GA∕T 1907-2021 法庭科学 生物检材中克百威等7种氨基甲酸酯类杀虫剂检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf

HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中克百威等 7 种氨基甲酸酯类杀虫剂检验 液相色谱-质谱法 Forensic sciences Examination methods for seven carbamate insecticides including carbofuran in biological samplesLC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本文件起草单位：辽宁省公安厅刑事技术总队、广西省厅物证鉴定中心、广东省厅刑事技术中心、深圳市公安局刑科所、公安部物证鉴定中心。本文件主要起草人：吴迪、李杰敏、黄丽、赵海雨、黄克建、李鹏、李树辉、王瑞花。GA/T 1 法庭科学 生物检材中克百威等 7 种氨基甲酸酯类杀虫剂检验 液相色谱-质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材（血液、尿液）中克百威、灭多威、甲萘威、异丙威、涕灭威、残杀威、抗蚜威的液相色谱-质谱定性定量分析方法。本文件适用于法庭科学生物检材（血液、尿液）中克百威、灭多威、甲萘威、异丙威、涕灭威、残杀威、抗蚜威的定性定量分析。其他检材可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材中 7 种氨基甲酸酯类农药（基本信息参见附录 A）进行提取、净化及浓缩，采用液相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)三氯甲烷；b)乙酸乙酯；c)乙腈：色谱纯；d)甲酸：色谱纯；e)0.1%甲酸溶液：移取 0.5mL 甲酸用水定容至 500mL；f)标准溶液：1)1.0mg/mL 标准物质储备液：根据克百威、灭多威、甲萘威、异丙威、涕灭威、残杀威、抗蚜威标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用乙腈分别配制成 1.0mg/mL 标准物质储备液，密封，-18以下保存，有效期 3 个月。或采用市售标准溶液；GA/T 2 2)单一标准物质工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 的克百威、灭多威、甲萘威、异丙威、涕灭威、残杀威、抗蚜威标准物质储备液，用乙腈配制成浓度为 10g/mL 的单一标准工作溶液，密封，04保存，有效期 1 个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由1.0mg/mL 标准物质储备液配制得到；3)混合物质标准工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 的克百威等 7 种标准物质储备溶液，用乙腈配制成浓度为 1g/mL 的混合标准物质工作溶液，密封，04保存，有效期 1 个月。实验中所用其他浓度的混合标准物质工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质储备液配制得到。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)有机微孔滤膜：0.22m；c)固相萃取柱：WONDASEP NH2（200mg/3mL）柱或等效固相萃取柱。注：WONDASEP NH2柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）；b)振荡器；c)电子天平：分度值 d0.01mg；d)离心机；e)移液器；f)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 液液萃取 移取血液或尿液 0.2mL 置于具盖离心管中，加入乙酸乙酯 0.8mL，振荡 5min，不低于 8000r/min 离心 3min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 60浓缩至干，残留物用乙腈 0.2mL 溶解，经有机微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。注：检材样品取样量、混合溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。7.1.1.2 固相萃取 移取血液或尿液 0.2mL 置于具盖离心管中，加入 0.8mL 水振荡 5min，不低于 8000r/min 离心 3min，取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中（使用前用 2mL 三氯甲烷活化），上清液过柱流速不超过1mL/min，用 0.5mL 三氯甲烷洗脱，洗脱液过柱流速不超过 1mL/min，收集洗脱液，置于浓缩器上 60浓缩至干，残留物用乙腈 0.2mL 溶解，经有机微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。7.1.1.3 沉淀蛋白 GA/T 3 移取血液或尿液0.2mL置于具盖离心管中，加入0.8mL乙腈，振荡5min，不低于8000r/min离心3min，取上清液，经有机微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。注：检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。7.1.1.4 质控样品制备 移取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份分别添加灭多威、甲萘威和涕灭威的单一标准物质工作溶液，按7.1.1.1操作时使灭多威浓度为 0.1ng/mL，甲萘威浓度为0.5ng/mL，涕灭威浓度为 2ng/mL，按7.1.1.2和7.1.1.3操作时使灭多威浓度为 0.5ng/mL，甲萘威浓度为 1ng/mL，涕灭威浓度为 2ng/mL，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1液相色谱-串联质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：RaptorTMAR C18（100 mm2.1mm，2.7m）或其他等效柱；注：RaptorTMAR C18为 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)柱温：35；c)流动相 A：0.1%甲酸溶液；d)流动相 B：乙腈；e)流速：0.2mL/min；f)洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1；表 1 梯度洗脱条件 时间 min 流动相A 流动相B 0.0 20%80%1 40%60%4 60%40%4.2 20%80%5 20%80%g)扫描方式：正离子扫描；h)监测方式：多反应监测（MRM）；i)电喷雾电压：4500V；j)雾化气压力：50psi；k)气帘气压力：35 psi；l)辅助气压力：50psi m)离子源温度：450；n)定性、定量离子对和去簇电压、碰撞能量条件见表 2。GA/T 4 表 2 定性、定量离子对和锥孔电压、碰撞能量条件 目标物 定量离子对 定性离子对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 灭多威 163.1/88.1 163.1/88.1 32 14 163.1/106.1 32 13 抗蚜威 239.2/182.1 239.2/182.1 33 21 239.2/72.0 33 20 涕灭威 208.1/116.2 208.1/116.2 30 12 208.1/89.2 30 26 残杀威 210.1/168.2 210.1/168.2 40 10 210.1/111.0 40 15 克百威 222.1/165.1 222.1/165.1 53 17 222.1/123.2 53 28 异丙威 194.2/95.0 194.2/95.0 52 13 194.2/152.1 52 13 甲萘威 202.1/145.0 202.1/145.0 54 17 202.1/127.0 54 41 7.1.2.2 进样 分别吸取空白溶剂、添加样品提取液、空白样品提取液、检材样品提取液、混合标准物质工作溶液，按7.1.2.1仪器条件进行检测。7.2 定量分析 7.2.1 样品前处理 移取血液或尿液0.2mL两份，按7.1.1.1或7.1.1.2进行操作，得到检材样品提取液，供仪器检测。取与检材样品等量的相似基质空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液，供仪器检测。外标-单点校正法法：取与检材样品等量的相似基质空白样品两份，添加相应目标物的单一标准物质工作溶液，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。添加样品中目标物含量应在检材样品中目标物含量的（100 50）%范围内。外标-校准曲线法：取与检材样品等量的相似基质空白样品，添加相应目标物的单一标准物质工作溶液，配制成浓度在1ng/mL100ng/mL范围内的添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。校准曲线应不少于6个浓度点（包括空白样品）。检材样品中目标物的含量应在校准曲线的线性范围内。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 同 7.1.2.1。7.2.2.2 进样 分别吸取检材样品提取液、空白样品提取液、添加样品提取液，按7.1.2.1仪器条件进样分析。每份检材样品提取液和添加样品提取液各进样分析23次。7.2.3 计算 GA/T 5 7.2.3.1 计算含量 7.2.3.1.1 外标-单点校正法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，按公式（1）计算检材样品中目标物的含量。=AA.(1)式中：检材样品中目标物的含量；A检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值；A添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值；添加样品中目标物的含量。7.2.3.1.2 外标-校准曲线法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值为纵坐标、添加样品提取液中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品提取液中目标物的峰面积值，按公式(2)计算出检材样品中目标物的含量。=y-ba.(2)式中：检材样品中目标物的含量；y 检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值；a 线性方程的斜率；b 线性方程的截距。7.2.3.2 计算相对相差 记录 7.2.3.1 中计算得到的检材样品中目标物的含量，按公式(3)计算相对相差：12100%-RD=.(3)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；1、2两份检材样品中目标物的含量；两份检材样品中目标物含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准物质工作溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的两对定性离子对与标准物质工作溶液一致，且离子对丰度比与浓度接近的标准物质工作溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。XGA/T 6 表 3 离子对丰度比的最大允许相对偏差范围 离子对丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 20 25 30%50%8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准物质工作溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准物质工作溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.2 定量结果评价 2份检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量为2份检材样品的平均值。2份检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠，应按7.2重新进行定量分析。相关实验数据及谱图参见附录B。GA/T 7 附录 A（资料性）克百威等 7 种氨基甲酸酯类杀虫剂的基本信息 克百威等7种氨基甲酸酯类杀虫剂的相关信息见表A.1。表A.1 克百威等7种氨基甲酸酯的相关信息 中文名称 CAS 编号 英文 分子式 分子量 母离子加成 类型 克百威 1563-66-2 carbofuran C12H15NO3 221.25+H 灭多威 16752-77-5 methomyl C5H10N202S 162.23+H 涕灭威 116-06-3 aldicarb C7H14N2O2S 190.26+NH4 残杀威 114-26-1 propoxur C11H15N03 209.24+H 甲萘威 63-25-2 carbaryl C12H11NO2 201.22+H 抗蚜威 23103-98-2 pirimicarb C11H18N4O2 238.29+H 异丙威 2631-40-5 isoprocarb C11H15NO2 193.24+H GA/T 8 附录 B（资料性）克百威等 7 种氨基甲酸酯类杀虫剂谱图及检出限 B.1 克百威等7种氨基甲酸酯类杀虫剂的相关谱图见图B.1图B.8。图B.1 克百威等7种氨基甲酸酯类杀虫剂的总离子流图 图B.2 克百威色谱图 图 B.3 灭多威色谱图 图 B.4 涕灭威色谱图 GA/T 9 图B.5 残杀威色谱图 图B.6 甲萘威色谱图 图B.7 抗蚜威色谱图 图B.8 异丙威色谱图 GA/T 10 B.2 检出限、定量限见表 B.1表 B.3。表 B.1 液液萃取的检出限和定量限 目标物 检出限 ng/mL 定量限 ng/mL 定量限 RSD 克百威 0.1 1 5.035%灭多威 0.1 1 4.419%残杀威 0.1 1 2.992%抗蚜威 0.1 1 3.083%异丙威 0.1 1 1.163%甲萘威 0.5 1 8.316%涕灭威 2 5 6.489%表B.2 固相萃取的检出限和定量限 目标物 检出限 ng/mL 定量限 ng/mL 定量限 RSD 克百威 0.5 2 5.035%灭多威 0.5 2 4.419%残杀威 0.5 2 2.992%抗蚜威 0.5 2 3.083%异丙威 0.5 5 1.163%甲萘威 1 2 8.316%涕灭威 2 10 6.489%表B.3 沉淀蛋白的检出限 目标物 检出限 ng/mL 克百威 0.5 灭多威 0.5 残杀威 0.5 抗蚜威 0.5 异丙威 1 甲萘威 1 涕灭威 1 _