阿替洛尔对锦鲫的环境健康风险评价.doc

摘 要本研究采用阿替洛尔(Atenolol，简称ATL)进行试验，通过实验室模拟自然水生条件初步探究ATL对锦鲫抗氧化防御系统的毒性大小及机理，探究ATL对锦鲫肝脏的氧化应激系统损伤，本实验通过测定抗氧化指标SOD和CAT，评估了用不同浓度ATL长时间暴露下（30天），ATL对锦鲫肝脏抗氧化防御系统的损伤情况，比较不同剂量ATL毒作用的差别。由实验可得知将锦鲫暴露于ATL100mg/kg会使锦鲫CAT活性下降，酶活受到抑制，说明锦鲫的抗氧化系统受到损伤，阿替洛尔能对锦鲫产生致毒作用。关键词：阿替洛尔；锦鲫；肝细胞；SOD；CAT；氧化损伤；生物毒性AbstractIn this study, atenolol (ATL) was used to study the toxicity and mechanism of ATL on the antioxidant defense system of Carassius auratus, and the damage of ATL on the oxidative stress system of Carassius auratus liver. By measuring the antioxidant indexes SOD and CAT, we evaluated the effects of ATL on Carassius auratus under low concentration and long time exposure (30 days) To compare the toxic effects of different doses of compounds. The results showed that the CAT activity of Carassius auratus exposed to ATL 100mg / kg decreased and the enzyme activity was inhibited, which indicated that the antioxidant system of Carassius auratus was damaged and atenolol could produce toxic effect on Carassius auratus.Key words: atenolol; Carassius auratus; Liver cells; SOD.CAT; Oxidative damage; The biological toxicity of目 录1 引言11.1 阿替洛尔的物理化学性质11.2 阿替洛尔进入自然环境的途径11.3 阿替洛尔的毒性效应21.4 锦鲫的抗氧化防御系统31.4.1 生物标志物31.4.2 抗氧化防御的机理31.5 本文的研究目的和意义42 实验部分42.1 试剂和仪器42.1.1 药品42.1.2 仪器42.1.3 锦鲫的驯养42.2 实验步骤52.2.1 染毒处理52.2.2 取样和制备样品52.2.3 总蛋白的测定52.2.4 SOD活性测定52.2.5 CAT活性测定63 数据分析与处理63.1 统计分析方法63.2 数据记录与处理63.3 结果分析与讨论83.3.1 图表分析83.3.2 讨论94 结论与展望10致谢11参考文献12阿替洛尔对锦鲫的环境健康风险评价1 引言阿替洛尔(Atenolol，ATL)，是一种选择性1肾上腺素受体阻滞药，被广泛使用在多种情况所引起的中、轻度高血压病。ATL由英国帝国化学公司(ICI)于上世纪70年代初期率先研制的1。ATL的优点有：起效快、无积蓄中毒性中毒的风险等，普及于高血压、心绞痛、心肌梗死等疾病的治疗。因为ATL有持久性超量使用、较高的稳定性和水溶性的特点，所以现在ATL在各类水体中被检测出含有残留。据实验研究人员表明，ATL存在阻抑人类胚胎细胞生长的情况，所以对自然生态环境和水生生物的健康存在很大的隐患2。天然条件下的水环境中ATL的理化性质比较稳定，因此采用传统水处理技术与生态修复技术都很难去除各类水体环境中残留的ATL。总的来说，ATL对环境健康影响的研究仍然是一个我们需要重复不断地探讨和研究的问题。1.1 阿替洛尔的物理化学性质阿替洛尔(Atenolol，ATL)，又称：氨酰心安，分子量：266.33600，分子式：C14H22N2O3，溶解于乙醇，微溶于氯仿，几乎不溶于乙醚。精确质量：266.16300，熔点151155，密度：1.125 g/cm3，沸点：508ºC，白色粉末，无臭或微臭。图1-1 阿替洛尔结构式1.2 阿替洛尔进入自然环境的途径目前获得阿替洛尔片剂生产资质的生产企业我国共70多个，触及的相关部门批准文号105个。参照国外相关标准与国内相关文件，欧洲药典8.0版收录了ATL的8个杂质，但是我国很少有关于阿替洛尔片的相关物质系统研究和杂质溯源的有关报道。随着近些年来我国人口老龄化越来越严重，ATL也越来越广泛地被适用于治疗心血管疾病当中。在过去的10年间，其处方量增长了约1倍3。阿替洛尔主要服用方式以口服为主，ATL的口服虽然吸收很快，但是并不完全，口服大约摄取50%有效成分，在2-4小时将会达到峰浓度，口服摄取后作用会持续很久，可以达到一天，广泛分布在各个组织中，少量可以通过血-脑脊液屏障。健康人群的分布量大约为50-75升，血液中的半衰期为6-7小时，主要通过排尿的方式排出人体。且我国现阶段医疗废品处置存在废物生产机构安全意识低、设施简陋及知识匮乏、过期药品回收形同虚设、诊所废品流失、废物集中处置单位服务方式不足等问题，造成了每年近一半年生产量以上的医疗废品没有妥善处理流入自然界4。由于阿替洛尔具有较好的水溶性和抗生物降解性，因此常规处理污水方法很难有效去除阿替洛尔，这些残留于尿液中的药品随着地下下水道源源不断的流入自然界水环境中。许多国家和地区的污水厂中已检测到ng/Lg/L的阿替洛尔56。就目前来说，阿替洛尔已经在水环境以及地表水中被检测出大量存在，并检出浓度偏高，阿替洛尔已经成为了水环境的重要污染物。随着近些年来我国人口老龄化越来越严重，ATL也越来越广泛地被适用于治疗心血管疾病当中，中、轻度高血压病治疗中以ATL为代表的选择性1肾上腺素受体阻滞药的需求也将不断扩大。所以在自然生态环境中ATL的比例也逐渐增加。1.3 阿替洛尔的毒性效应因为化合物的化学结构和毒性效应紧密相连，不难看出阿替洛尔的亲脂性显然和阿替洛尔生物毒性相关，阿替洛尔的-受体阻滞剂的logKow（辛醇水分配系数）为：约为 -0.15到0.787。凡是人类生产的大多数药品大多经过特别调整而拥有其特定的效用方式。虽然阿替洛尔是针对人类的l肾上腺受体，可是与其相似的受体也在哺乳类、鱼类等脊椎动物中存在。根据研究现象表明，有类似阿替洛尔的-受体阻滞剂，-受体阻滞剂裸露会致使鱼类胚胎孵化成功率减少，而且也会导致鱼类的胚胎发育情况不正常。例如普萘洛尔裸露可能会让斑马鱼胚胎的体色变浅、心包肿、血液循环异常和尾部弯曲，明显减少其孵化成功率和自由活动，最后导致胚胎直接死亡8。根据观察-受体阻滞剂的药物在防治疾病中对机体的作用及其原理，ATL对鱼类也能发生相似的生物机体的机能效应，比如引起心率降低。相关研究人员还在实验中发现-受体阻滞剂可能导致EROD的升高。也发现鱼鳃中的EROD含量更为显著，这样的情况也许说明了鱼鳃在-受体阻滞剂代谢中的主要作用，而-受体阻滞剂的诱导效力可以与一些自然生态环境常见的EROD诱导剂的作用匹敌。在其他研究实验中还能发现-受体阻滞剂可以诱导斑马鱼心脏中产VTG（卵黄蛋白原），这是第一次人类发现VTG可以经过非雌激素方式刺激表现出来9。虽然ATL被认为是较为安全的一种-受体阻滞剂，但是自然生态环境中所存在的大量ATL，让我们不得不重新看待ATL的毒性效应和ATL对于自然生态环境及生物体的安全危害和影响。1.4 锦鲫的抗氧化防御系统1.4.1 生物标志物一种能在意识之外评价服药后正常生理、病理过程或机体生理的指标被称作生物标志物10。生物标志物作为一种特别的且有用的辅佐方法可以快速、灵敏、准确、在较早期地推断病症的产生、进展和预后。生物标志物还可以适合用在严重程度疾病的判断和种类，检测疾病医疗的效果，也可使用在筛查患病高危人群之中111213。指示水环境污染的主要生物标志物包括：细胞色素4P50lA1（抗氧化酶、解毒酶等）、金属硫蛋白、DNA加合物、应激蛋白（HSP）。抗氧化酶被视作锦鲫抗氧化系统的重要指标之一，所以在研究锦鲫抗氧化性时抗氧化酶便能作为一种特殊生物标志物。1.4.2 抗氧化防御的机理鲫鱼类的抗氧化系统中，起重要作用的是抗氧化酶：消除机体自由基的功能、对氧化胁迫的清除功能、增强机体防御能力、增强机体免疫等14。抗氧化防御系统中SOD、CAT是其重要防线之一，SOD的任务是将氧气催化成过氧化氢，如果过氧化氢清除的不适时，过氧化氢就会和氧气产生反应后，从而生成毒性羟基自由基。而CAT的任务是主要将SOD催化后产生的过氧化氢一一转化为水和氧气，便能够减少过氧化氢的浓度，以此保护机体的组织，维持机体细胞内环境的稳定15。清除活性氧自由基的反应式如下：自由基是有氧生物一定需要的，若自由基的生产量很大，抗氧化防御系统的抗氧化清理作用清理不及时，遭到压制，长时间就会导致抗氧化防御系统损伤，抗氧化酶活性下降。综上，要让自然生态环境有所改变，鱼类的抗氧化酶活性的变化就可以作为衡量指标之一。1.5 本文的研究目的和意义随着我国老龄化的加剧，心血管疾病患者不断增多，阿替洛尔为代表的-受体阻滞剂药品的使用量可能会持续增加。大量的阿替洛尔随着患者排泄以及医疗废物处理不当大量流入以水环境为代表的自然环境中，因此自然生态环境正在逐渐恶化。本论文在以下文献的研究基础上，以锦鲫作为实验对象，主要进行的研究内容是在室内进行半静态染毒实验，进行更深入的研究关于阿替洛尔对锦鲫的肌肉和内脏团中谷胱甘肽过氧化氢酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽转硫酶、超氧化物歧化酶活性的影响。经过本实验的探究，从而评价阿替洛尔对锦鲫的毒性效应以及产生的酶系的响应，为评价阿替洛尔对水生动物，尤其是对于鱼类的毒性影响和潜在生态风险提供了基础数据和参考价值。2 实验部分2.1 试剂和仪器2.1.1 药品阿替洛尔（摩贝实验用品商城，纯度为98%）；福尔马林、二甲苯和酒精（国药集团试剂有限公司，上海）；SOD、CAT和蛋白质含量测定试剂盒南京建成生物工程研究所，南京）；锦鲫（Carassiusauratus，19.7±3.6g，9.0±1.0cm），所有锦鲫均购自宁德市金马市场。（实验中所用的试剂的纯度均为100）2.1.2 仪器低温高速冷冻离心机（Allegra64R来自于美国Beckman公司）；紫外可见分光光度计（Unico UV2000 spectrometry，上海）；2.1.3 锦鲫的驯养实验室中曝气水的来源是活性炭去氯曝气自来水、溶解氧大于5mgL-1、pH7.6±0.3、水温22±2°C。实验室条件下锦鲫被驯养至少达到15天以上，每天的任务给锦鲫定时定量投饵一次（饵料为南京水产所提供的鱼用食料），并且给鱼缸持续充氧。实验应选择肉眼不可见畸形的无明显疾病的锦鲫。2.2 实验步骤2.2.1 染毒处理本实验选择以锦鲫作为对象，购置于宁德市金马市场。将锦鲫置于30L曝气水配备自动换水系统的鱼缸中，实验环境保持在溶解氧大于5mg·L-1、pH7.6±0.3、水温22±2。锦鲫必须在实验室的条件下驯养至少达到15天以上，需要给鱼缸持续充氧且每天喂食量约0.035g/鱼（饵料为宁德水产所提供的鱼用食料）。实验开始前，应挑选无明显疾病、健康活泼和肉眼无可见畸形的锦鲫。为保证每个鱼缸的暴露浓度尽量在同一水平，换水时先放到剩下一半的水，再加入一定体积事先配置好的KP母液和水，其中KP母液浓度为100mg/L（用二甲基亚砜溶液配置）。将锦鲫随机分划入处理组别，设置的浓度组为ATL（0），ATL（10mg/kg），ATL（100mg/kg）。2.2.2 取样和制备样品在暴露实验第7、14、30天从每个缸中选择三条差不多，无明显病态锦鲫，捞出受试鱼，将其击昏后立刻放置在天平上迅速称重，而后在冰盘上为受试鱼测量和解剖，将受试鱼的肝脏取出，用0.9的生理盐水为组织表面冲洗备用。然后取出低温冷冻保存的样品或者新鲜组织样品，表面残余的水分利用滤纸吸干，而后迅速称量，加入质量体积比为1：9的冷生理盐水，操作电动匀浆器进行匀浆后，在-4的冷冻离心机（Beckman，购置于美国）12000g离心15分钟，取其上清液分别测定肌肉和内脏中蛋白质含量及相关酶活性，4小时内需测定完毕。2.2.3 总蛋白的测定运用Bradford方法对锦鲫的蛋白含量进行测定，采用BSA实验中的标准蛋白。NH3+基团存在于蛋白质分子中，游离状态下的考马斯亮蓝G-250呈现棕红色，当蛋白标准液或样品与棕红色的显色剂出现反应时，蛋白中的NH3+便会和G-250染料上的阴离子相结合，此时溶液将会呈现出蓝色。如果色素-蛋白质的结合物在595nm下时，在一定范围内含量的蛋白质，蛋白的含量与光的密度值会呈现正比，测定出的蛋白含量被用在校正SOD，CAT酶活性。提取所需的酶提取液，用滴管加入3mL的G-250试剂，然后使用混勾器将酶提取液和试剂进行充分的混合，在10分钟内二者将会相互反应，而后用595nm的波长下做比色，样品测定过程中，利用测定标准管（标准样品试样）和对照管（蒸馏水空白）的吸光度作为校正。在此期间一定要注意的是，如果当样品的浓度太高则需要对其预先稀释，以保证测定的样品吸光度在准确的线性范围内。2.2.4 SOD活性测定使用Flohe和Otting(1984)描述的方法测定相关生化参数的测定过程并且采用试剂盒测定SOD活性，SOD活性根据冯明宝16等提出的方法来测定：超氧离子的自由基会生成黄嘌呤氧化酶与黄嘌呤，二者相互反应中，亚硝酸盐形成于超氧离子经过氧化羟胺的作用。通过显色剂的作用下，使用分光光度计测其在550nm处的吸光度，会出现肉眼可见的淡紫红色。如果待测样品中具有SOD超氧离子会出现相对应的专一性的抑制作用，会降低它生成的亚硝酸盐的浓度，并且吸光度会减小。推算SOD酶活性可利用所测定样品与标准对照之间吸光度的差异，单位为USOD/g蛋白质。依照实验中吸光度的变化情况，可以明确待测样品的SOD活性，并且通过公式推算，最后能够计算出待测样品中SOD酶活性，其中SOD的活性的表达式为U/mg protein。每毫克的组织蛋白在每一毫升反应液的抑制率达50%时，其实验所对应的SOD量是一个活性单位（U）为SOD活性定义。测定过程需要同时测定标准管（标准样品试样）和对照管（蒸馈水空白），用作样品管的校正。2.2.5 CAT活性测定CAT酶活性的测定利用试剂盒进行批量化的测定，其测定过程是依据Goth(1991)所描述的方法，CAT分解H2O2加入钼酸铵的反应后将会迅速中止，因为钼酸铵与实验过量的H2O2反应能够产生淡黄色的络合物，而且能够在405nm波长处测定出其的吸光度和生成量，所以能够推算出CAT的活性，其中CAT活力表达为U/mg protein。通过研究人员发现每一毫克组织蛋白1秒钟能够分解出1µmol的H2O2的量作为一个活性单位该为组织匀浆中的CAT活性定义。测定过程中需要同时测定对照管(蒸馏水空白)用作样品管的校正。3 数据分析与处理3.1 统计分析方法该实验利用SPSS数据处理软件Statistical Package for Social Sciences，ver.12.0，SPSS公司，芝加哥，美国）处理该实验数据之间统计学的差异进行分析。实验中实验的数值均可使用平均值±标准偏差的方法来表示。其中，当P小于0.05时，可认为对照组与实验组之间具有显著性的差异。实验时数据记录的应用统计分析图均用Origin 8.0（Origin Lab，美国）绘制。3.2 数据记录与处理表2-1 不同浓度的ATL在不同时间暴露下蛋白质浓度的变化暴露时间/天ATL暴露浓度Control10mg/kg100mg/kg71.011.371.15140.971.401.14301.011.060.96图2-1 不同浓度的ATL在不同时间暴露下蛋白质浓度的变化表2-2 不同浓度的ATL在不同时间暴露下SOD酶活性的变化暴露时间/天ATL暴露浓度Control10mg/kg100mg/kg770.8861.5969.321483.0757.9977.753078.3082.1176.48图2-2 不同浓度的ATL在不同时间暴露下SOD酶活性的变化表2-3不同浓度的ATL在不同时间暴露下CAT酶活性的变化暴露时间/天ATL暴露浓度Control10mg/kg100mg/kg717.7520.2319.941417.7921.8415.423017.2310.6115.12图2-3 不同浓度的ATL在不同时间暴露下CAT酶活性的变化3.3 结果分析与讨论3.3.1 图表分析从图1中我们分析不同浓度ATL和时间对蛋白质活性的影响，可以看出第7天的在蛋白质酶活性10mg/kg的浓度组酶活性与空白对照组其酶活性呈现出诱导上升的趋势，呈现显著性差异（p小于0.05），其诱导率为34.97；在100mg/kg浓度组与空白对照组相比较呈现诱导上升趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）。14天的时候，10mg/kg的浓度组蛋白质酶活性与空白组对比呈现出诱导上升的趋势，且出现显著性差异（p小于0.05），其诱导率为43.72；100mg/kg高浓度组蛋白质酶活性与空白组相比没有显著性差异（P大于0.05）。30天的时候，10mg/kg浓度组蛋白质酶活性与空白组对比出现了诱导上升的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）；100mg/kg高浓度组蛋白质酶活性与空白组相比呈现抑制下降的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）。从图2中我们分析不同浓度ATL和时间对SOD酶活性的影响，可以看出第7天，10mg/kg低浓度组与空白对照组相比SOD酶活性呈现出显著性差异（p小于0.05），SOD酶活性有明显降低，酶活显著被抑制，抑制率为13.10；在100 mg/kg浓度组与空白对照组比较呈现抑制下降的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）。14天的时候，10mg/kg浓度组与空白组对比SOD酶活性呈现显著性差异（p小于0.05），且呈抑制下降趋势，其抑制率为30.20；100 mg/kg浓度组SOD酶活性与空白组对比呈现抑制下降的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）。30天的时候，10mg/kg浓度组SOD酶活性与空白组对比呈现诱导上升的趋势，可是没有明显差异（P大于0.05）；100 mg/kg高浓度组与空白组相比SOD酶活性已经相对一致。从图3中，我们分析不同浓度ATL和时间对CAT酶活性的影响，第7天的在CAT酶活性10 mg/kg低浓度组CAT酶活性与空白对照组相比呈现诱导上升的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）；在100mg/kg浓度组与空白对照组相比较，呈现诱导上升的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）。14天的时候，10 mg/kg浓度组CAT酶活性呈现诱导上升趋势，出现显著性差异（P小于0.05），其诱导率22.80；100 mg/kg浓度组CAT酶活性与空白组对比呈现抑制下降的趋势，但是没有明显差异（P大于0.05）。30天的时候，10mg/kg浓度组CAT酶活性与空白组对比出现了显著性差异（p小于0.05）呈现抑制下降的趋势，其抑制率为38.43；100 mg/kg高浓度组CAT酶活性与空白组相比出现了显著性差异（p小于0.05）呈现抑制下降的趋势，其抑制率为12.26。3.3.2 讨论本实验所采用阿替洛尔（ATL）进行试验，通过实验室模拟自然水生条件初步探究ATL对锦鲫抗氧化防御系统的机理与毒性作用的大小，探究ATL对锦鲫肝脏的氧化应激系统损伤，为理解ATL对水生生态系统的影响提供实验数据。本实验通过测定抗氧化指标SOD和CAT，评估了低浓度长时间暴露下（30天）阿替洛尔对锦鲫肝脏抗氧化防御系统的损伤，比较不同剂量化合物毒作用的差异。通过对阿替洛尔对锦鲫肝脏的氧化系统损伤的研究了解到，将锦鲫暴露于ATL0mg/kg、ATL10mg/kgSOD、CAT浓度变化呈现一致规律，说明ATL10mg/kg时，对锦鲫的氧化损伤并不明显；将锦鲫暴露于ATL100mg/kg会导致锦鲫CAT酶活性受到抑制作用，这些体内表征的变化可证明阿替洛尔能导致锦鲫肝脏的氧化损伤。因此阿替洛尔对鱼能够产生诱导发生氧化应激，CAT活性下降，这些表征可证明阿替洛尔的暴露造成了肝脏细胞的氧化应激并产生毒性效应。实验研究发现内分泌系统易受阿替洛尔影响，对生物体具有潜在的威胁，对与动植物都具有较大的消极效应。当使用低浓度阿替洛尔处理动物时，会造成动物对氧的消耗量的增加，可发现阿替洛尔对锦鲫的肝细胞既有诱导作用，也有抑制作用。从实验数据可得知，实验发现：0mg/kg、10mg/kg浓度暴露下，蛋白质浓度变化呈现一致规律；10mg/kg浓度暴露下，7天、14天对SOD酶活性有显著的抑制能力和CAT酶活性有诱导能力，30天后又与空白组持平，说明低浓度ATL暴露下，生物体内自由基的增加，在SOD酶活性下降和CAT酶活性上升作用下使得生物体清除过多的自由基后机体自身抗氧化系统未被破坏，得出低浓度ATL对生物体的毒性影响不大；100mg/kg浓度暴露下，30天对CAT酶活性有显著的抑制能力，说明生物体内自由基的增加，从而造成肝脏组织损伤，这种现象可能是阿替洛尔本身所具有的毒性所引起的，即ATL的浓度仅在一定浓度范围内与锦鲫的表达呈剂量-效应相关关系，并把这种现象归结为ATL本身所具有的毒性。4 结论与展望本论文针对阿替洛尔进入环境后锦鲫肝脏的损伤以及对肝脏抗氧化应激系统的影响。论文主要研究结论如下：在浓度（ATL0mg/kg、ATL10mg/kg）暴露下SOD、CAT浓度变化没有并呈现一致规律，蛋白质浓度变化没有并呈现一致规律，说明ATL10mg/kg时，对锦鲫的氧化损伤并不明显；ATL100mg/kg会导致锦鲫SOD、CAT活性有下降趋势，蛋白质浓度均有所降低，说明高浓度对SOD、CAT活性蛋白质有着显著的抑制能力，这些体内表征的变化可证明阿替洛尔能导致锦鲫肝脏的氧化损伤。从实验结果可看出一定浓度的阿替洛尔会导致锦鲫SOD、CAT活性有下降趋势，蛋白质浓度均有所降低对锦鲫的肝脏造成氧化损伤，所以可以说明阿替洛尔对生物的毒性十分强烈，因此在必要的使用当中若使用不当就会产生严重的环境影响。在未来的使用当中，应谨慎小心或发展出更加安全可靠、效果相同可替代的阿替洛尔其他药品。致 谢时光荏苒，岁月如梭，大学四年马上就要过去了，而这里有我熟悉的一切，有我热爱的一切。恍惚中，在美丽的校园中，我度过了人生中最为宝贵的年华。其间，虽朝暮勤勉，自奋扬鞭，师长激劝，同窗互促，虽学有偶成，但距恩师之期盼、时代前进与学科发展之要求，仍深感差距悬殊，故常觉内心惶恐，寝夜难眠。诚所谓，人生有限而学海无涯！从论文的撰写到完成的整个过程中，我要感谢所有关心过我，陪我一路走到最后的人。首先，要感谢学校，感谢学院给我提供了这样一个学习的平台和良好的学习环境。也要感谢院系所有的老师们，感谢他们在这四年来对我的悉心教导，他们严谨细致、一丝不苟的作风一直是我工作、学习中的榜样；他们循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪。他们的言传身教，将使我在今后的人生中受益匪浅。其次，要特别感谢我的指导老师，从论文的立题到论文的撰写直至完成，整个过程无不浸透着老师的心血。正是在老师的悉心指导下，这篇论文得以顺利完成，在此对老师致以深深的谢意。老师广博的学识，严肃的科学态度，严谨的治学精神，灵活的思维方式，耐心细致的言传身教深深感染激励着我；但生活中她却是平易近人的，对学生关怀备至，这份师恩令我永生难忘！最后，我要感谢专业的所有同学们，感谢他们的鼓励和支持，感谢他们和我一路走来，让我在此过程中倍感温暖！感谢所有关心和帮助过我的老师、同学、朋友，谢谢你们！参 考 文 献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版(二部) S .北京: 中国医药科技出版社, 2015: 572573.2 李莲. 改性TiO_2对水体中阿替洛尔去除的应用研究D. 东南大学, 2018. 3 Santos L H M L M , Araujo A N , Fachini A , et al. Ecotoxicological aspects related to the presence of Pharmaceuticals in the aquatic environmentJ. Journal of Hazardous Materials, 2010, 175(1-3) :45-95. 4 郑玮, 陈建辉. 生态文明视角下医疗废物处置现状及管理对策J. 中国公共卫生管理, 2015, 31(06) :819-821+824. 5 Jones O A H , Voulvoulis N , Lester J N . aquatic environmental assessmentJ. Water Research, 2002, 36(20) :5013-5022. 6 Gómez MJ, Petrovi M, Fernández-Alba AR, Barceló D. Determination of pharmaceuticals of various therapeutic classes by solid-phase extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis in hospital effluent wastewaters. Journal of chromatography. A. 2006 May; 1114(2) :224-233. DOI: 10. 1016/j. chroma. 2006. 02. 038. 7 Massarsky A , Trudeau V L , Moon T W . -blockers as endocrine disruptors: the potential effects of human -blockers on aquatic organismsJ. Journal of Experimental Zoology Part A Ecological Genetics & Physiology, 2011, 315A(5) :251-265. 8 Fraysse B, Mons R, Garric J (2006) Development of a zebrafish 4-day embryo-larval bioassay to assess toxicity of chemicals. Ecotoxicol Environ Saf 63: 253267. 9 彭祖华, 池剑, 孙立伟, et al. -肾上腺受体阻滞剂的水生态毒理学研究进展J. 生态毒理学报, 2013, 8(4) :494-503. 10 Strimbu K, Tavel JA. What are biomarkers? J. Curr Opin HIV AIDS, 2010, 5( 6) : 463-46611 Strimbu K, Tavel JA. What are biomarkers? J. Curr Opin HIV AIDS, 2010, 5( 6) : 463-46612 Ehrlich J, Kaluzny M, Baumann S, Lehmann , HohnloserSH. Biomarkers of structural remodelling and endothelial dysfunction for prediction of cardiovascular events or death in patients with atrial fibrillationJ. Clin es Cardiol, 2011, 100( 11) : 1029-1036.13 Galazis N, Iacovou C, Haoula Z, Atiomo W. Metabolomic biomarkers of impaired glucose tolerance and type 2 diabetes mellitus with a potential for risk stratification in women with polycystic ovary syndromeJ. Eur J Obstet Gynecol eprod Biol, 2012, 160( 2) : 121-130.14 王丽平, 郑丙辉, 孟伟. 环境污染物对水生生物产生氧化压力的分子生物标志物J. 生态学报, 2007, (01) : 380-388. 15 李莹. 三种典型有机污染物对鲫鱼抗氧化防御系统影响的研究D. 南京大学, 2013.16 Dong, Y. L. ;Zhou, P. J. ;Jiang, S. ;Pan, X. W. ;Zhao, X. H. ,Induction of oxidative stressand apoptosis by pentachlorophenol in primary cultures of Carassius carassiucarassius hepatocytes. Comparative biochemistry and physiology. carassius hepatocytes. Comparative biochemistry and physiology. Toxicology rwucoogy (2009, ), 179-85.14