NY∕T 3085-2017 化学农药 意大利蜜蜂幼虫毒性试验准则(农业).pdf

ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3085一2017化学农药意大利蜜蜂幼虫毒性试验准则Chemical pesticide-Guidelioe 00 hooeybee(Apis mellifera L.)larval toxicity test 2017-06斗2发 布2017-10-01实施12、中华人民共和国农业部发布NY/T 3085-2017 刚吕本标准按照G/T1.1-2009给出的规则起草。本标IH:与经济合作与发展组织(OEC)化学品测试导师J:-10.237(2013年)(ill蝉m大利蜜蜂)幼虫毒性试验，一次暴露)(英文版)、指导文件草案(2014年2月25日)(蜜蜂(12大利蜜蜂)41虫毒性试验，lliSl暴绍)(英文版)技术内容相同。本标准在验证各平技术指标的基础上做了结构和编辑性修改:一一为与现有标准一致，将标fl名称修改为化学农药意大利蜜蜂幼虫毒性试验附则),一一正文中，lim术语和定义，一一将移植棉修改为聚苯乙烯或聚丙烯材质的育王合基，一一蜜蜂幼虫室内饲养时，删除在48孔均养板巾添加115%甘id1杀在J浓的建议;一一孵化销或孵化盒内相对温度修订为50%-70%，-删除试验fIj!IJ巾对物质进行化学分析的建议;计盐单位改为我国法定叶iii单位。ih注13本文刊的某些内容可能涉及专利。木文件的发布机构不承担识jjlJ这些专利的责任。本标准由农业部种植业组迎司提，L:并归仁l。本标准起草单位.浙江省农业科学院农产r111质业标If!研究所。本标准主要起草人苍涛、陈丽萍、吴长兴、赵学平、吴迟、吴声敢、汤涛、徐明飞、孩苟明、王强、胡秀卿、俞瑞鲜。NY/T 3085-2017 化学农药意大利蜜蜂幼虫毒性试验准则1 范围本标准规定了兹大利蜜蜂幼虫苦J11试验的术语和定义、试验方法、数据处理、质盐控制、试验报告的基本要求。本标准适用于测试和l评价化学农药对蜜蜂幼虫毒性试验，其他类型的农药可参照使用。本标准不适月3于易挥发和jli1if:jrp的化学农药。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文例，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文抖。G/T 31270,10-2014 化学农药环境安全评价试验liJ则第10部分蜜蜂急性毒性试验3 术语和定义3.1 3.2 3.3 3,4 3.5 3.6 3,7 下列术语和l定义适用于本文件。校正死亡率rrected mortality 经空白对!(l组l当然死亡率如l以校正的药开IJ处理组的死亡率。半致死剂量median leth,1 dose 一定试验观察H、I间内，引起50%供试生物死亡时的供试物剂it.片LD50表示。注单位为微克有效成分每到IJ.!ll(t-tg 0，05)的供试物:li高剂茧，JjiNOED表示。注t单位为微克有效成分每到J血(/lgO，OS)I甘供试物最高浓度，用NOEC表示。注.单位负克有效成分每千克饲料(mga./kg 饲料)。蜜蜂幼虫larva of honc)bee NY/T 3085-2017 蜜蜂卵孵化后至变态化踊前的虫态。3.8 预自由prcpupa 蜜蜂老熟f，JJ虫停止J1!Z.食至蜕皮成蚓之前的发育阶段。3.9 踊PUP;蜜蜂老熟幼虫停止J1!Z.食后至成虫羽化前的一个发育阶段。化自mIlJ,i1J.1(结构解体，成虫结构形成，初次出现翅。3.10 3.11 f=1 虫。羽化emergcnce 蜜蜂由自1经过蜕皮，第4d至第3d幼虫的死亡数.第fjL试物处理组和1空白5 试验方法5.1 材料和条件5.1 1 供试生物5.111 供试生物及来源、羽化率.通过对品无可见效应开IJiJ:%1t信限。供试生物为意大利蜜蜂(1户smeLLi IelL.)f，J虫.来自饲料充足、健康、无疾病和寄生虫、4周内未接受抗生素和抗峨虫药物治疗的蜂群。5.112 蜜蜂幼虫的获取试验月3蜜蜂幼虫应来自3个不同的蜂群.分另1作为各剂量;处理的不同重复组。在蜜蜂繁殖剔，试验前将蜂王限制在蜂箱中放置有空Ji1JW的蜂王产卵控制器内(参见附录A)，j亥控制IJ:M应避免放置在蜂箱边缘。翌日检查新卵产出情况.并从产卵控lliJ#)i1移I:t蜂王，避免在试验蜂牌上再次产卵，蜂王的隔离NY IT 3085-2017 时间最多不超过30h.移虫前将移虫针、人工育王台基夜1立在70%汹精(体积比)或其他i莓ilU1至少30 min进行i肖奇后，1晾干待用。产卵3d 百川移虫钊将1EI龄的幼虫随机转移至育王f731lerlI(移虫环境淑度不低于20.C).每个台基放入1头J虫，在试验条件下，用人工饲料饲养。5.1.2 人工饲料5.1.2.1 人工饲料的组成人饲料由酵母提取物、葡萄椭、果圳、无菌水平11鲜蜂王浆配tliJ而成。不同日自蜜蜂f)J虫使用的3种不同饲料配方知l下(均为主iE比)饲料A，酵母提取物葡萄糖*甜饲料，酵母提取物葡萄糖饲料C醉母提取物5 1.2.2 人工饲料的试验开始前.首iE比1 1 i昆匀，放件下冷冻储存5.1.2.3 7.1吸除.第81包培养饭)f.5.1.4 供试物jj飞试物E5.1.5 主要仪一一蜂王产gfJ校rn移虫针，洁净工作k;聚苯乙烯或聚一一48孔细胞培养板;一一化踊饭，含有利J水饲喂器的孵化盒或孵化箱，一一移液器，一-ffiU.支、湿度控制设施，一-jffit.显皮记录仪;一一电子天平囚5.1.6 试验条件试验在bZ度(34.5士O.5)C，黑H击的条件下.l!行。=1 6 6 37 50,7.5 7.5 33.5 50,30 50.1存iJU与鲜血革王浆以重:;-18C条(土0.5h)投l 20L饲料.Hd、第设J虫.应包或移液选m48孔IIT见附录0)。在JBl或硕国1i转至化踊板之前，保持相对湿度NY/T 3085-2017(95士5)%(推荐J!:lJ，饲养孔板r1子JI军部战有liJii童非jI饱和溶液的密闭容器内);幼虫或Jjjjl转至化蚓板之后至化蚓板放入孵化盒或孵化箱之前，保持相对湿度(80土5)%(推荐t)J虫饲养孔饭:l.干Jli:部*有低化俐li!平li容浓的密IlJ容器内)，化血雨板放入孵化企或孵化衍之后至试验结束，保椅相对湿度50%-70%。强个试骑过程rl-允许温度出现一定偏差.但不低于23C或高于40C.每24h内:1-现偏差次数不超过一次目不超过15min。5.2 试验操作5.2 1 蜜蜂幼虫急性毒性试验5.2.1 1 暴露途径蜜蜂幼虫达到4日龄(即附录C第4d)当天.每头f)J工11，投喂30L含有相应剂i1t供i式物的饲料C。染毒后24h,48 h每头幼虫分j)lJ投限40f.LL、50L不含供试物溶液的饲料C。每次投呗饲料前，如育王f;小有剩余饲料.YlIJ用一次性吸管或移i!，*1吸l除二It记录剩余封.如果使用水浴j样供i式物，如!投11畏的含供试物饲料rl供试物溶液的体积应;10%。如果使用有机i存剂溶解.其使用盐应尽可能降到!最低.;11目投峨的含供试物饲料rl供试物i容浓的体积应;5%.实际添加供试物i在液的ipfL;根据供试物。()i容IfIlJ.豆、有机前剂的部性综合考虑而定。5.2.12 预备试验在进行正式试验之前按正式试验的条例，以较大问lll设咒系列剂量组.通过预试!J)明确正式试验所币的合运剂iJ:iiHI;1。5.2.1.3 正式试验根据预备试验确定的剂量范网.按一定比例间距OL何级差应;3倍)设立不少干5个声IJ立组。同lIt设空白对!ft组，当使用ijiJ j容剂H才.增加l设Zi:?1￥开IJ，j!(!组，对I!(!组及各处理组均设3 个ili:Sl.句个豆复至少12头到J!:lJ，.染海1百观察蜜蜂J虫的中毒症状和其他异常行为身体但硬不il!)TIx轻微f9!碰元反应的纠J!ll判定为死亡，分别记录染毒后24h.48 h，721飞的死亡数.同时将死亡的幼虫取山。统-I染寻JZ结束及试验结束时饲料的剩余情况。5.2.1.4 限度试验改iT上限剂itI为100f.Lg a.i./J.9:t日jI在供i式物地100f.Lg a.i./J虫时与空白对1m组无.).轩差异，贝IJ元21继续试验。若冈供iJ!:物1容陆H限制.的13处卫I!剂盐无法达到100f.Lg a.i./幼虫l时，YllJ采HJ:lIk大浴缸f皮)11子i十J上|根剂盘。5.2.1.5 参比物质试验句次正式试验时增加参比物质处到组，打/c参比物质为乐果，设置剂盐为(8.8土O.5)g a.i./f)J!ll.5.2 2 蜜蜂幼虫慢性毒性试验5.2.2.1 暴露途径于蜜的幼虫3日龄Lljl附录Dti3 c!)、41:/龄、5日龄、6日龄当天.每天投日出含有相应剂ifJti式物的饲料，分别为20L饲料B、30L饲料C、40L饲料C、50L饲料C。每次投暇饲料Jtr.:!m育王合基中有剩余饲料.YlIJm-次性l吸管或移浓郁l吸除;JH;剩余iL如果使用711容解的供试物.Y!JJ投H民的含供试物饲料rl-f.旦成物的1在(J体积应;10%。如果伎川有相li1f开1Ji.科WI.;It使用fIi;应尽可能|哗fIJ1i低.:11且投畏的含供试物饲料巾供试物i容液的体积应;2%.实际添1m供试物浴液的主ifld根据供试物的榕仰皮、有相lj容齐IJ的312性综合-考虑而定。5.2 2.2 预备试验在ill行正式试验之前按正式试验的条例.以较大问l但设立系列浓度组ill行预备试验.以明确正式试验所主:;J己的合IE试验浓度范阻。5.2.2.3 正式试验根据预备试验确定的浓度范f1按一定比例间距OL何级主主应;31;)设立不少于5个剂lll:Il 0同4 NY/T 3085-2017 时设空|主1对!H组，当使mWJ济剂时，增加|设立济剂对W!组，对!f组及各处在!组均设3个重复.每个主复至少12头幼虫。于第4CI至t8 d每天观察并记录刽J虫死亡数、其他异常I刊4及染毒结束rJ，1饲料剩余悄况.15 cl观察并l己录iJJ虫和驯的死亡数，此H才未化峭的t，JJ虫判定为死亡，同时将死亡的幼虫和!fi去除。开122CI观察i记录炯死亡数、羽化数(5)11记录羽化后JjZo数与死亡数)及:Jt他异常情况。5.2.2.4 限度试验设lLl:限剂量为ivgiI.i./)虫.即在供试物达lga.i./生h虫fJ，1对蜜蜂羽化影响与空白对照细无显著差异.1j!11元;而继续试验。若因供试物I在ifiiJ3t限制，最高处边!剂扯无法达到100g a.i./幼虫n，t.1j!11采用最大溶解度月1于计.rJ:一上限部lilJ:。5.2.2.5 参比物质试验每次正式试扮H才坪i!JfI参比物质处剧组.推荐参比物质为乐果和!王tt筑戚。乐架设置浓度为40mg a.i./kg饲料，苯氧戚设!ifi浓度为O.25 mg a.i./kg饲料。6 数据处理6.1 蜜蜂幼虫急性毒性试验蜜蜂幼虫急性萄性试验以死亡率为主要评价指标。可按照G/T31270.10-2014的规定，采州寇氏法、直绞肉馅法或概率单位阁Wi法计约供试物处理后72h蜜蜂i;JJ虫的1.050及95%，i:f:言限.也可采用有关毒性数据统计软件进行分析和计算。6.2 蜜蜂幼虫慢性毒性试验蜜蜂t，JJ虫但性Tt性试验以jl化率为王安评价指杯。计算if!O.05).获得供试物对蜜蜂羽化影响的NOEC或NOEO。直口可能采用适白的统计学软卡|分析蜜蜂的羽化数据.汁.rJ:EC印或ED50及95%:，t信限。7 质量控制a)蜜蜂幼虫急性毒性试验有效性的质量控tlil应同时满足以下条件:1)试验结束时，;(/照组幼虫累计死亡率15%;2)参比物质处组织的幼虫72h累tl校正死亡率二三50%.，b)蜜蜂i;JJ虫慢性毒性试!附有效性的质量控制应同时满足以下条件:1)第4CI至第8CI.对Wi在l幼虫累计死亡率15%.参比物质乐果处边!组幼虫累计校正死亡率二，50%;2)第22CI，对!自封l非l化率二主70%.参tt物质苯氧戚处丑li组羽化Lf20%。8 试验报告试验报告应至少包括以下内容:a)供试物信息)供试物的化学名称、结构式、CAS号、纯度、米源等，2)fj飞试物的相关卫li化特性(水熔ii性、溶剂巾咐解性、蒸汽压等)。b)供试生物l)供试生物的种鼠、学名、来ilfi-111忏fl(Ji:出版情况.2)供试生物的日龄、饲养情况。c)试验条件1)孵化温度(平均值、标lfiiIHi差、最大值和最小值)、相对温度及试验方法;2)试验系统付f。所川的行基、孔板、化蚓极的炎型，处班组和1对!t组各重复所用幼虫的数盐，J9i用溶剂及其浓度(如有使用)，供试物的试验浓度，5 NY/T 3085-2017 6 3)详细的信iJiI自信息(饲料各组分信息及来源、饲111M:盐和频率),c!)结果。1)空白对!自组及参比物质组满足试验有效性标准的证据，2)蜜蜂幼虫急性毒性试验巾处理!组、对!组、参比物质组(乐果)死亡数，蜜蜂幼虫慢性毒性试验中处理在l、对!(l组的死亡数及羽化数，参比物质组(乐果)的死亡数，参比物质组(苯氧威)的羽化数，3)数据的处理方法，蜜蜂幼虫急性毒性试验染毒后721飞的LD50及95%置信限或蜜蜂幼虫慢性毒性试验第22c!对蜜蜂羽化II向(INOEC/NOED,jm可能，还包括EC50/ED，汕及95%)信限;4)相对准则的偏离及对试验结果的潜在LE响，5)其他观察到的现象，包括幼虫停止取食后饲料的剩余情况。NY/T 3085-2017 附录A(资料性附录)蜂王产卵控制器示意图姊王产卵控制器示苞、l到见罔1.1。图A1 蜂王产卵控制器示意图7 NY/T 3085-2017 附录B(资料性附录)饲养单元孔示意图蜜蜂J虫717性试验人工饲养单元孔构成见I至I13.1。说911 到虫+饲料12-百王行恕，3 细!JJ1f;养艇单孔.2 3 图.1 蜜蜂幼虫毒性试验饲养单元孔示意图8 附录C(资料性附录)蜜蜂幼虫急性毒性试验重要步骤示意图蜜蜂f)1虫急性毒性试验重要步骤的时间安排见l妻Ic.10 饲料种类们可!Q.lllI 试验讪试验rjit!j:由I4可3d2 d l 产卵期IIWJi豆，1再王:1将怖主11M!盟布在自!7112 d 到J虫WJNY/T 3085-2017 第5d 第(id!i式验纳HL!蜂ll!I实验室内温度(34.5主0.51吃。相对湿3t(95:l:5阳图C.l蜜蜂幼虫急性毒性试验重要步骤示意图9 NY/T 3085-2017 10 附录D(资料性附录)蜜蜂幼虫慢性毒性试验重要步骤示意图蜜蜂t，JJ且慢性丑:Jd尘试验重要?J驳的时间安扣l!R.陀1D.10 试京前试结前试另而试宫前我1,1 1:112，扪dj产HNllllj州Z 4 d JJ虫WIZi 5 d Mlizi 匹11豆豆豆iiiiiii 4刊x.tilJJ(95土5)%Zt1 6(1 第3 dL旦旦那15d第22,1 i羽11:!相对ilUfi!相X.t帆Ji(85主5)%i50如叫转至|!H:ifi版i,_L_,试验1_1._:乞1;司!转至非l化衍!L二二:_.1I!虫羽ft众i 蜂Jl!1均实验室内。白皮(34.5主0.5):图D.1 蜜蜂幼虫慢性毒性试验重要步骤示意图参考文献IJVandenberg JD.Shimanuki 1-1.,1987.Techniquc for tural Research,26(2):90-97.NY/T 3085-2017 2 Aupinel P.Fonini D.Dufour 1-1,et a1.25.Impro、ementof artificial feeding in a slandard il1 Jilro method for rearing AF川S川eliiJer，阳la口3 JAu叩p归川川川m阳nelP,阮王兑如a缸rl山hM.C11m川a剖tM P.el a1，2约01臼5.0阶ra汕ftValid【da川川1旧ionRej叮叩p阳3刀onRe白S队川叫u川l山lt阻softher川n旧1阳na旧t旧nal ri川r1l1吨191陌es时trelated 10 the honey bee(.4is mellifera)larval loxi口Iytest,repealed exposure R.OECD,17 April 11 EON-u0的H问Z中华人民共和国农业行业标准意大利蜜蜂幼虫毒性试验准则化学农药NY/T 3085-2017 中国农 业出版社出版(北京r/i朝阳区去于1月街18号怯)(11邮政编码100125 网111:V)中国农业LH版丰i印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店主主制x 号*并印11E1 字数20下字2017年9月It京第|次印刷宁JI斗;880mmX I 230rnm 1/16 2017年9JJ第1ltIi 二I号16109-1283 定价。25.00元并版权专有侵权必究举报电话(010)65005894 NY