(10.8.1)--10.8植物离体受精.pdf

植物离体受精目录CONTENTS1.基本概念和意义2.离体传粉3.离体受精的基本过程指在无菌培养条件下，培养未受精子房、胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠，完成受精的技术。基本概念和意义1（1）基本概念理论方面：对授粉的生理生化机制及早期胚胎发育进行研究。应用方面：克服远缘杂交丌亲和性或克服自交丌亲和性。自交丌亲和性植物在受精过程中的障碍通常发生在柱头或花柱中，由于花粉不柱头识别反应导致花粉管生长受到抑制，丌能进入柱头或在花柱中生长停滞，以致受精失败。基本概念和意义1（2）意 义通过人工授粉方法,使花粉粒不经柱头和花柱，在子房腔内萌发，直接进入子房中的胚珠,完成受精作用,从而获得远源杂种。方法:直接引入法:在子房壁或顶端切个开口,灌注以花粉悬浮液,完成授精过程，再离体培养。注射法:在子房顶端和基部开2个注射孔，用装有花粉悬浮液的注射器从顶端注射,值到基部孔有流出;用凡士林封闭孔口,再离体培养。植物离体传粉2（1）子房离体授粉直接法：直接在胚珠表面授予无菌花粉，再离体培养；间接法：预先培养花粉，将花粉撒在培养基表面，再接种带有胚座的裸露有胚珠于花粉培养基上，完成授精过程。植物离体传粉2（2）胚珠试管受精研磨法：利用匀桨器，使花粉壁破裂而释放出精细胞。渗透压冲击一步法：蒋花粉置于适宜渗透压条件下自行破裂，释放出精细胞。渗透压冲击二步法：先将花粉在一定浓度蔗糖溶液中水合一段时间，再加入等量蒸馏水造成渗透压骤降，促使花粉破裂，释放出精细胞。活体-离体技术：先对柱头进行人工授粉，当花粉管在柱头生长到一定程度后，切下1cm左右一段，插入液体培养基中培养，待精细胞出现后，用酶液水解，低渗液冲击使花粉管破裂，释放出精细胞。植物离体受精的基本过程3（1）精细胞获得目前，从胚囊或胚珠中分离少量卵细胞已获得成功。酶解酶解法：利用水解酶分离出胚囊，将单个胚囊内细胞相互分开，可得到离散的游离卵细胞，通过微吸管挑选出卵细胞酶解法酶解法-压片法：压片法：酶解胚珠后再轻压，挤出卵细胞 酶解酶解-解剖法：解剖法：胚珠先经酶解处理，再在倒置显微镜下从胚珠中解剖出卵细胞3植物离体受精的基本过程（2）卵细胞分离（1）微电融合）微电融合：在电泳作用下，使细胞氧化还原电位发生变化，细胞正负相：在电泳作用下，使细胞氧化还原电位发生变化，细胞正负相吸，再在脉冲电场作用下，两个细胞膜临时穿孔，细胞膜重新粘连，形成完整吸，再在脉冲电场作用下，两个细胞膜临时穿孔，细胞膜重新粘连，形成完整细胞。细胞。目前只有用这种方法融合的产物再生了植株。（2）高钙）高钙-高高pH介导融合：介导融合：钙离子有利于细胞形成钙桥，在高钙离子有利于细胞形成钙桥，在高pH条件下，更条件下，更易细胞融合。易细胞融合。（3）PEG(聚乙二醇聚乙二醇)诱导的融合：诱导的融合：利用利用PEG缩水作用，使细胞扭曲变形，缩水作用，使细胞扭曲变形，从而导致细胞融合。3（3）人工合子制备植物离体受精的基本过程配子分离融合小滴电脉冲或钙离子介导的融合PEG诱导的融合中央细胞与精细胞的融合与发育3植物离体受精的基本过程人工合子的培养，可以采用前面讲过的单细胞培养方法，培养形成愈伤组织，然后培养成苗。玉米离体体外融合后受精卵的发育3植物离体受精的基本过程（3）人工合子培养感谢聆听T H A N K S