天然药物化学第六章黄酮类化合物.ppt

第六章第六章 黄酮类化合物黄酮类化合物知知识识要求：要求：掌握掌握黄酮类黄酮类化合物的基本化合物的基本构构造、造、结构类结构类型、理化性型、理化性质质、提取分离的方法、提取分离的方法熟悉熟悉黄酮类黄酮类化合物的性化合物的性状状和和鉴鉴定的基本知定的基本知识识了解了解紫外光紫外光谱谱、核磁共振、核磁共振谱谱在在黄酮类黄酮类化合物化合物结构鉴结构鉴定中的定中的应应用。用。能力要求能力要求;熟熟练练掌握槐米中掌握槐米中黄酮类黄酮类化合物的提取技化合物的提取技术术学会学会应应用化用化学学方法、色方法、色谱鉴谱鉴定定黄酮类黄酮类化合物的操作化合物的操作技技术术 黄酮类化合物广泛存在于自然界，其数量之黄酮类化合物广泛存在于自然界，其数量之多位于多位于天然酚性化合物天然酚性化合物之首。之首。主要分布在双子叶植物及裸子植物中。主要分布在双子叶植物及裸子植物中。多与糖结合成多与糖结合成苷苷，少部分以游离形式存在。，少部分以游离形式存在。因大部分呈因大部分呈黄色并具有酮基黄色并具有酮基，故称为黄酮，故称为黄酮 第一节第一节 结构类型结构类型两个具有酚羟基的苯环（两个具有酚羟基的苯环（A与与B环环）通过）通过中央三碳链中央三碳链相相互连接互连接 分类依据：分类依据：三碳链氧化程度三碳链氧化程度 B B环（苯基）连接位置（环（苯基）连接位置（2-2-或或3-3-位）位）三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状6C-3C-6CA AB BC C黄酮类（flavones）木犀草素，存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌木犀草素，存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作用。作用。黄酮醇类黄酮醇类 槲槲皮皮素素(quercetin)具具有有抗抗炎炎、止止咳咳祛祛痰痰等等作作用用。降低血压、增强毛细血管抵抗力、扩张冠状动脉；降低血压、增强毛细血管抵抗力、扩张冠状动脉；芦芦丁丁(rutin)是是槲槲皮皮素素的的O芸芸香香糖糖苷苷。用用于于治治疗疗毛毛细细管管脆脆弱弱引引起起的的出出血血病病，并并用用作作高高血血压压及及动动脉硬化的辅助治疗剂。脉硬化的辅助治疗剂。芦丁芦丁槲皮素槲皮素 豆科植物豆科植物 槐中药槐槐中药槐米中含有芦丁和槲米中含有芦丁和槲皮素。皮素。二氢黄酮类二氢黄酮类4二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。5查尔酮类查尔酮类 查尔酮为查尔酮为苯甲醛缩苯苯甲醛缩苯乙酮类化合物乙酮类化合物，其邻羟基，其邻羟基衍生物可视为衍生物可视为二氢黄酮二氢黄酮的的异构体，二者可相互转化。异构体，二者可相互转化。二氢黄酮的吡喃酮二氢黄酮的吡喃酮环芳香性低，在碱的作环芳香性低，在碱的作用下易开环生成用下易开环生成6-6-羟羟基查耳酮，由无色转为基查耳酮，由无色转为深黄色，后者经酸化又深黄色，后者经酸化又能转化为原来的二氢黄能转化为原来的二氢黄酮。酮。红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。用，氧化成红色。第一个发现的查耳酮类植物成分第一个发现的查耳酮类植物成分6异黄酮类异黄酮类(isoflavones)主要存在于豆科、鸢尾科等植物中。主要存在于豆科、鸢尾科等植物中。如如葛葛根根主主要要含含有有下下列列几几种种异异黄黄酮酮类类成分。成分。葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有类降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有类似罂粟碱的解痉作用。似罂粟碱的解痉作用。大豆苷、葛根素及大豆素均能缓解大豆苷、葛根素及大豆素均能缓解高血压患者的头痛等症状。高血压患者的头痛等症状。7 7二氢异黄酮类二氢异黄酮类/紫檀素类紫檀素类8 8双黄酮类双黄酮类 由二分子黄酮衍生物聚合生成的二聚物，多分由二分子黄酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄酮，如银杏布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄酮，如银杏素。素。银杏叶片（舒血宁片）银杏叶片（舒血宁片）作用与用途作用与用途活血化瘀，活血化瘀，通脉舒络通脉舒络。用于动脉硬化。用于动脉硬化及高血压病所致的冠状动及高血压病所致的冠状动脉供血不全、心绞痛，心脉供血不全、心绞痛，心肌梗塞、脑血管痉挛等以肌梗塞、脑血管痉挛等以及动脉血管供血不良所引及动脉血管供血不良所引起的疾患起的疾患.银杏叶片提取物被法国、银杏叶片提取物被法国、德国列为降血压特效药德国列为降血压特效药、天然药品；被日本列为抗天然药品；被日本列为抗衰老、治老年痴呆症特效衰老、治老年痴呆症特效药品。药品。9花色素类花色素类 使使花花、叶叶、果果、茎茎等等呈呈现现蓝蓝、紫紫、红红等等颜颜色色的的色色素素。以以苷苷的的形形式式存存在在于于细细胞胞液液中中，经经水水解解可可生生成成苷苷元元花色素及糖。花色素及糖。10黄烷黄烷-3-醇醇(flavan-3-ols)及黄烷及黄烷-3，4-二醇二醇(flavan-3,4-diols)类类11双苯吡酮类双苯吡酮类水龙骨科植物石韦中的异芒果素具有止咳祛痰的功效。水龙骨科植物石韦中的异芒果素具有止咳祛痰的功效。12橙酮类橙酮类硫磺菊素硫磺菊素(sulphuretin)(sulphuretin)黄酮类化合物的生物活性黄酮类化合物的生物活性 1.1.对对心血管系统心血管系统的作用的作用 Vp样样作作用用：芦芦丁丁、橙橙皮皮苷苷等等有有Vp样样作作用用，能能降降低低血血管管脆脆性性及及异异常常通通透透性性，可可用用作作防防治治高高血血压压及及动动脉脉硬硬化化的的辅辅助助治治疗疗剂。剂。扩扩冠冠作作用用：芦芦丁丁、槲槲皮皮素素、葛葛根根素素、人工合成的力可定人工合成的力可定。降血脂及胆固醇：木犀草素降血脂及胆固醇：木犀草素 治疗冠心病或活血化淤类中药含有黄酮类治疗冠心病或活血化淤类中药含有黄酮类芦丁片芦丁片 芦芦丁丁是是从从中中国国所所独独有有的的国国槐槐的的花花蕾蕾中中提提取取的的植植物物药药，也也称称维维生生素素P，具具有有降降低低毛毛细细血血管管的的异异常常通通透透性性和和脆脆性性的的作作用用，是是心心脑脑血血管管保保护护药药，国国内内用用于于心心脑脑血血管管药药品品制制剂剂的的主主要要成成分分，国国外外还还大大量量用用于于食食品品添添加加剂和化妆品。剂和化妆品。2.抗肝脏毒作用抗肝脏毒作用 从从水水飞飞蓟蓟种种子子中中得得到到的的水水飞飞蓟蓟素素具具有有保保肝肝作作用用，用用于于治治疗疗急急、慢慢性性肝肝炎炎、肝肝硬硬化及多种中毒性肝损伤。化及多种中毒性肝损伤。（+）-儿儿茶茶素素(catergen)也也可可抗抗肝肝脏脏毒毒作作用用，治治疗疗脂脂肪肪肝肝及及因因半半乳乳糖糖胺胺或或四四氯氯化化碳碳等等引引起起的的中中毒毒性肝损伤。性肝损伤。水水飞飞蓟蓟 3.抗抗炎炎芦芦丁丁及及其其衍衍生生物物羟羟乙乙基基芦芦丁丁、二二氢氢槲皮素等具抗炎作用。槲皮素等具抗炎作用。4.抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作用如木樨草素、黄芩苷、黄芩素如木樨草素、黄芩苷、黄芩素5.解痉作用解痉作用异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；大大豆豆苷苷、葛葛根根素素及及葛葛根根总总黄黄酮酮可可缓缓解解高高血血压患者的头痛等症状；压患者的头痛等症状；杜杜鹃鹃素素、川川陈陈皮皮素素、槲槲皮皮素素、山山奈奈酚酚、芫芫花素、羟基芫花素：止咳祛痰。花素、羟基芫花素：止咳祛痰。6.雌性激素样作用雌性激素样作用大大豆豆素素(daidzein)等等异异黄黄酮酮具具有有雌雌性性激激素素样样作作用用，可可能能与与它它们们的的结结构构与与己己烯烯雌雌酚酚结构类似。结构类似。7.清除人体自由基作用清除人体自由基作用 黄黄酮酮类类化化合合物物多多具具有有酚酚羟羟基基，易易氧氧化化成成醌醌类类而而提提供供氢氢离离子子，故故有有显显著著的的抗抗氧化特点。氧化特点。另另外外还还有有降降血血脂脂、血血糖糖，抗抗动动脉脉粥粥样样硬硬化及抗癌抗突变等作用。化及抗癌抗突变等作用。第二节第二节理化性质及颜色反应理化性质及颜色反应 一、性状一、性状1.多多为为结结晶晶性性固固体体，少少为为（如如黄黄酮酮苷苷类类）无定形粉末。无定形粉末。2.旋旋光光性性：游游离离苷苷元元中中，除除二二氢氢黄黄酮酮、二二氢氢黄黄酮酮醇醇、黄黄烷烷、黄黄烷烷醇醇有有旋旋光光外外，其其余余无旋光性。无旋光性。苷苷类类由由于于结结构构中中引引入入糖糖的的分分子子，均均有有旋旋光光性，且多为性，且多为左旋左旋。3.3.颜色：颜色：与与 分子中是否存在分子中是否存在交叉共轭体系交叉共轭体系 助色团的数目助色团的数目 取代基的位置有关。取代基的位置有关。色色原原酮酮部部分分原原本本无无色色，但但在在2 2位位引引入入苯苯环环后后，即即形形成成交交叉叉共共轭轭体体系系，且且通通过过电电子子的的转转移移，重重排排，使共轭链延长，而表现出颜色。，使共轭链延长，而表现出颜色。黄酮、黄酮醇及苷类黄酮、黄酮醇及苷类灰黄灰黄-黄色黄色查耳酮查耳酮黄黄-橙黄色橙黄色二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇无色无色异黄酮异黄酮微黄色微黄色其其中中，黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇及及苷苷类类、查查耳耳酮酮等等因因分分子子中中存存在在交交叉叉共共轭轭体体系系，在在7,4位位引引入入-OH,-OCH3等等供供电电子子基基团团则则促促进进电电子子移移位位、重重排排，使使化化合合物物颜颜色色加深。加深。花花色色苷苷及及其其苷苷元元的的颜颜色色随随pH的的不不同同而而改改变变：呈呈现现红（红（pH8.5）二、溶解度二、溶解度 1.游游离离苷苷元元难难溶溶或或不不溶溶于于水水，易易溶溶于于MeOH,EtOH,EtOAc,Et2O黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇及及查查耳耳酮酮是是平平面面型型分分子子，分分子子堆堆砌砌紧紧密密，分分子子间间引引力力较较大大，更更难难溶溶于水于水。R=H，二氢黄酮，二氢黄酮R=OH，二氢黄酮醇，二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇是非平面型分子，是非平面型分子，分子排列不紧密，分子间引力降低，有利分子排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，对水的溶解度较大。于水分子进入，对水的溶解度较大。花花色色苷苷元元（花花青青素素）类类虽虽系系平平面面型型分分子子，但但因因以以离离子子形形式式存存在在，具具有有盐盐的的通通性性，故故亲亲水性较强，水溶度较大。水性较强，水溶度较大。黄黄酮酮苷苷元元引引入入羟羟基基越越多多，水水溶溶性性越越强强，羟羟基基甲甲基化后，则增加在有机溶剂中的溶解度。基化后，则增加在有机溶剂中的溶解度。如如一一般般黄黄酮酮类类化化合合物物(多多羟羟基基化化合合物物)不不溶溶于于石石油油醚醚中中，可可与与脂脂溶溶性性杂杂质质分分开开，但但川川陈陈皮皮素素（5,6,7,8,3,4-5,6,7,8,3,4-六六甲甲氧氧基基黄黄酮酮）却却可可溶溶于于石石油醚。油醚。2.2.黄黄酮酮类类化化合合物物的的羟羟基基苷苷化化后后，水水溶溶性性相相应应增增大大，而而在在有有机机溶溶剂剂中中的的溶溶解解度度相相应应减减小小。黄黄酮酮苷苷一一般般易易溶溶于于H H2 2O,O,MeOH,MeOH,EtOHEtOH等等，难难溶溶或或不不溶溶于于苯苯，氯仿等。，氯仿等。同一苷元，同一苷元，3-O-葡萄糖苷的水溶度葡萄糖苷的水溶度7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷（立体障碍使分子的平面性降低）（立体障碍使分子的平面性降低）三、酸碱性三、酸碱性 1.酸性酸性黄黄酮酮类类化化合合物物多多具具有有酚酚羟羟基基而而呈呈酸酸性性，可可溶溶于于碱碱性性水水液液，吡吡啶啶，甲甲酰酰胺胺及及二二甲甲基基甲甲酰胺。酰胺。酸酸性性强强弱弱顺顺序序：7,4-二二羟羟基基7,或或4羟羟基基一般酚羟基一般酚羟基5-羟基羟基此性质可用于提取、分离及鉴定工作。此性质可用于提取、分离及鉴定工作。2.碱性 -吡吡喃喃酮酮上上的的1-位位氧氧原原子子上上有有未未共共用用电电子子对对，表表现现微微弱弱的的碱碱性性，可可与与强强无无机机酸酸如如浓浓硫硫酸酸，盐盐酸酸生成生成yang盐，但极不稳定，加水即可分解。盐，但极不稳定，加水即可分解。黄黄酮酮类类化化合合物物溶溶于于浓浓硫硫酸酸中中生生成成的的yangyang盐盐常常表现特殊的颜色，可用于鉴别。表现特殊的颜色，可用于鉴别。四、显色反应四、显色反应 (一一)还原反应还原反应 1.盐酸盐酸-镁粉（盐酸镁粉（盐酸-锌粉）反应锌粉）反应黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇及及二二氢氢黄黄酮酮、二二氢氢黄黄酮酮醇醇类类在在盐盐酸酸-镁镁粉粉作作用用下下，易易被被氢氢化化还还原原，迅迅速速生生成成红红-紫紫红红（个个别别有有绿绿-兰兰色色）:将将样样品品溶溶于于甲甲醇醇或或乙乙醇醇，加加少少量量镁镁粉粉振振摇摇，滴滴加加几几滴滴浓浓盐盐酸酸，1-2分分钟钟内内（必必要要时时微微热热）即即可可出出现现颜颜色色。多多显显橙橙红红-紫紫红红色色，少少数数兰兰-紫紫色色，B环环有有-OH或或OCH3取取代代时时，颜颜色色随随之之加加深深，查查耳耳酮酮、橙酮、儿茶素类则不反应橙酮、儿茶素类则不反应。花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件下也会发生色变，故须件下也会发生色变，故须先做一空白对照先做一空白对照。2.四氢硼钠反应四氢硼钠反应 与与二二氢氢黄黄酮酮（醇醇）类类化化合合物物产产生生红红-紫紫色。色。取取样样品品10mg溶溶于于甲甲醇醇，加加NaBH410mg，再再滴滴加加1%浓浓盐盐酸酸或或浓浓硫硫酸酸，呈呈红红-紫色。紫色。其他黄酮类化合物均不显色。其他黄酮类化合物均不显色。（二）金属盐类试剂的络合反应（二）金属盐类试剂的络合反应 黄黄酮酮类类化化合合物物分分子子结结构构中中多多有有3-OH,4=O;5-OH,4=O;邻邻二二酚酚羟羟基基，常常可可与与铝铝盐盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂生成有色络合物。铅盐、锆盐、镁盐等试剂生成有色络合物。结果：颜色，沉淀结果：颜色，沉淀用途：鉴定，结构测定，提取分离用途：鉴定，结构测定，提取分离1.铝盐铝盐1%AlCl3或或Al(NO3)3：生生成成络络合合物物为为黄黄色色(max=415nm)，并并有有荧光。荧光。2.锆盐锆盐:2%二氯氧化锆甲醇液二氯氧化锆甲醇液 3-OH3-OH，4-4-酮基络合物稳定性酮基络合物稳定性5 5OHOH，4-4-酮基络合物酮基络合物原因：原因：3.镁盐镁盐醋酸镁甲醇液醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。作显色剂，可在纸上进行。二二氢氢黄黄酮酮（醇醇）类类显显天天蓝蓝色色荧荧光光，若若具具有有C5-OH，色色泽泽更更明明显显。而而黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇及及异异黄酮类则显黄黄酮类则显黄-橙黄橙黄-褐色。褐色。4.氯化锶氯化锶(SrCl2)使使具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基的的黄黄酮酮显显绿绿-棕棕色色-黑黑色沉淀。色沉淀。5.氯化铁氯化铁(FeCl3)检查检查酚羟基酚羟基。多多数数黄黄酮酮类类化化合合物物具具有有酚酚羟羟基基，可可产产生生正反应，生成绿、蓝、黑、紫等颜色。正反应，生成绿、蓝、黑、紫等颜色。6.6.铅盐铅盐 1%PbAc2或或碱碱式式醋醋酸酸铅铅水水液液。生生成成黄黄-红红色色沉淀。色泽因羟基数目及位置不同而异。沉淀。色泽因羟基数目及位置不同而异。醋醋酸酸铅铅可可沉沉淀淀具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基或或兼兼有有3-OH,4=O或或5-OH,4=O者。者。碱碱式式醋醋酸酸铅铅沉沉淀淀能能力力要要大大得得多多，可可沉沉淀淀一一般般酚酚类化合物。类化合物。据据此此不不仅仅可可用用于于鉴鉴定定，也也可可用用于于提提取取及及分分离离工工作作.（三）硼酸显色反应（三）硼酸显色反应 1具有下列结构（具有下列结构（5-羟基黄酮，羟基黄酮，2-羟基查耳酮羟基查耳酮）2有无机酸或有机酸存在有无机酸或有机酸存在在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。（四）碱性试剂显色反应 日日光光及及紫紫外外光光下下，通通过过纸纸斑斑反反应应，观观察察样样品用碱性试剂处理后的色变情况。品用碱性试剂处理后的色变情况。1.1.二二氢氢黄黄酮酮类类易易在在碱碱液液中中开开环环，转转变变成成相相应应异异构构体体查查耳耳酮酮类类化化合合物物，显显橙橙-红红色。色。2.黄黄酮酮醇醇类类在在碱碱液液中中先先呈呈黄黄色色，通通入入空空气后变为棕色，据此可与黄酮类区别。气后变为棕色，据此可与黄酮类区别。3.黄黄酮酮类类化化合合物物当当分分子子中中有有邻邻二二酚酚羟羟基基取取代代或或3,4-二二羟羟基基取取代代时时，在在碱碱液液中中不不稳稳定定，很很快快氧氧化化，由由黄黄色色深深红红色色绿绿棕色沉淀棕色沉淀。第三节第三节提取分离提取分离一、提取一、提取 黄黄酮酮类类化化合合物物在在花花、叶叶、果果等等组组织织中中，多多以以苷苷的的形形式式存存在在；在在木木部部坚坚硬硬组组织织中中，多多以游离苷元形式存在；以游离苷元形式存在；根根据据化化合合物物极极性性不不同同，溶溶解解性性不不同同，采采用用不同溶剂提取。不同溶剂提取。1.苷苷元元多多用用CHCl3、Et2O、EtOAc等等极极性性较较小小溶溶剂剂提提取取；对对于于多多OCH3的的成成分分，用用苯苯、石石油油醚醚提提取取；对对于于极极性性大大的的成成分分，如如查查耳耳酮酮、橙橙酮酮、双双黄黄酮酮、羟羟基基黄黄酮酮等等，用用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。等溶剂提取。2.苷苷类类水水或或热热水水提提取取，（多多糖糖苷苷在在热热水水中中溶解度较大，在冷水中溶解度较小）；溶解度较大，在冷水中溶解度较小）；也可用也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。提取。3.含羟基的苷或苷元，可用含羟基的苷或苷元，可用碱水碱水提取。提取。4.提取花青素类可加入少量酸提取花青素类可加入少量酸.常见的提取方法常见的提取方法（一）（一）碱溶酸沉法碱溶酸沉法 适用于适用于含酚羟基的化合物含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。，如槐米中芦丁的提取。常用碱液：常用碱液：饱和石灰水溶液、饱和石灰水溶液、5%Na5%Na2 2COCO3 3溶液及稀氢氧化钠溶液等溶液及稀氢氧化钠溶液等注意事项：注意事项：石石灰灰乳乳的的加加入入可可除除去去果果胶胶、粘粘液液等等水水溶溶性性酸酸性性杂杂质质 邻邻二二酚酚羟羟基基的的保保护护：碱碱性性条条件件下下，邻邻二二酚酚羟羟基基易易被氧化，加硼砂保护被氧化，加硼砂保护 酸碱度不宜过大酸碱度不宜过大 强碱：加热时易破坏黄酮母核强碱：加热时易破坏黄酮母核 强酸：生成强酸：生成yangyang盐而溶解盐而溶解二、溶剂提取法二、溶剂提取法 1醇提取法醇提取法乙醇和甲醇是最常用的提取溶剂。乙醇和甲醇是最常用的提取溶剂。60%左右的稀醇提取黄铜苷类左右的稀醇提取黄铜苷类90-95%提取黄酮苷元提取黄酮苷元 石石油油醚醚可可除除去去醇醇提提取取液液中中的的杂杂质质如如叶叶绿绿素、胡萝卜素等脂溶性色素素、胡萝卜素等脂溶性色素2.水提取法水提取法用用热热水水提取提取黄铜苷类黄铜苷类 其其中中蛋蛋白白质质、多多糖糖等等大大分分子子水水溶溶性性物物质质可以用多倍量的可以用多倍量的浓醇浓醇沉淀除去沉淀除去3.系系统统溶溶剂剂提取法提取法实验实验室常用室常用极极性由小到大的溶性由小到大的溶剂剂依次依次将将黄酮类黄酮类化合物按相化合物按相应应的的极极性性顺顺序提取出序提取出来来二、分离二、分离（一）（一）pHpH梯度萃取法梯度萃取法酸性不同的黄酮苷元的分离酸性不同的黄酮苷元的分离酸性：酸性：7,4-OH7-或或 4-OH一般一般Ar-OH5-OH5%NaHCO35%Na2CO20.2%NaOH4%NaOH溶解溶解的碱水的碱水（二）柱色谱法（二）柱色谱法1、聚酰胺层析：其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。聚酰胺是分离黄酮聚酰胺是分离黄酮的理想吸附剂的理想吸附剂黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：苷元相同，洗脱先后顺序一般为：苷元相同，洗脱先后顺序一般为：三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢羟羟基基位位置置的的影影响响：具具有有羰羰基基邻邻位位羟羟基基黄黄酮酮比比具具有有对对位位（或或间间位位）羟羟基基黄黄酮酮先先洗洗脱下来脱下来不不同同类类型型的的黄黄酮酮类类化化合合物物，先先后后流流出出顺顺序序一一般是：般是：异黄酮异黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。极性移动相（含水极性移动相（含水 溶剂系统）洗脱时溶剂系统）洗脱时有有机机溶溶剂剂（如如氯氯仿仿一甲醇）洗脱时一甲醇）洗脱时聚酰胺聚酰胺非极性固定相非极性固定相极性固定相极性固定相色谱行为色谱行为类似反相分配色谱类似反相分配色谱正相分配色谱正相分配色谱苷极性苷元苷极性苷元苷元极性苷苷元极性苷 苷先洗脱苷先洗脱苷元易洗脱苷元易洗脱、硅胶层析、硅胶层析适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类对对酚酚羟羟基基多多的的黄黄酮酮类类，如如多多羟羟基基黄黄酮酮及及 其苷类，硅胶减活性使用其苷类，硅胶减活性使用对对酚酚羟羟基基少少的的黄黄酮酮类类，如如甲甲基基化化、乙乙酰酰化化黄黄酮酮及及二二氢氢黄黄酮酮、异异黄黄酮酮，则则无无须须减减活性。活性。3 3炭粉吸附法炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。适用于苷类的精制工作。植植物物的的甲甲醇醇提提取取液液加加活活性性炭炭至至吸吸附附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。依依次次用用沸沸甲甲醇醇、沸沸水水、7%酚酚/水水、15%酚酚/醇醇洗洗脱脱，分分步步收收集集、检检查查、合合并。并。大大部部分分苷苷类类可可用用7%酚酚/水水洗洗下下，经经减减压压浓浓缩缩至至小小体体积积，乙乙醚醚除除酚酚，余余下下水水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。层经减压浓缩得较纯黄酮苷。4.4.利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶分子筛分离利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶分子筛分离 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。大洗脱。分分离离黄黄酮酮苷苷类类，主主要要是是分分子子筛筛作作用用，分分子子大大小小洗脱。洗脱。总的洗脱顺序：总的洗脱顺序：糖多的苷糖多的苷糖少的苷糖少的苷游离苷元（极性小游离苷元（极性小大）大）常用洗脱剂：常用洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液碱性水溶液，含盐水溶液醇及含水醇醇及含水醇含水丙酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿第四节第四节 鉴定鉴定目前主要采用的方法有：目前主要采用的方法有：与与标标准准品品或或与与文文献献对对照照PPC或或TLC得得到到的的Rf值值分分析析对对比比样样品品在在甲甲醇醇溶溶液液中中及及加加入入酸酸、碱或金属盐类试剂后得到的碱或金属盐类试剂后得到的UV光谱光谱1.1.硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱(TLC)(TLC)用于用于弱极性黄酮弱极性黄酮较好。较好。展展开开剂剂：常常用用甲甲苯苯：甲甲酸酸甲甲酯酯：甲甲酸酸（5：4：1）；）；苯苯：甲甲醇醇（95：5）或或苯苯：甲甲醇醇：冰冰醋醋酸酸（35：5：5）等。）等。.聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱 适适用用范范围围广广，可可分分离离含含游游离离酚酚羟羟基基的的黄黄酮或其苷类。酮或其苷类。常常用用展展开开系系统统：乙乙醇醇:水水（3:2）；丙丙酮酮:水（水（1:1）等。）等。显显色色剂剂：紫紫外外光光；2%三三氯氯化化铝铝甲甲醇醇液液；1%FeCl3/1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。混合液。二、纸色谱二、纸色谱 适适合合分分离离鉴鉴定定包包括括苷苷和和苷苷元元的的各各种种黄黄酮酮类类化化合合物物苷苷类类成成分分可可采采用用双双向向纸纸色色谱谱法法，第第一一相相展展开开采采用用醇醇性性溶溶剂剂，如如BAW系系统统（正正丁丁醇醇：醋醋酸酸：水水4：1：5上上层层）；第第二二相相展展开开用用水水性性溶溶剂剂，如氯仿：醋酸：水（如氯仿：醋酸：水（3：6：1）苷元则多采用醇性溶剂。苷元则多采用醇性溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。Rf值与结构之间的关系：值与结构之间的关系：1、醇性展、醇性展开剂开剂（1）苷苷元元单单糖糖苷苷双双糖糖苷苷（2）分子中）分子中羟羟基基数数目增多，目增多，极极性增强，性增强，Rf值值相相应减应减小，小，羟羟基甲基化后，基甲基化后，极极性降低，性降低，Rf值值增大增大2、水性展、水性展开剂开剂（1）双双糖糖苷苷单单糖糖苷苷苷苷元。元。苷苷元几乎留于原点，元几乎留于原点，苷类苷类Rf值值可在可在0.5以上，且糖以上，且糖链链越越长长，则则Rf值值越越大大（2）平面型）平面型黄酮苷黄酮苷元几乎原点不同，非平面型元几乎原点不同，非平面型黄酮苷黄酮苷元因元因亲亲水性水性较较强，强，Rf值较值较大大显显色：色：（1）日光下）日光下观观察察（2）紫外灯下）紫外灯下观观察察荧荧光光（3）显显色色剂显剂显色色常用常用显显色色剂剂：1%三三氯氯化化铝铝甲醇溶液，甲醇溶液，氨氨熏、熏、10%碳碳酸酸钠钠水溶液等水溶液等一、紫外一、紫外-可见光谱可见光谱可可用用于于确确定定黄黄酮酮母母核核类类型型及及确确定定某某些些位位置置是是否否含含有羟基。有羟基。一般程序：一般程序：测定样品在甲醇中的测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型；谱以了解母核类型；在在甲甲醇醇溶溶液液中中分分别别加加入入各各种种诊诊断断试试剂剂后后测测UV谱谱和和可可见见光光谱谱以以了了解解3,5,7,3,4有有无无羟羟基基及及邻邻二二酚酚羟羟基；基；苷苷类类可可水水解解后后（或或先先甲甲基基化化再再水水解解），再再用用上上法测苷元的法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。谱以了解糖的连接位置。第五节第五节结构测定结构测定（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱 多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带带I在在300-400nm区区间间，由由B环环桂桂皮皮酰酰基基系系统统的电子跃迁所引起；的电子跃迁所引起；带带II在在220-280nm区间，由区间，由A环苯甲酰系环苯甲酰系统统的电子跃迁所引起。的电子跃迁所引起。根据带根据带I I、带、带IIII的峰位及形状（或强度），的峰位及形状（或强度），推测黄酮类化合物结构类型。推测黄酮类化合物结构类型。带带II(240-285nm)（苯甲（苯甲酰系统）酰系统）带带I(300-400nm)桂皮酰系统桂皮酰系统类类型型说说明明240-280304-350黄酮类黄酮类 -OH越越多多，带带I带带II越红移越红移 带带IIII峰峰位位主主要要受受A A环环氧氧取取代代程程度度的的影影响响，B环环 3,4有有-OH基基，带带II为为双双峰峰（主主峰峰伴伴肩峰）肩峰）328-357黄酮醇类黄酮醇类(3-OR)352-385黄酮醇类黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400异黄酮类异黄酮类二氢黄酮二氢黄酮（醇）（醇）B环环上上有有-OH,OCH3对对带带I影影响不大响不大220-270340-390或或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮查耳酮类类查查 耳耳 酮酮 2-OH使使带带I向向红红移移影影响大响大370-430(3-4个小峰个小峰)橙酮类橙酮类不不同同类类型型黄黄酮酮类类化化合合物物的的紫紫外外光光谱谱2 2加入诊断试剂后引起的位移及结加入诊断试剂后引起的位移及结构测定构测定加入试剂加入试剂带带IIII带带I I说明说明样品样品+MeOH220-285300-400两峰强度基本相同，具体位置与两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基母核上电负性取代基(-OH,-OCH3)有关，有关，-OH,-OCH3越多，越越多，越长移长移+NaOMe或或+NaOHA环有环有-OH，红，红移小，无移小，无意义意义红移红移 40-60nm（不变或增不变或增强）强）红移红移 50-60nm（下降）下降）有有4-OH，无，无3-OH有有3-OH，无，无4-OH有有3,4-OH或或3,3,4-OH（衰减更（衰减更快）快）7-OH带带I，II随加随加NaOMe时间延时间延长，逐渐衰减长，逐渐衰减320-330nm有小峰有小峰+NaOAc(未熔融未熔融)5-20在长波一侧在长波一侧有明显肩峰有明显肩峰7-OH示有示有4-OH，但无，但无3-及及/或或7-OH解解释释加入试剂加入试剂带带II带带I说明说明+NaOAc/H3BO3 5-10 12-30有有6,7-OH或或7,8-OH(5,6-OH无无)B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基AlCl3/HCl 60 50-60 35-55 17-20 0有有3-OH有有3,5-二二OH有有5-OH，无，无3-OH有有6-OR和和5-OH无无3-OH,5-OH或或6-OR存在存在AlCl3光光谱谱-AlCl3/HCl光谱光谱紫移紫移30-4050-650B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基环皆无邻二酚羟基解解释释说明：1）+NaOMe,OHOMe，红移 另有3,4-OH或3,3,4-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强的7-OH解离。back3）形成络合物的能力：形成络合物的能力：黄酮醇黄酮醇3-OH黄酮黄酮5-OH（二氢黄酮（二氢黄酮5-OH）邻二酚羟基邻二酚羟基二氢黄酮醇二氢黄酮醇5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在在酸性条件下不与酸性条件下不与AlCl3络合络合；但不在酸性条件下，五者皆与但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合；络合；形成形成络合物越稳定，红移越多。络合物越稳定，红移越多。4）二者相减可检测邻二酚羟基。）二者相减可检测邻二酚羟基。返回返回