6.生化反应与血清学鉴定.ppt
生化反应与血清学实验生化反应与血清学实验生化反应与血清学实验生化反应与血清学实验医学微生物学实验七一、生化反应 掌握细菌生化反应的原理和临床意义。熟悉鉴别细菌常用的生化试验原理、方法和结果判断。实验目的生化反应基本原理不同的细菌 含有不同的分解代谢的酶 具有不同的分解代谢途径 对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同 利用生化方法检测代谢产物以判断细菌的分解代谢特征，从而达到鉴定细菌的目的。称：细菌的生化反应检测法细菌的生化反应检测法知识点常见的生化反应对对糖糖的的发发酵酵甲基红试验单糖发酵试验VP试验对蛋白质的分解吲哚试验硫化氢试验枸橼酸盐利用试验尿素酶试验其他试验实验材料1.1.菌种菌种 大肠埃希菌、沙门氏菌大肠埃希菌、沙门氏菌2.2.微量生化反应管微量生化反应管 葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。3.3.试剂试剂 吲哚试剂吲哚试剂葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖1.糖发酵试验HCOOH 脱氢酶脱氢酶 CO2+H2 1.糖发酵试验（1）原理细菌产生的酶酸糖（酸碱指示剂）气体溴甲酚紫溴甲酚紫1.糖发酵试验（2）方法37培养1824h5 5种糖生化反应管种糖生化反应管大肠埃希菌、沙门氏菌大肠埃希菌、沙门氏菌接种针穿刺接种观察结果观察结果观察结果观察结果中性或碱性中性或碱性 紫色紫色 酸性酸性 黄色黄色 1.糖发酵试验（3）结果判断溴甲酚紫 有细菌生长培养基有细菌生长培养基呈混浊，可能出现呈混浊，可能出现3 3种结果。种结果。（3）结果判断2.靛基质（吲哚）试验色氨酸酶吲哚（无色）色氨酸吲哚试剂玫瑰吲哚（红色）（1）原理（2）结果判断阳性2.靛基质（吲哚）试验3.硫化氢试验酶硫化氢含硫氨基酸硫化铁黑褐色或硫化铅（1）原理（2）结果判断3.硫化氢试验生化反应材料分配分组分组两两人人 /组组菌种菌种沙门氏菌、大沙门氏菌、大肠杆肠杆菌各一支菌各一支 生化反应管生化反应管七支七支 /人人二、血清学鉴定 掌握细菌的血清学鉴定法。实验目的实验原理 根据抗原抗体反应具有高度特异性的特根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。点，用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。二、血清学鉴定实验材料1.1.菌种菌种 待检细菌待检细菌2.2.试剂试剂 多价沙门菌多价沙门菌O(A-F)O(A-F)诊断血清诊断血清3.3.其他其他 载玻片载玻片沙门氏菌的主要抗原组成O O抗原抗原：至少至少5858种种,含相同抗原组分归为一组，含相同抗原组分归为一组，引起人类疾病的沙门菌大多数在引起人类疾病的沙门菌大多数在AFAF组。组。H H抗原抗原：分分为为、相相，相以相以a a、b b、c c等表示，等表示，相以相以1 1、2 2、3 3等表示。等表示。ViVi抗原抗原：抗原抗原性弱，不稳定性弱，不稳定，可阻止可阻止O O抗原与其抗原与其相应抗体的凝集反应相应抗体的凝集反应。沙门氏菌诊断血清（11种）O2O2O4O4O7O7O9O9HaHaHbHbHcHcHdHdHiHiViViA-FA-F群多价群多价O OA-FA-F群多价群多价O O 先用AF和 Vi血清检测，根据结果再进行其他鉴定。注意：实验方法 50ul50ul血清血清+待检菌待检菌 50ul50ulNS+NS+待检菌待检菌 结果判断均匀混浊均匀混浊颗粒状凝集物颗粒状凝集物组别组别菌菌 型型抗抗 原原 o HA甲型副伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌1,2,12a:-B乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌德比沙门菌德比沙门菌鼠伤寒沙门菌鼠伤寒沙门菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C 猪霍乱（或丙型副伤寒）猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌沙门菌6,7,(Vi)c:1,5D伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌9,12,Vid:-E鸭沙门氏菌鸭沙门氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙门氏菌阿伯丁沙门氏菌11i:1,2沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表注意事项1.1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。生理盐水端应不出现凝集颗粒。2.2.沙门菌沙门菌ViVi抗原存在时可阻止抗原存在时可阻止O O抗原与相应抗体抗原与相应抗体发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事先加热破坏先加热破坏ViVi抗原，抗原，O O抗原才得以与相应的抗原才得以与相应的O O诊诊断血清发生凝集。断血清发生凝集。血清学实验进程先鉴定AF和Vi，根据结果再进行其他鉴定。AF Vi实验进程-为非沙门氏菌属，不再继续鉴定其他抗原成分。+-初步判断为沙门氏菌属，继续鉴定其他抗原成分。-+初步判断为沙门氏菌属，但需去除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他抗原成分。血清学实验材料分配分组分组4 4人人 /组组菌种菌种待测菌种一支待测菌种一支诊断血清诊断血清1 1盒盒 /组组群群别别菌菌 型型抗抗 原原 o HA甲型副伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌1,2,12a:-B乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌德比沙门菌德比沙门菌鼠伤寒沙门菌鼠伤寒沙门菌1,4,5,121,4,121,4,5,12b:1,2f,g:-i:1,2C猪霍乱（或丙型副伤寒）猪霍乱（或丙型副伤寒）沙门菌沙门菌6,7,(Vi)c:1,5D伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌9,12,Vid:-E鸭沙门氏菌鸭沙门氏菌3,10e,h:1,6F阿伯丁沙门氏菌阿伯丁沙门氏菌11i:1,2沙门氏菌属常见菌型诊断抗原表
