《生物化学实验Ⅰ》实验教学大纲.doc
生物化学实验实验教学大纲生物化学实验 实验教学大纲 （Biochemical E_periments） 课程编号：19220_7 课程名称：生物化学实验 实验学分：1 实验学时：32 适用专业：生物技术、生物科学、生物科学（师范）、生物工程 实验名称与学时安排 序号 实验名称 学时 分配 序号 实验名称 学时 分配 1 蛋白质浓度测定(一) Lowry 法 3 6 葡聚糖凝胶色谱 3 2 蛋白质浓度测定(二) Bradford 法 3 7 盘状聚丙烯胺凝胶电泳分离血清蛋白质 6 3 蛋白质浓度测定(三) 紫外线吸收法 3 8 血糖、血脂、血胆固醇的测定 4 4 氨基酸蛋白质的主要化学性质 3 9 维生素 A，B1 和 B2 的定性测定 4 5 蛋白质的两性反应及等电点测定 3 实验一、蛋白质浓度测定(一) Lowry 法 实验性质：验证性实验 实验内容：（1）制作蛋白质浓度-吸光度值标准曲线 （2）测定样品吸光度值，并在标准曲线上查找对应浓度 实验目的与要求：学习和掌握 Lowary 蛋白质测定法的原理和操作方法；熟练应用分光光度计，并学习绘制标准曲线 注意要点：（1）干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲剂，如：Tris·Good 缓冲剂，它们常常给予阳性呈色反应，各种硫醇存在容易得出错误结果；（2）乙试剂（Folin酚试剂）显色反应的最适条件是在碱性条件下，但是，在这种 pH 下，乙试剂是不稳定的，只有极短的时间有此反应，因此即使搅拌数秒钟也会使显色性降低；（3）标准曲线的制作应严格按照定量分析p 的要求进行；（4）使用分光光度计应做到两个到位和两个调零：比色皿架到位和拉杆到位；调节零位电位器指针到“0”以及旋转光亮调节器使光密度为“0”；溶液比色前必须充分混匀；同一组的所有测定必须在同一台分光光度计上进行。实验二、蛋白质浓度测定(二) Bradford 法 实验性质：验证性实验 实验内容：（1）制作蛋白质浓度-吸光度值（A595nm）标准曲线 （2）测定样品 A595nm，并在标准曲线上查找对应浓度 实验目的与要求：掌握考马斯亮蓝显色法测定蛋白质浓度的方法；熟练应用分光光度计，并学习绘制标准曲线 注意要点：（1）使用分光光度计应做到两个到位和两个调零：比色皿架到位和拉杆到位；调节零位电位器指针到“0”以及旋转光亮调节器使光密度为“0”；（2）实验中所有试剂的添加按照定量分析p 的要求严格操作；（3）溶液比色前必须充分混匀；（4）同一组的所有测定必须在同一台分光光度计上进行。实验三、蛋白质浓度测定(三) 紫外线吸收法 实验性质：验证性实验 实验内容：（1）制作蛋白质浓度-吸光度值（A280nm）标准曲线 （2）测定样品 A280nm，并在标准曲线上查找对应浓度 实验目的与要求：了解紫外线吸收法测定蛋白质含量的原理；了解紫外分光光度计的构造原理，掌握其使用方法。注意要点：（1）选用石英比色杯测定而不能选用玻璃比色杯；（2）标准曲线的制备严格按照定量分析p 的要求进行；（3）待测样品平行测定两次取平均值，相差太大的应舍去重做。实验四、氨基酸蛋白质的主要化学性质 实验性质：验证性实验 实验内容：（1）茚三酮反应 (2) 双缩脲反应 (3)黄蛋白反应 (4)蛋白质中硫的鉴定 (5)蛋白质的盐析作用 (6)有机溶剂、生物碱以及重金属离子的沉淀作用 实验目的与要求：用实验方法验证氨基酸、蛋白质的主要化学性质，增强感性认识 注意要点：（1）使用电炉加热时注意安全，远离易燃物，并防止烫伤；（2）滴加浓硝酸时注意安全。实验五、蛋白质的两性反应及等电点测定 实验性质：验证性实验 实验内容：（1）蛋白质的两性反应 （2）酪蛋白等电点的测定 实验目的与要求：了解蛋白质的两性性质，初步学会测定蛋白质等电点的方法 注意要点：（1）观察蛋白质的两性反应时应用酪蛋白的 NaOH 溶液；（2）酪蛋白等电点的测定使用的是酪蛋白的醋酸钠溶液，不能对调使用。实验六、葡聚糖凝胶色谱 实验性质：验证性实验 实验内容：应用 Sephade_G-50 分离兰色葡聚糖 20_ 和黄色铬酸钾 实验目的与要求：掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶色谱的原理和方法 注意要点：（1）装柱要求没有纹路、没有节痕、没有气泡、柱顶平整而均匀；（2）装柱时水和胶的比例适中，最好一次成功，如几次加胶应搅动柱表面，使凝胶颗粒悬浮后再加；（3）洗脱时时刻注意柱床表面洗脱剂不能流干。实验七、盘状聚丙烯胺凝胶电泳分离血清蛋白质 实验性质：综合性实验 实验内容：不连续盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 实验目的与要求：学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和操作方法，并应用于血清蛋白质的分离 注意要点：（1）聚丙烯酰胺在未聚合之前对人体有皮肤毒和神经毒性,注意安全,避免直接接触，如不慎溅到应迅速用流水冲洗；（2） 使用电泳仪和电泳槽时注意用电安全；（3）上下槽电泳缓冲液单独放置,切勿混合，否则再次使用缓冲液时会影响浓缩效应；（4）水封时要保证凝胶条的垂直，否则会影响胶面的平整性；（5）剥胶的方向一定是从浓缩胶端开始，否则有可能会伤及条带所在的分离胶。实验八、血糖、血脂、血胆固醇的测定 实验性质：综合性实验 实验内容：（1）血糖测定 （2）总胆固醇测定 （3）血脂测定 实验目的与要求：了解并掌握实验动物的采血、血清制备，掌握血糖、血脂、血胆固醇的定量测定方法 注意要点：（1）严格按照要求使用移液枪；（2）比色之前充分混合反应物。实验九、维生素 A、B 1 和 B 2 的定性测定 实验性质：验证性实验 实验内容：（1）维生素 A 的定性鉴定 （2）荧光法鉴定维生素 B 1 （3）维生素 B 2 的定性鉴定 实验目的与要求：了解并学会维生素 A，B 1 和 B 2 定性鉴定的原理和方法 注意要点：（1）本实验中所使用的试管洗净后应放在电炉上烘干，以避免水分对实验结果的影响；（2）SbCl 3 氯仿溶液对皮肤具有一定的腐蚀性，操作时应注意安全，不要用移液管移取，直接用滴管吸取即可，在清洗试管时也要避免将其溅到衣服以及皮肤上；（3）本实验为定性实验，可以每毫升 20 滴计。实验教材：1、 扬州大学生物化学教研室主编生物化学实验（自编教材）、20_2 年 2、 张龙翔主编生物化学实验方法和技术、人民教育出版社、1996 年 3、 李建武主编生物化学实验原理与方法、北京大学出版社、1994 年 4、 丛峰松主编生物化学实验-生物科学实验系列教材、20_5 年 5、 白玲、黄健主编基础生物化学实验、复旦大学出版社、20_4 年 第 4 页 共 4 页
