实验5-植物体内硝态氮含量的测定.ppt

实实 验验 5植物体内硝态氮含量的测定植物体内硝态氮含量的测定一、实验目的一、实验目的1 1、学会植物组织中硝态氮含量的、学会植物组织中硝态氮含量的测定方法；测定方法；2 2、了解植物组织中硝态氮的含量。、了解植物组织中硝态氮的含量。二、实验原理二、实验原理n在浓酸条件下，在浓酸条件下，NONO3 3-与水杨酸反应，生与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（下（PH12PH12）呈黄色，最大吸收峰的波）呈黄色，最大吸收峰的波长为长为410nm410nm，在一定范围内，其颜色深，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。浅与含量成正比，可直接比色测定。三、实验器材三、实验器材1 1、材料：小麦根，叶柄，叶片、材料：小麦根，叶柄，叶片2 2、仪器：分光光度计、仪器：分光光度计3 3、试剂：、试剂：500mg/LNO500mg/LNO3 3-标准溶液精确称取烘至恒重的标准溶液精确称取烘至恒重的KNOKNO3 3 0.9026 0.9026 克溶克溶于无离水中，定容至于无离水中，定容至250ml250ml。5%5%水杨酸一硫酸溶液水杨酸一硫酸溶液 称取称取5 5克水杨酸溶于克水杨酸溶于100ml,100ml,浓硫酸中浓硫酸中（密度为（密度为1.841.84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。一周有效。8%8%氢氧化纳溶液氢氧化纳溶液 称取称取8080克氢氧化纳溶于克氢氧化纳溶于1dm31dm3无离子水中即可。无离子水中即可。四、方法步骤四、方法步骤1.1.标准曲线绘测：标准曲线绘测：（1 1）吸取）吸取500mg/L NO500mg/L NO3 3-标准溶液标准溶液1ml1ml、2ml2ml、3ml3ml、4ml4ml、6ml.6ml.8ml8ml、10ml10ml、12ml12ml分别放入分别放入50ml50ml容量瓶中，用无离子水定至刻容量瓶中，用无离子水定至刻度，使之成度，使之成1010、2020、3030、4040、6060、8080、100100、120mg/L120mg/L系列标系列标准溶液。准溶液。（2 2）吸收上述系列标准溶液）吸收上述系列标准溶液0.1ml0.1ml，分别放入刻度试管中，以，分别放入刻度试管中，以0.1ml0.1ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml 0.4ml 5%5%水水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min20min后再加入后再加入8%NaOH8%NaOH溶液溶液9.5ml9.5ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为摇匀冷却至室温，显色液总体积为10ml10ml。（3 3）以空白作参比，在）以空白作参比，在410nm410nm波长下测定吸光度。以波长下测定吸光度。以NONO3 3-N N浓度浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。2.2.组织液组织液NONO3 3-N N的提取的提取（1 1）样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀后，精）样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取确称取2g2g左右，重复三次（左右，重复三次（根，叶片，叶柄根，叶片，叶柄），分别放入），分别放入三支试管中，加入三支试管中，加入10ml10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入沸无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取水浴中提取30min30min，到时间后取出，用自来水冷却，再将，到时间后取出，用自来水冷却，再将提取液过滤到提取液过滤到25ml25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，定容至刻容量瓶中，并反复冲洗残渣，定容至刻度。度。（2 2）样品液的测定：分别吸取样品）样品液的测定：分别吸取样品0.1ml0.1ml分别于三支试管中，分别于三支试管中，然后加入然后加入5%5%水杨酸一硫酸溶液水杨酸一硫酸溶液0.4 ml0.4 ml，混匀后置室温下，混匀后置室温下20min20min，再慢慢加入，再慢慢加入9.5 ml 8%NaOH9.5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在以空白作参比，在410nm410nm波长下测其吸光度。在标准曲线波长下测其吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出上查得或用回归方程计算出NONO3 3-N N浓度，再用下公式计算浓度，再用下公式计算其含量。其含量。NONO3 3-N(mg/g)=(C N(mg/g)=(C 样品液总量样品液总量)/)/样品鲜重样品鲜重 C-NOC-NO3 3-N N浓度浓度五、实验思考五、实验思考n试讨论植物不同部位硝态氮的分试讨论植物不同部位硝态氮的分 布特点。布特点。