巴比妥类药物含量测定.ppt

巴比妥类药物的分析（Analysis of Barbitals DrugsAnalysis of Barbitals Drugs）含量测定含量测定(Assay)银量法银量法 溴量法溴量法 巴比妥类药物的含巴比妥类药物的含 酸碱滴定法酸碱滴定法 量测定方法量测定方法 紫外分光光度法紫外分光光度法 提取重量法提取重量法 HPLCHPLC法、法、GCGC法法 （一）（一）银量法银量法 基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。中国药典均采用银量法测定其含量。优点优点：操作简便，专属性较强。：操作简便，专属性较强。缺点缺点：受温度影响较大；滴定终点以溶液出：受温度影响较大；滴定终点以溶液出现浑浊为终点指示难以观察。现浑浊为终点指示难以观察。1.1.原理原理 反应摩尔比：反应摩尔比：1:11:1 溶剂系统：甲醇溶剂系统：甲醇3 3无水碳酸钠无水碳酸钠 终点指示：电位法指示（终点指示：电位法指示（AgAg玻璃电极系统）玻璃电极系统）自身指示法自身指示法 0.2g甲醇甲醇 40ml3%无水碳酸钠无水碳酸钠电位滴定法(AgNO3)指示电极(Ag)参比电极(玻璃/甘汞)2.2.测定方法与计算测定方法与计算 例如例如:异戊巴比妥及其钠盐的测定：异戊巴比妥及其钠盐的测定：取取本本品品约约0.2g 0.2g 加加甲甲醇醇40ml40ml使使溶溶解解 新新鲜鲜配配制制的的3%3%无无水水碳碳酸酸钠钠溶溶液液15ml15ml，照照电电位位法法，用用硝硝酸酸银银滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴 定定，即即 得得。每每 1ml1ml硝硝 酸酸 银银 滴滴 定定 液液（0.1mol/L0.1mol/L）相相当当于于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3（或或24.83mg24.83mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO3 3）。）。原料药：直接滴定法（容量分析法）原料药：直接滴定法（容量分析法）3.3.注意事项注意事项 （1 1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制 （2 2）硝酸银滴定液应新鲜配制）硝酸银滴定液应新鲜配制2022/12/28Analysis of Barbitals Drugs8 （二）（二）溴量法溴量法 凡凡在在5 5位位取取代代基基含含有有不不饱饱和和键键的的巴巴比比妥妥类类药药物物，其其不不饱饱和和键键能能与与溴溴定定量量地地发发生生加加成成反反应应，故故可可采采用用溴溴量量法法测测定定其其含含量量。中中国国药药典典收收载载的的司司可可巴巴比比妥妥钠钠采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示：采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示：（定量过量）（定量过量）Br2 +2KI 2KBr +I2（剩余）（剩余）I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6取本品约取本品约0.1g，精密称定，置，精密称定，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加，振摇使溶解，精密加溴滴定液溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加，再加盐酸盐酸5ml，立即密塞并振摇，立即密塞并振摇1min，在，在暗暗处静置处静置15min后，注意微开瓶塞，加后，注意微开瓶塞，加碘化钾碘化钾试液试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正空白试验校正。每每1ml溴滴定液（溴滴定液（0.1mo1/L）相当于）相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3。原料药原料药 剩余滴定法剩余滴定法KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O 溴滴定液（0.1 mol/L）的配制 取溴酸钾3.0 g与溴化钾15 g，加水适量使溶解成1000 ml，摇匀。（三）（三）酸碱滴定法（酸量法）酸碱滴定法（酸量法）巴巴比比妥妥类类药药物物呈呈弱弱酸酸性性，可可作作为为一一元元酸酸以以标标准准碱碱液液直直接接滴滴定定，或或在在非非水水溶溶液液中中用用强强碱碱溶溶液液直直接滴定。常用的方法如下：接滴定。常用的方法如下：1.1.在在水乙醇混合溶剂水乙醇混合溶剂中滴定中滴定 基基于于本本类类药药物物在在水水中中的的溶溶解解度度较较小小，滴滴定定时时多多在在醇醇溶溶液液或或含含水水的的醇醇溶溶液液中中进进行行，这这样样可可避避免免反反应应中中产产生生的的弱弱酸酸盐盐易易于于水水解解而而影影响响滴滴定定终终点点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。异戊巴异戊巴比妥比妥水水醇醇溶解溶解麝香草酚酞NaOH淡蓝色1.1.水水-乙醇混合溶液乙醇混合溶液 本本法法是是在在有有机机表表面面活活性性剂剂的的胶胶束束水水溶溶液液中中进进行行滴滴定定，用用指指示示剂剂或或电电位位法法指指示示终终点点。常常用用的的有有机机表表面面活活性性剂剂有有：溴溴化化十十六六烷烷基基三三甲甲基基苄铵苄铵(CTMA)(CTMA)和氯化四癸基二甲基苄铵和氯化四癸基二甲基苄铵(TDBA)(TDBA)。采采用用本本法法测测定定巴巴比比妥妥和和苯苯巴巴比比妥妥的的结结果果的的相相对对标标准准差差（RSDRSD）均均小小于于0.3%0.3%，并并优优于于在在水水-乙醇混合溶液中的滴定方法。乙醇混合溶液中的滴定方法。原料药原料药 直接滴定法（有空白校正）直接滴定法（有空白校正）T T滴定度，每滴定度，每1ml1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mgmg数数 V V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（滴定时，供试品消耗滴定液的体积（mlml）V VO O滴定时，空白消耗滴定液的体积（滴定时，空白消耗滴定液的体积（mlml）f f浓度校正因子浓度校正因子 2.2.在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定 表面活性剂是一种所谓表面活性剂是一种所谓“两亲两亲”分子，即其分子是由分子，即其分子是由亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水溶液中溶液中浓度很低时浓度很低时，基本上呈，基本上呈单分子单分子状态存在，但当状态存在，但当超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子组剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子组成数的聚集物，称为胶束或胶团。成数的聚集物，称为胶束或胶团。胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。正胶束反胶束H2O溴化十六烷基三甲基苄铵Cetyltrimethylbenzylammonium bromide，CTMA氯化四癸基二甲基苄铵Tetradecyldimethylbenzylammonium chloride，TDBA巴比妥类表面活性剂溶解麝香草酚酞指示剂NaOH滴定采采用用本本法法测测定定巴巴比比妥妥和和苯苯巴巴比比妥妥的的结结果果的的相相对对标标准准差差（RSDRSD）均均小小于于0.3%0.3%，并并优优于于在在水水-乙乙醇醇混混合合溶液中的滴定方法。溶液中的滴定方法。3.3.非水滴定法非水滴定法 巴巴比比妥妥类药物物在在非非水水溶溶液液中中的的酸酸性性增增强，用用碱碱性性标准准溶溶液液滴滴定定时，终点点较为明明显，可可获得得比比较满意意的的结果果。测定定时常常用用的的有有机机溶溶剂有有二二甲甲基基甲甲酰胺胺、甲甲醇醇、氯仿仿、丙丙酮、无无水水乙乙醇醇、苯苯、吡吡啶、甲甲醇醇-苯苯（151585）、乙乙醇醇-氯仿仿（1 110）等等；常常用用的的滴滴定定剂有有甲甲醇醇钾（钠）的的甲甲醇醇（或或乙乙醇醇）溶溶液液、氢氧氧化化四四丁丁基基铵的的氯苯苯溶溶液液等等；常常用用的的指指示示剂为麝麝香香草草酚酚蓝等等，也也可可用用玻玻璃璃-甘甘汞汞电极极系系统，以，以电位法指示位法指示终点。点。（四）紫外分光光度法（四）紫外分光光度法 巴巴比比妥妥类类药药物物在在酸酸性性介介质质中中几几乎乎不不电电离离，无无明明显显的的紫紫外外吸吸收收。但但在在碱碱性性介介质质中中电电离离为为具具有有紫紫外外吸吸收收特特征征的的结结构构，因因而而可可采采用用紫紫外外分分光光光光度度法法测测定定其其含含量量。本本法法灵灵敏敏度度高高，专专属属性性强强，广广泛泛应应用用于于巴巴比比妥妥类类药药物物的的原原料料及及其其制制剂剂的的含含量量测测定定，以以及及固固体体制制剂剂的的溶溶出出度度和和含含量量均均匀匀度度检检查查，也也常常用用于于体体内内巴巴比比妥类药物的检测。妥类药物的检测。(4)紫外分光光度法 u直接测定的直接测定的UVUV法法u提取分离后的提取分离后的UVUV法法 1.1.直接测定的紫外分光光度法直接测定的紫外分光光度法 本本法法是是将将供供试试品品溶溶解解后后，根根据据溶溶液液的的pHpH，在在最最大大吸吸收收波波长长（maxmax）处处，直直接接测测定定对对照照品品溶溶液液和和供供试试品品溶溶液液的的吸吸收收度度，再再计计算算药药物物的的含含量量。中中国国药药典典对对注注射射用用硫硫喷喷妥妥钠钠的的含含量测定采用本法。量测定采用本法。Beer-LambertBeer-Lambert定律定律 A=-A=-T=ElC ACT=ElC AC 单组分定量的方法单组分定量的方法：A A、吸收系数法（绝对法）、吸收系数法（绝对法）B B、标准曲线法、标准曲线法 C C、对照法、对照法注射用硫喷妥钠含量测定取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量适量(约相当于硫喷妥钠约相当于硫喷妥钠0.25g)，置，置500ml量瓶中，摇匀，量瓶中，摇匀，量取此溶液用量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀释制成每溶液定量稀释制成每1ml中约中约含含5g的溶液；的溶液；另取另取硫喷妥硫喷妥对照品对照品，精密称定，加，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶溶液溶解并定量稀释制成每解并定量稀释制成每1ml中约含中约含5g的溶液。的溶液。用用1cm吸收池，于吸收池，于304nm波长处分别测定吸收度，以波长处分别测定吸收度，以0.4%NaOH溶液作空白。根据每支的平均装量计算。溶液作空白。根据每支的平均装量计算。每每1mg1mg的硫喷妥钠相当于的硫喷妥钠相当于1.091mg的的C11H19N2NaO2S 2.2.提取分离后的紫外分光光度法提取分离后的紫外分光光度法 提提取取分分离离的的主主要要目目的的是是消消除除干干扰扰物物质质对对测测定定的的影影响响。根根据据巴巴比比妥妥类类药药物物具具有有弱弱酸酸性性，在在氯氯仿仿等等有有机机溶溶剂剂中中易易溶溶，而而其其钠钠盐盐在在水水中中易易溶溶的的特特点点。测测定定时时取取供供试试液液适适量量，加加酸酸酸酸化化后后，用用氯氯仿仿提提取取巴巴比比妥妥类类药药物物。氯氯仿仿提提取取液液加加pH7.2pH7.27.57.5缓缓冲冲溶溶液液，振振摇摇，分分离离弃弃去去水水相相缓缓冲冲液液层层。再再用用0.45mol/L0.45mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液提提取取氯氯仿仿层层中中的的巴巴比比妥妥类类药药物物，将将碱碱提提取取液液调调节节至至适适宜宜pHpH，然然后选择相应的吸收波长进行测定。后选择相应的吸收波长进行测定。USP USP（2424）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法 样样品品 溶溶解解 酸酸化化 氯氯仿仿提提取取 精精密密量量取取适适量量氯氯仿仿液液 蒸蒸气气浴浴上上挥挥干干 乙乙醇醇、pH9.6pH9.6缓缓冲冲液液 供试品溶液（样品液）供试品溶液（样品液）苯苯巴巴比比妥妥对对照照品品 乙乙醇醇、pH9.6pH9.6缓缓冲冲液液 标标准准溶溶液液（对照液）（对照液）240nm240nm为测定波长为测定波长(三三)高效液相色谱法高效液相色谱法色色谱谱条条件件与与系系统统适适用用性性试试验验：用用辛辛烷烷基基硅硅烷烷键键合合硅硅胶胶为为填填充充剂剂；以以乙乙腈腈-水水（30:7030:70）为为流流动动相相；检检测测波波长长为为220nm220nm。理理论论塔塔板板数数按按苯苯巴巴比比妥妥峰峰计计算算不不低低于于20002000，苯苯巴巴比比妥妥与与相相邻邻色色谱谱峰峰的的分分离离度度应应符符合合要求。要求。(三三)高效液相色谱法高效液相色谱法测测定定法法：取取本本品品2020片片，精精密密称称定定，研研细细，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于苯苯巴巴比比妥妥30mg30mg），置置50ml50ml容容量量瓶瓶中中，加加流流动动相相适适量量，超超声声处处理理2020分分钟钟使使苯苯巴巴比比妥妥溶溶解解，放放冷冷，用用流流动动相相稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，滤滤过过，精精密密量量取取滤滤液液1ml1ml，置置10ml10ml烧烧瓶瓶中中，用用流流动动相相稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取10l10l，注注入入液液相相色色谱谱仪仪，记录色谱图。记录色谱图。另另取取苯苯巴巴比比妥妥对对照照品品，精精密密称称定定，按按外外标标法法以以峰峰面积计算，即得。面积计算，即得。