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项目2：微生物发酵技术 任务任务3 3：无菌空气制备：无菌空气制备教学安排：教学安排：1.员工培训员工培训 由老师讲解空气除菌的理论基础。由老师讲解空气除菌的理论基础。分配实操任务：制备无菌空气。分配实操任务：制备无菌空气。2.学生模拟组建运营一个无菌空气车间，学生模拟组建运营一个无菌空气车间，撰写计划书撰写计划书(在理论教学期间完成在理论教学期间完成)。市场部：当前空气除菌的技术进展。市场部：当前空气除菌的技术进展。技术部：确定空气除菌的技术路线，撰技术部：确定空气除菌的技术路线，撰写操作规程。写操作规程。品控部：制定无菌空气质量标准及检测品控部：制定无菌空气质量标准及检测方法。方法。总经理：协调监督各部工作，最后拿出总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。完整的计划书。3.计划书实施。计划书实施。计划书要先经过老师的审核，然后实计划书要先经过老师的审核，然后实施。施。实施过程中考核操作技能。实施过程中考核操作技能。实施后及时进行实训报告的撰写也总实施后及时进行实训报告的撰写也总结。结。空气除菌空气除菌l一一 空气除菌的方法空气除菌的方法l(一一)加热灭菌加热灭菌l(二二)静电除尘静电除尘l(三三)介质过滤除菌介质过滤除菌l1 纤维介质过滤器纤维介质过滤器l(1)棉花活性炭过滤器棉花活性炭过滤器l(2)平板式超细纤维过滤器平板式超细纤维过滤器l2 粉末烧结金属过滤器粉末烧结金属过滤器l3 薄膜空气过滤器薄膜空气过滤器l(1)Bio-X空气过滤器空气过滤器l(2)高流量空气过滤器高流量空气过滤器l二二 介质过滤除菌的机制介质过滤除菌的机制l(一一)纤维介质除菌的机制纤维介质除菌的机制l 惯性冲击、拦截、扩散、重力沉降、静电吸附。惯性冲击、拦截、扩散、重力沉降、静电吸附。l(二二)除菌效率除菌效率l透过率：透过率：l P=N2/N1l介质捕集效率：介质捕集效率：l =(N1 N2)/N1=1 Pl三三 空气空气过滤除菌的工除菌的工艺流程流程l(一一)经典空气典空气过滤除菌工除菌工艺流程流程l(二二)新型空气新型空气过滤除菌工除菌工艺流程流程无菌检查与染菌的处理无菌检查与染菌的处理l一一 无菌检查无菌检查l染菌率的统计：染菌率的统计：l 染菌率染菌率=发酵罐染菌批发酵罐染菌批/总投罐批总投罐批l二二 污染杂菌及其处理污染杂菌及其处理l(一一)种子罐染菌的处理种子罐染菌的处理l 高压蒸汽灭菌后放下水道高压蒸汽灭菌后放下水道l(二二)发酵罐染菌的处理发酵罐染菌的处理l前期染菌：杂菌对生产危害大前期染菌：杂菌对生产危害大 灭菌放掉灭菌放掉l 对生产危害不大对生产危害不大 灭菌后重新拌种灭菌后重新拌种l 营养成分消耗较多营养成分消耗较多 放掉部分，补充部分新放掉部分，补充部分新的，重新灭菌拌种；的，重新灭菌拌种；l 杂菌量少且生产慢杂菌量少且生产慢 继续发酵，时刻注意观继续发酵，时刻注意观察。察。l中后期染菌中后期染菌 加入适量杀菌剂；加入适量杀菌剂；l 降低温度或控制补料；降低温度或控制补料；l 提前放罐。提前放罐。l三三 污染噬菌体及其处理污染噬菌体及其处理l(一一)污染噬菌体的发现污染噬菌体的发现l 发酵液突然转稀，泡沫增多，早期镜检发现发酵液突然转稀，泡沫增多，早期镜检发现菌体染色不均匀，菌丝成像模糊，短时间内菌体菌体染色不均匀，菌丝成像模糊，短时间内菌体大量自溶，平皿培养有噬菌斑，大量自溶，平皿培养有噬菌斑，pH逐渐上升，逐渐上升，溶氧浓度回升提前，营养成分很少消耗，产物合溶氧浓度回升提前，营养成分很少消耗，产物合成停止。成停止。l(二二)噬菌体的分离噬菌体的分离l 1 双层琼脂平板法双层琼脂平板法l 2 电子显微镜检查电子显微镜检查l(三三)污染噬菌体的处理污染噬菌体的处理l1 发酵早期出现噬菌体发酵早期出现噬菌体l 60杀灭，再接种。杀灭，再接种。l2 发酵中期出现噬菌体发酵中期出现噬菌体l 适当补充部分营养物质再灭菌接种。适当补充部分营养物质再灭菌接种。l3 添加噬菌体抑制剂添加噬菌体抑制剂l(四四)污染噬菌体的设备和环境处理污染噬菌体的设备和环境处理l发酵液：灭菌放掉；发酵液：灭菌放掉；l罐体：罐体：甲醛熏蒸，高压蒸汽灭菌；甲醛熏蒸，高压蒸汽灭菌；l生产岗位染菌：停产清洗和消毒。生产岗位染菌：停产清洗和消毒。作业：作业：l1、画出一条空气除菌工艺流程图，并作简要说、画出一条空气除菌工艺流程图，并作简要说明。明。l2、如何检测无菌空气质量？如何检测无菌空气质量？