当溶剂进行多次分步结晶以分离纯品。或反复用分配分离法，即利用混合甙中各单体在两种互不相溶的溶剂中分配系数不同而进行分离。实验室小量制备时可用层析方法分离，常用硅胶吸附层析和分配层析或氧化铝吸附层析。但由于强心甙一般极性较大，所以氧化铝吸附层析用得较少。分到的纯品需经纸层析或薄层层析（常用硅胶-G板）鉴别纯度。四、强心甙的提取分离实例1、毛花洋地黄中的西地兰和狄戈辛OOOOOOHOCH3CH3CH3OHH3CCH3CH3OHOHRORORO毛花洋地黄甙丙洋地黄毒甙R=2-洋地黄毒糖-乙酰洋地黄毒糖-葡萄糖羟基洋地黄毒甙西地兰（去乙酰基毛花洋地黄甙丙）R=3个洋地黄毒糖R=3-洋地黄毒糖-葡萄糖狄戈辛（异羟基洋地黄毒甙）R=3-洋地黄毒糖（1）西地兰的提取70%乙醇60C热提减压，浓缩至含20%乙醇干燥叶粉乙醇液乙醇液放冷，去胶减压浓缩氯仿洗涤加乙醇使水液含22%醇滤液浓水液浓水液氯仿提取回收氯仿加少量甲醇、水析出混合甙结晶稀醇液氯仿液残留物氯仿层（主要为甲、乙甙）甲醇、氯仿、水振摇浓缩至结晶析出混合甙水层结晶（甙乙、丙）甲醇、氯仿、水振摇浓缩，过滤于甲醇中加Ca(OH)2水层甙丙西地兰(2)狄戈辛的提取加等量水拌匀80%乙醇热提减压浓缩到含20%乙醇干燥叶粉药粉醇提液氯仿提取浓缩碱水洗涤、水洗稀醇液氯仿液浓氯仿液浓氯仿液减压浓缩加丙酮，析出结晶70%乙醇重结晶残留物粗狄戈辛狄戈辛2、黄花夹竹桃中的强心甙黄夹甙甲：R1=CHO，R2=黄夹糖-2-葡萄糖O黄夹甙乙：R1=CH3，R2=黄夹糖-2-葡萄糖O黄夹次甙甲：R1=CHO，R2=黄夹糖H3C黄甲次甙乙：R1=CH3，R2=黄夹糖R1单乙酰黄甲次甙乙：R1=CH3，R2=乙酰黄夹糖OH黄夹次甙丙：R1=CH2OH，R2=黄夹糖R2OH黄夹次甙丁：R1=COOH，R2=黄夹糖提取方法(1)黄夹甙甲与乙的分离石油醚脱脂甲醇(100g/0.8L)60C减压浓缩夹竹桃果仁粉末残渣甲醇液放置,析出沉淀,过滤III级中性氧化铝,水洗涤60C减压浓缩浓缩液滤液洗液放置,析出沉淀,过滤沉淀85%异丙醇重结晶浓缩液沉淀黄夹甙结晶此结晶用逆流分溶法分离:取9个分液漏斗每个漏斗中各加用氯仿-乙醇(2:1)混合液饱和过的水150ml，在“0”号漏斗中加入结晶1g及用水饱和过的氯仿-乙醇(2:1)混合液，振摇5分钟，分层。将有机溶剂放入“1”号漏斗，同样振摇分层。而在“0”号水层中再加入新的750ml上述混合液，再振摇，分层。依次反复进行逆流分溶，最后分别得9个溶剂层和水层。2-5号水层合并蒸干，用水重结晶，得黄夹甙甲，熔点190-195C，D22-57（甲醇）。(2)单糖的提取和分离脱脂的黄花夹竹桃果仁粉末+5倍量蒸馏水及少量甲苯37C放置室温放置过夜,过滤乙醇冷浸一次,热提一次发酵四天+等体积乙醇药渣乙醇液60C减压回收乙醇至原体积的1/5,放冷,析出结晶III级氧化铝柱析结晶性单糖总甙苯、氯仿(1:1、1:3、1:4)、氯仿、氯仿-甲醇（99.5:0.5、99:1、98:2、95:5、9:1、1:1)甲醇依次洗脱60C减压浓缩甲醇重结晶洗脱液(100ml分批收集)5个部分单乙酰黄夹次甙乙黄夹次甙乙*洗脱液配合氧化铝薄层层析黄夹次甙甲展开剂：氯仿-甲醇（95:5),碘蒸气黄夹次甙丙显色,相近部分合并黄夹次甙丁3、羊角拗甙O羊角拗Strophanthusdivaricatus(Lour.)Hook.etArn.O为我国南方各省的野生植物,其种子含强心甙2%HOCH3以上,主要为羊角拗甙甲.临床证明这种混合甙完CH3全可以代替进口的强心药毒毛旋花子甙K.OH方法1:种子脱脂后,先用乙醇提取,提取液用O铅盐法去杂质,而后用乙醇-丙酮混合液中加夹竹桃糖甙乙醚,析出粗甙,再经氧化镁吸附法纯化.羊角拗甙甲过滤95%乙醇浸泡3天减压浓缩种子粉末+石油醚浸泡2天残渣乙醇提取液热水浸提依次加醋酸铅,碱式醋酸铅至不发生沉淀为止,过滤残留物水提液滤液稀硫酸脱铅,过滤硫酸铅硫酸铵析出胶质,过滤硫酸铵水液洗涤滤液滤液棕色胶质乙醇溶解丙酮至混浊,放置冰箱,过滤无机物乙醚胶质乙醇液滤液析出粗甙干燥溶于少量甲醇粗甙粗甙甲醇液加新煅烧的氧化镁拌匀,60C以下烘干置索氏提取器中用乙醇回流抽提乙醇浓缩后加丙酮即析出白色粉末总甙。方法2：种子脱脂后,先于低温用水提出其中的酶,再用稀乙醇提取。提取液再用提出的酶发酵酶解。用氢氧化铅去杂质，乙醚、氯仿等多次提取强心甙。这个方法比前烦琐，消耗溶剂较多，但乙醚提取部分较纯净。过滤水75%乙醇热提羊角拗种子粉末+苯浸泡脱脂种子种子浆浓缩30-35C发酵水液含酶醇提液浓缩液发酵液加醇至50%浓度,氢氧化铅去杂质50%醇液氢氧化铅及杂质稀硫酸脱铅,浓缩浓水液硫酸铅沉淀乙醚、氯仿乙醚液氯仿液浓缩浓缩总甙总甙上述乙醚部分总甙溶于少量氯仿及适量苯，通过氧化铝柱去色素并纯化，分别用苯与氯仿混合液（3：1、1：1）及氯仿冲洗，至洗脱液对Kedde试剂不显色为止，此层析后的乙醚部分混合甙曾制成针剂供临床试用。注:氢氧化铅配置法:50g醋酸铅溶于750ml沸水中,冷至30C左右滴加碱液(50g氢氧化钠溶于660ml水),不断搅拌,静置30min。通过一层5cm后的硅藻土层过滤,蒸馏水洗至中性,到入烧杯加100ml70%乙醇调成糊状备用。第五章皂甙皂甙存在于：豆科的甘草、毛茛科的白头翁、五加科的三七、远志科的远志、薯蓣科的薯蓣、延龄草科的七叶一枝花、葫芦科的罗锅底等植物中。水解三萜皂甙:甙元有30个碳原子,脱氢后生成匹(Picene)类衍生物(酸性)皂甙甙元甾体皂甙：甙元有27个碳原子，脱氢后生成Diels类衍生物（中性）糖（葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、木质糖、树胶糖）Picene类衍生物Diels类衍生物一、皂甙的性质一、皂甙的性质皂甙大都是白色无定形粉质，无明显的熔点，味苦而辛辣。一般都有刺激粘膜引起喷嚏等现象。皂甙的水溶液振摇后均可产持久不消失的肥皂样泡沫，因此对油脂等有乳化去垢作用。它的水溶液还能吸收大量的二氧化碳，所以可用于汽水等饮料工业。各种皂甙的水溶液有不同程度的溶血作用，因此，皂甙不能静脉注射，只可口服。但是如有胆固醇(Cho1estero1)存在，此溶血作用就会消失。有些皂甙对于冷血动物的毒性很高，万分之一的浓度即可用来毒鱼。皂甙极易吸潮，能溶于水、甲醇及稀乙醇，特别是热水和热醇；也能溶于醋酸、吡啶及二氧六环；不溶于苯、氯仿、乙醚及丙酮，所以通常都采用甲醇或乙醇提取。皂甙在丁醇或戊醇中也有一定的溶解度，尤其以含水的醇更好，因此皂甙经常从水溶液中用丁醇或戊醇抽提，借以与糖类和蛋白质等亲水性成分分开。皂甙在水溶液中能被重金属盐如铅盐、钡盐、钢盐等沉淀。甾体皂甙在乙醇溶液中能与胆固醇形成难溶的分子化合物沉淀，可利用这一点检查皂甙的类型。二、皂甙的颜色反应二、皂甙的颜色反应(1)皂甙遇浓硫酸初呈黄色，以后渐变红色，最后变蓝紫色。(2)皂甙遇发烟硝酸氧化呈棕红色，倾入水中产生褐色沉9(3)Iiebermann氏试剂：将几毫克皂甙溶在l毫升粗醋酐中，沿试管壁加入几滴浓硫酸，在两液层中间出现紫红色环。（4）Frohde氏试剂：将6毫克钼酸铵或钼酸酸溶解在1毫升的硫酸中配成，当皂甙遇此试剂时初呈横红色，渐变紫黑色。三、皂甙的鉴别(1)取1克生药粉末，加水10毫升，煮沸10分钟后滤出水液，振摇后若产生持久性泡沫(15分钟以上)则为阳性。(2)取二试管，分别注入5毫升01N盐酸及01N氢氧化钠，再各滴加三滴生药水提液，振摇1分钟，如二管形成的泡沫持久性相同则生药含三萜皂甙；如碱液管的泡沫较酸液管持久，则生药含甾体皂贰。(3)溶血反应：常以标准洋地黄皂甙纯品作对照。(3)溶血反应：常以标准洋地黄皂甙纯品作对照。血球悬浮液的配制：从家兔(或其他哺乳动物)静脉取5毫升血液，稍加搅拌，剔除纤维蛋白后加生理盐水(一般用085%氯化钠)50毫升摇匀，离心，倾去上层清掖，沉下的血球用生理盐水洗一次，量取血球，加生理盐水稀释成2悬浮液供试验用。取上述血球悬浮液5毫升，加5毫升生理盐水，1毫升洋地黄皂甙液(10毫克溶于100毫升8%乙醇)摇匀，室温放置5分钟，离心，与纯血球作对照比较，如血球全溶，则该体积血球悬浮液的数量即作为测定生药皂甙之用。皂成的测定：取l克生药，加6毫升70%乙醇回流半小时，放冷、过滤。取滤液l毫升，加血球悬浮液5毫升及生理盐水5毫升摇匀，放置5分钟，离心。如血球溶解(成鲜红澄明溶液)证明含皂甙。如欲比较几种皂甙(或含皂甙生药)溶血作用的强度，则必须在完全相同条件(温度、时间、浓度及红血球来源)下进行才能得出较正确的结论。四、皂甙的提取和分离四、皂甙的提取和分离各种皂甙的提取，常采用乙醇、甲醇、水或其他极性溶规有时在极性溶剂提取前用石油醚或乙醚等处理，以去除油脂、色素等杂质，也可将去除法质放在以后处理。1溶剂萃取法加食盐水饱和，水饱和的丁醇或戊醇粗皂甙的稀醇溶液或水溶液丁醇（戊醇）水洗（去还原糖）减压浓缩抽提液残渣即为总皂甙2溶剂沉淀法（利用皂甙难溶于丙酮和乙醚等溶剂的性质）粗皂甙溶在少量甲醇或乙醇中，逐滴加入数倍于醇体积的丙酮、乙醚或丙酮乙醚(1：1)的混合溶剂中，边加边摇匀，此时皂甙可成粉质折出。以布氏漏斗吸滤，干燥器中干燥，即得较纯的皂甙。3.氧化镁吸附法醇提出的粗皂甙的浓醇溶液+新煅烧过的氧化镁拌匀，60C以下烘干磨碎，在索氏提取器中用甲醇或乙醇抽提,浓缩抽提液,即可得较纯的皂。4胆固醇沉淀法（甾体类皂甙和胆固醇可形成难溶的分子化合物）胆固醇的饱和醇溶液至不再析出沉淀为止(混和后需稍加热)粗皂甙的乙醇浓溶液滤出沉淀顺次用水、乙醇，乙醚洗去糖、油脂和游离的胆固醇，干燥沉淀在索氏拍提器中用苯、二甲苯或乙醚等溶剂抽提（解离出胆固醇）残留物即为纯游离皂甙5铝盐沉淀法中性醋酸铅溶液粗皂甙的水或醇溶液沉淀(酸性皂甙)碱式醋酸铅滤液沉淀(中性皂甙)在水或稀醇中按常法脱铅,过滤减压浓缩清液两部分总皂甙。6层析法以上几种方法，除一些比较简单的皂甙可分到单体外，一般还只能得到较纯的总甙。要进一步分离单体，层析就是经常采用的一种手段。与其他的甙类一样，由于皂甙极性大，常用低活性氧化铝或硅胶作吸附剂。如将皂甙先行乙酰化，则可用活性氧化铝层析，产物再行水解如前所述。五、皂甙的提取分离实例五、皂甙的提取分离实例1白头翁皂甙白头翁是医治阿米巴痢疾的有效中药，其中皂甙的含量在9%左右，其主要成分为三萜类酸性皂甙,熔点930C(分解),分子式C45H76O20;水解得甙元一C20H4804和葡萄糖、鼠李糖及一尚末识别的糖。乙醚脱脂乙醇热提,浓缩丙酮白头翁粉药粉浓缩液析出粗甙乙醇热溶,放冷甲醇,丙酮-乙醚(1:1)MgO拌和,乙醇热提析出沉淀析出皂甙乙醇液浓缩析出白头翁皂甙2薯蓣皂甙和薯蓣皂甙元薯蓣皂甙元(Dioscin)是薯蓣科植物薯蓣Dioscoreatokoro等的主要成分，针状结晶,熔点275280C,不溶于水,可溶于乙醇、甲醇或醋酸,其甙元(Diosgenln)熔点204207C,D129(氯仿)。可溶于一般有机溶剂,是一个很好的合成激素的原料。提取方法：甲醇回流减压浓缩加水溶解薯预根粉甲醇提取液残留物水液石油醚脱脂,水饱和正丁醇提取减压浓缩加入大量丙酮提取液浓缩液析出沉淀，过滤用水洗涤数次，甲醇重结晶二次沉淀薯蓣皂甙水解：水解：2N盐酸甲醇溶液回流3小时加水稀释,减压蒸去甲醇,过滤薯蓣皂甙甲醇液固体物水洗涤后在乙醇中结晶水溶液固体物薯蓣皂甙元(针状结晶)糖的部分鉴定：将上述水解后滤去固体的水溶液,用碳酸钠中和后,在层折纸上与对照样品一起层折,展开剂用正丁醇醋酸-水(4：1：5),以对甲氧基苯胺显色,证明为葡萄糖和鼠李糖。水90一l00C加热10小时,过滤2硫酸浸泡,加压至2.5公斤/厘米2水解6小时,放出酸水生药水液残渣用水冲洗,加l%工业氢氧化钠中和,加压l公斤/厘米30分钟,放出碱掖粉碎压干,烘干药渣无水汽油(沸点80一120C)热提18小时左右药渣(含水量不超过10)投入提取罐浓缩至1：45(甙元与溶剂比),静置乙醇中重结晶提取液薯蓣皂甙元结晶薯蓣皂甙元精品。3远志皂甙元远志PolygalatenuifoliaWilld系常用中药之一，主要用于祛痰，其中皂甙的含量约为4，提取方法如下：石油醚脱脂酒精回流三次，过滤在冰箱中放置2天，生药粉末药渣提取液析出大量粉质过滤少量酒精洗涤溶于十倍量的甲醇,加活性炭脱色,过滤，浓缩至1/3体积粉质克粗皂甙滤液加等量丙酮使沉淀分出，过滤丙酮洗涤(重复操作二次)浓缩液沉淀白色粉质。熔点220-230C。远志皂甙易洛于水，具有一般皂甙的性质，无旋光性，在酸液中水解后，可分得两种皂甙元结晶，其一分子式为C27H40O8熔点272C，另一分子式为C30H48O8，熔点248C。4七叶一枝花皂甙七叶一枝花Parispolyphylla是一种草药，有清热解毒、消肿散瘀作用，并试用于治疗癌症。其中甾体类皂甙含量较高，水解后的甙元主要为薯蓣皂甙元，皂甙提取方法如下：95%乙醇回流三次减压浓缩石油醚脱脂七叶一枝花根粉乙醇抽提液残留物残留物加水溶解正丁醇抽提水洗后减压浓缩溶于少量乙醇,加大量丙酮水液正丁醇提取液残留物过滤,干燥析出沉淀物淡黄色皂甙粉质。第六章黄酮体等中性成分第一节黄酮体黄酮体（Flavonoids）：广义讲是由C6-C3-C6构成的化合物的总称，大部分有如下骨架8o123O 黄酮：R=H7c2146c365R 黄酮醇：R=OH5o4OO3234214R5165OO双氢黄酮：R=H查尔酮双氢黄酮醇：R=OHO7O1236C=OH45365OO异黄酮奥弄OOOHOH黄烷醇花青素狭义讲：黄酮，黄酮醇，双氢黄酮，双氢黄酮醇，查尔酮，异黄酮及其衍生物叫作黄酮。一、黄酮体的性质一、黄酮体的性质查耳酮呈黄色或橙黄色；黄酮、黄酮醇，有游离羟基时呈淡黄色；而双氢黄酮、双氢黄酮醇、异黄酮则无色。黄酮甙，一般能溶于水、稀乙醇、甲醇和乙酸乙酯等极性溶剂中。由于它含酚性羟基，尚能溶于吡啶、二甲基甲酰胺等碱性溶机所以还可用吡啶水、二甲基甲酰胺乙醇等重结晶。黄酮体的甙元，一般能溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等溶剂但不溶于水，所以也可用乙醇热溶后加少量水的方法精制。二、黄酮体的颜色反应。(1)盐酸镁还原反应和钠汞齐还原反应：将样品溶于热甲醇(或乙醇)中，加镁粉(或锌粉)，再加浓盐酸后，黄酮、黄酮醇或双氢黄酮酵呈橙黄至紫红色。例如野菊花黄酮呈橙黄色。但查耳酮、异黄酮不变化。异黄酮的样品少量与钠汞齐一起倒在水中煮沸片刻，过滤，滤液用盐酸酸化析出沉淀，沉淀转溶于乙醇后呈鲜黄至红紫色。例如大豆贰呈鲜黄色。(2)三氯化铝反应：将样品溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液，3羟基黄酮(黄酮醇)、5经基黄酮因与铝产生整合物而呈鲜黄色。(3)锆柠檬酸反应：样品05一l毫克，用甲醇10毫升加热溶解，加2%二氯氧锆(Zr0C12)甲醇溶液1毫升，5羟基黄酮例如野菊花黄酮及3羟基黄酮例如槲皮素呈鲜黄色。然后再加2%柠檬酸甲醇溶液1毫升，用水10毫升稀释时，5羟基黄酮液的颜色显著减退，而3羟基黄酮液仍呈鲜黄色。因为与锆产生整合物呈鲜黄色，但5羟基黄酮与锆的螯合物是六元环，比3羟基黄酮与锆的五元环螯合物的螯合力弱，容易被弱酸破坏。三、黄酮体的提取和分离1黄酮甙的分离方法(1)溶剂法：一般用水、甲醇、含水乙醇等极性溶剂加热提取。提取液减压浓缩冷却后，有时即析出粗结晶。沸水煮沸20分钟，过滤放冷，析出胶状物质滤取干燥刺槐叶滤液粗刺槐甙。95%乙醇回流过夜除去析出的蜡状物减压浓缩野菊花提取液滤液浸膏90%乙醇热溶，放置，过滤乙醚、氯仿洗涤析出的黄色固体粗野菊花黄酮。(2)铅盐沉淀法：蒸干水溶解醋酸铅饱和水溶液沉淀通硫化氢脱铅提取液残渣水溶液滤液滤液，减压浓缩.放置(有时能析出甙)甲醇、乙醇、乙酸乙酯浓缩放置浓缩物提取液粗甙。悬浮在甲醇中通硫化氢脱铅,过滤碱式醋酸铅饱和水溶液滤液沉淀滤液减压蒸干层析粗品纯甙2黄酮体甙元的分离方法(1)溶剂法：1.(1)中的乙醚提取液蒸干后，进一步用极性小的溶剂分步重结晶。如先用热苯提，苯提取液放冷后往往有结晶析出，母液浓缩后有时又可得到结晶.如无结晶析出，以稀碱液如5%碳酸钠提取，使成钠盐转溶于水，水层酸化后再用氯仿、乙醚等有机溶剂抽提，蒸去溶剂就得粗甙元(2)水解法：黄酮体的甙，除极个别外（例如葛根素、牡荆素）其糖基都连接在酚性经基的氧原子上，易被酸水解为贰元和糖。一般取甙1克加10%盐酸1升，用小火加热水解2小时，冷后滤取固体，水洗，干燥即得甙元。用水或稀乙醇抽提粗甙，然后用酸水解得甙元。注：双氢黄酮在2位有不对称碳原子，用酸水解时所得甙元己不是原来的光学活性的甙元，而是消旋的甙元。因此，双氢黄酮甙最好用酶(例如苦杏仁酶)水解，以便保持原来旋光性。3黄酮体的层析(1)氧化铝层析：3位或5位有游离羟基时，容易与铝产生整合物，难以洗脱，所以用得很少。但是有时对一些3位和5位没有羟基的黄酮体，往往也可用氧化铝得到较满意的分离效果。例如葛根中的异黄酮的5位没有羟基，即可将碱式醋酸铅沉淀部分中得到的异黄酮混合物溶解于水饱和的正丁醇，再通过氧化铝柱，用同样溶剂洗脱就得到四个异黄酮。我们从新疆胀果甘草中分得的甘草查耳酮在2和6位都无羟基，因此用氧化铝柱层析分离获得成功。(2)聚酰胺层析：对于各种黄酮体都有较好的分离效果。例如甙和甙元的分离，闭环双氢黄酮和开环查耳酮的分离等。粗的水提取物可以直接上柱，而且样品的损失少。洗脱液常用稀醇。一般将样品溶解于水后上柱，然后先用水洗去糖和其他杂质，继以不同浓度的稀乙醇(如30%，50%，90%乙醇)洗脱，洗脱液分别用纸层折检查，Rf值相同的流份合并，浓缩即得。用聚酰胺已分离了双氢黄酮补骨脂甲素和查耳酮补骨脂乙素，并解决了结构，合成了补骨脂乙素，它具有扩张冠状动脉作用和抑制Hela细胞作用。四、黄酮体的提取分离实例四、黄酮体的提取分离实例1芸香甙沸水提取三次减压浓缩冷却后加异丙醇蛋白质和胶状物荞麦叶切碎提取液滤液加适量水，蒸去异丙醇，趁热过滤放冷溶解于无水乙醇，过滤滤液粗芸香甙滤液加适量水，蒸去乙醇并加入少量硅胶搅拌再趁热过滤滤液冷却后即有纯的芸香甙结晶析出。2黄芩甙加10倍量水，加热煮沸l小时浓盐酸酸化至PHl2，黄芩轧碎提取液酸液加热至80左右，冷后离心加入适量水,浓氢氧化钠溶液,调节至PH7，加等量乙醇黄芩甙粗品滤除杂质浓盐酸至PHl一2充分搅拌，加热黄芩甙钠盐溶液黄芩甙钠盐溶液滤取少量50%乙醇洗涤，干燥6一7倍量95乙醇洗涤，干燥黄芩甙黄芩甙较纯的黄芩甙。3补骨脂黄酮体苯加热提取三次5%碳酸钠振摇补骨脂种子粉末提取液黄酮体成酚的钠盐转溶盐酸酸化，氯仿提取三至四次浓缩于碱水氯仿提取液析出黄色固体乙醚少量聚酰胺粉拌匀，挥发去乙醚后乙醚液聚酰胺粉装于聚酰胺粉的层析柱上端先用水冲洗,继用50%甲醇洗脱,至洗脱液呈浅黄色(甲素已基本洗脱完)50%甲醇洗脱液浓缩白色针状结晶的补骨脂甲素70%甲醇洗脱浓缩70%甲醇洗脱液黄色针状结晶的补骨脂乙索4甘草查耳酮氯仿回流提取,浓缩新疆胀果甘草生药粉末棕黄色粉末拌在聚酰胺粉上，依次用水、稀乙醇洗脱进行聚酰胺柱层析收集30一50%乙醇洗脱的黄色色带(蒸去经氧化铝往层折，氯仿洗脱浓缩,放置过夜溶剂）粉末黄色流份合并结晶析出，用乙醇水重结晶后得桔黄色针状结晶，为新疆甘草查耳酮5(十)儿茶素酒精回流浓缩热溶于水,冰箱放置过夜,过滤雉子根粉醇提液浸膏4%明胶溶液,在水浴上加热搅拌，使鞣质沉淀凝聚，过滤滤液滤液减压浓缩氯仿振摇三次,乙醚振摇10次浓缩液乙醚液合并浓缩后有少量结晶析出。弃去,倾出水热溶放置冰箱上清液再浓缩得粗儿茶素水溶液析出(十)儿茶素结晶上述儿茶素粗晶的精制及母液中儿茶素的分离可用聚酰胺粉。30%酒精洗脱液减压浓缩至小体积，放置冰箱，即析出白色细长针状结晶，过滤，再用水重结晶一次，空气干燥，熔点93一95C。蒽醌类811，4，5，8位叫位7922，3，6，7位叫位610354蒽醌常存在于高等植物的蓼科、豆科(特别是山扁豆属)、茜草科和低等植物地衣类和菌类的代谢产物中。又如变质大米中的霉菌Penicilliunislanidium产生的黄色毒素Luteoskyrin是一种双分子双氢蒽醌，微量就可引起肝硬变。某些羟基蒽醌可作为颜料使用，如茜草中的茜素(A1izarin1，2二羟基蒽醌)和红紫素(Purpurin，1，2，4三羟基蒽醌)等。许多中草药泻药如西宁大黄及Aheumpalmatum各种鼠李属（Rhamnus）植物的皮中主要致泻成分就是蒽醌类衍生物。蒽醌类衍生物除致泻作用外，大黄酸(Rhein)、大黄素(Emodln)还有抑菌作用。一、蒽醌类的颜色反应(1)碱显色：一般蒽醌类本身具有颜色，所以含有蒽醌的生药部位有颜色(例如大黄的根茎呈黄色)，如滴加氨水或碱液则显色更深(如大黄显微红至红色)。将生药用乙醇等提取后，于提取液加氨水或碱液(最好是5%氢氧化钠和3氨水的混合液)，能显很深的颜色。(2)酸显色：蒽酮类与浓硫酸反应呈红至红紫色。(3)醋酸镁显色：蒽醌甲醇溶液中，加02505%醋酸镁甲醇溶液即显橙、红、紫、蓝等颜色。此溶液也可作为纸层析的显色剂。产生这些颜色的条件是必须至少有一个位的羟基。另外，羟基的位置不同产生的颜色也不同。一般在位羟基的对位有羟基的蒽醌，与醋酸镁反应显紫色(例如1，4，8三羟基蒽醌)；在位羟基的邻位有羟基的蒽醌与醋酸镁反应显蓝色(例如1，2二羟基蒽醌)；其他位羟基蒽醌与醋酸镁反应一般显橙至红色。二、蒽醌类的提取和分离羟基的位置不同其所呈现的酸性也不同。只有位羟基的蒽醌仅溶于苛性钠(钾)溶液，而位羟基的蒽醌能溶于碳酸钠(钾)溶液，位羟基多的蒽醌则能溶于碳酸氢钠(钾)溶液。将生药用有机溶剂(如氯仿、苯)和30%硫酸回流，蒽醌全部转入有机溶剂层，然后以各种碱液即碳酸氢钠、碳酸钠及氢氧化钠溶液振摇，使转溶于碱溶液，分别酸化，再用有机溶剂提取。有机溶剂层水洗，干燥，蒸于就得粗蒽醌，然后进行重结晶精制(见实例1)。层析分离蒽酮类衍生物时一般不用氧化铝作吸附剂，因氧化铝对经基蒽酮吸附能力太强，难以洗脱。常用磷酸氢钙、硅胶、聚酰胺粉等，用硅胶为多。将蒽醌混合物溶于氯仿、丙酮等有机溶剂，然后拌在小量的磷酸氢钙上，晾干后，加在预先装好的磷酸氢钙柱(干装)上，用苯、氯仿等有机溶剂展开、洗脱。磷酸氢钙的PH不同，其吸附能力就不同，因此，须预先用磷酸调节到所需的酸度。适合于分离一般秒年个斤毫蒽醌的磷酸氢钙处理方法如下：将磷酸氢钙粉末于等量的PH2左右的磷酸溶液(85%磷酸用水稀释到110左右的浓度)中浸一夜，然后过滤，用水充分洗，再用丙酮洗，最后加热，干燥即得。三、蒽醌类的提取分离实例苯-20%硫酸回流5%KHCO3水层HCl黄色大黄酸沉淀(I)大黄粉苯提取液5%Na2CO3苯层水层HCl黄色沉淀大黄素（III）橙红色芦荟大黄素（II）5%KOH苯层HClCHCl30.5%KOH苯层水层橙色沉淀氯仿液HCl水层红色沉淀(II)5%KOH氯仿层氯仿层HCl水层浅黄色沉淀大黄素-6-甲醚(IV)+大黄酚(V)2决明子蒽醌决明子种子1公斤+氯仿(2升)和90硫酸(250毫升)提取三次合并氯仿提取液浓缩拌在少量磷酸氢钙上，把它加在预先装好的磷酸氢钙(干装)柱上用苯展开后，分为五个色带，继续用苯洗脱，洗脱液按下述方法处理。第一条黄色带：蒸干苯后所得的黄色物质，用石油醚提取，再进行磷酸氢钙层析，石油醚展开，又分为两个部分。下面的黄色部分，蒸干石油醚后，以甲醇重结晶，得大黄酚200毫克，熔点193一1940C。上面的黄色部分，同样处理，得大黄素6甲醚10毫克，熔点206C。第 二 条 黄 色 带：蒸 干 苯 后 得 针 状