实验五鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价.ppt

实验五实验五 鸡新城疫的实验室鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价诊断及免疫效果的评价一、实验目的一、实验目的1、掌握鸡新城疫的临诊要点。、掌握鸡新城疫的临诊要点。2、了了解解和和掌掌握握鸡鸡新新城城疫疫的的实实验验室室诊诊断断和和免免疫疫监监测测技技术。术。二、实验内容二、实验内容1、鸡新城疫的临诊要点。、鸡新城疫的临诊要点。2、鸡新城疫的实验室诊断。、鸡新城疫的实验室诊断。3、鸡新城疫的免疫效果评价。、鸡新城疫的免疫效果评价。HA和和HI的原理的原理1 1、HAHA试试验验：许许多多病病毒毒表表面面有有血血凝凝素素，能能与与各各种种动动物物的的红红细细胞胞表表面面受受体体结结合合，而而出出现现红红细细胞胞凝凝集集现现象象，简简称称为病毒的血凝现象为病毒的血凝现象。2 2、HIHI试试验验：病病毒毒的的红红细细胞胞凝凝集集现现象象，可可以以被被特特异异性性免免疫血清所抑制，称疫血清所抑制，称HIHI试验。试验。1 1、鸡新城疫的血凝试验、鸡新城疫的血凝试验(HA)(HA)【材料】新城疫病毒鸡胚接种尿囊液新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1 1份份 0.60.6鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液 1 1管管 生理盐水或生理盐水或PBS 1PBS 1瓶瓶 9696孔微量血凝板孔微量血凝板 1 1块块 微量加样器微量加样器 1 1支支【病毒血凝试验的操作方法病毒血凝试验的操作方法】孔孔 号号1 12 23 34 45 56 67 78 89 9101011111212病毒稀病毒稀释度释度1:21:21:41:41:81:81:161:161:321:321:641:641:1281:1281:2561:2561:5121:5121:10241:10241:20481:2048对照照生理生理盐水盐水505050505050505050505050505050505050505050505050病毒液病毒液505050505050505050505050505050505050505050 50 0.5%0.5%红红细胞细胞505050505050505050505050505050505050505050505050 微型振荡器微型振荡器1min1min，静置，静置30min30min 弃弃5050结果观结果观察察+-以以100%100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位单位：位：L置置于于振振荡荡器器上上振振荡荡1 1分分钟钟，静静置置后后30 30 minmin开开始始观观察察结结果果，待待对对照照孔孔红红细细胞胞已已沉沉淀淀即即可可进进行行结结果果观观察察。红红细细胞胞全全部部凝凝集集，沉沉于于孔孔底底，平平铺铺呈呈网网状状，即即为为100%100%凝凝集集（+），不不凝凝集者（集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。）红细胞沉于孔底呈点状。以以100%100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表凝集单位。从表4-14-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:1281:128，则，则l:128l:128为为1 1个血凝单位，个血凝单位，1:641:64、l:32l:32分别为分别为2 2、4 4个个血凝单位，或将血凝单位，或将128/4=32128/4=32，即，即1:321:32稀释的病毒液为稀释的病毒液为4 4个血个血凝单位。凝单位。【结果判定果判定】2、鸡新城疫的血凝抑制试、鸡新城疫的血凝抑制试(HI)【材料材料】除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免疫血清或者取高免卵黄抗体。疫血清或者取高免卵黄抗体。【病毒血凝抑制试验的操作方法病毒血凝抑制试验的操作方法】弃弃5050以以100100抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HIHI效价。效价。单位：位：L以以100抑抑制制凝凝集集（完完全全不不凝凝集集）的的被被检检血血清清最最大大稀稀释释度度为为该该血血清清的的血血凝凝抑抑制制效效价价，即即HI效效价价。凡凡被被已已知知新新城城疫疫阳阳性性血血清清抑抑制制血血凝凝者者，该病毒为新城疫病毒。该病毒为新城疫病毒。从表从表4-2看出，该血清的看出，该血清的HI效价为效价为1:64，用以，用以2为底的负对数为底的负对数(-log2)表示，即表示，即6log2。【结果判定结果判定】1、免疫鸡群发生新城疫流行有何特点？、免疫鸡群发生新城疫流行有何特点？2、简述确证新城疫的实验室诊断方法。、简述确证新城疫的实验室诊断方法。3、记录并分析、记录并分析HA、HI实验的结果。实验的结果。4、进行、进行HA、HI实验时有哪些注意事项？实验时有哪些注意事项？作作 业业