蛋白质的理化性质及其分离纯化ppt课件.ppt

篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统第三节第三节 蛋白质的理化性质蛋白质的理化性质 及其分离纯化及其分离纯化一、一、蛋白质的理化性质蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性电离（一）蛋白质的两性电离（二）蛋白质的胶体性质（二）蛋白质的胶体性质（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固（四）蛋白质的紫外吸收（四）蛋白质的紫外吸收（五）蛋白质的呈色反应（五）蛋白质的呈色反应篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（一）蛋白质的两性电离（一）蛋白质的两性电离蛋白质是由氨基酸构成的，其两端及蛋白质是由氨基酸构成的，其两端及侧链都含有可解离的酸性基团或碱性基团，侧链都含有可解离的酸性基团或碱性基团，因此在不同因此在不同pHpH的介质中，蛋白质的带电状的介质中，蛋白质的带电状态就不同。态就不同。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统蛋白质的等电点（蛋白质的等电点（pI）概念概念：当蛋白质溶液处于某一：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的的pH称为蛋白质的等电点。称为蛋白质的等电点。pI是蛋白质的特征性常数。是蛋白质的特征性常数。利用蛋白质两性电离的性质，可通过电利用蛋白质两性电离的性质，可通过电泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分离蛋白质。离蛋白质。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统 pH pI 带负电荷带负电荷 pH pI 带正电荷带正电荷 体内多数蛋白体内多数蛋白pI为为5.0左右左右，pH为为7.45 时时 多数蛋白带负电荷。多数蛋白带负电荷。如如pI 偏于碱性碱性蛋白质偏于碱性碱性蛋白质 鱼精蛋白鱼精蛋白 组蛋白组蛋白 如如pI 偏于酸性酸性蛋白质偏于酸性酸性蛋白质 胃蛋白酶胃蛋白酶 丝蛋白丝蛋白篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（二）蛋白质的胶体性质（二）蛋白质的胶体性质颗粒大小：在颗粒大小：在1 1100nm100nm之间。属胶体。因此溶于之间。属胶体。因此溶于水，成为亲水胶体。水，成为亲水胶体。稳定亲水胶体的因素：稳定亲水胶体的因素：水化膜水化膜 表面电荷表面电荷 不通透性：半透膜不通透性：半透膜 毛细血管壁毛细血管壁篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（三（三)蛋白质的变性、沉淀和凝固蛋白质的变性、沉淀和凝固1.变性（变性（denaturation）概念概念:在某些理化因素作用下，蛋白质在某些理化因素作用下，蛋白质分子的特定空间构象被破坏，从而导致分子的特定空间构象被破坏，从而导致理化性质的改变和生物活性的丧失。理化性质的改变和生物活性的丧失。变性本质：变性本质：二硫键和非共价键二硫键和非共价键的破坏引的破坏引起空间结构的改变，不涉及一级结构的起空间结构的改变，不涉及一级结构的改变。改变。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统核糖核酸酶核糖核酸酶篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统变性因素变性因素：物理因素：物理因素：加热、加压、超声波、加热、加压、超声波、紫外线紫外线化学因素化学因素：胍、脲、有机溶剂、：胍、脲、有机溶剂、强酸强碱、强酸强碱、SDS -巯基乙醇、巯基乙醇、重金属离子重金属离子 生物碱试剂生物碱试剂篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统 蛋白质变性后的理化和生物学性质改蛋白质变性后的理化和生物学性质改变变：溶解度溶解度 生物活性丧失及易被蛋白酶水解生物活性丧失及易被蛋白酶水解 粘度粘度 结晶能力消失、结晶能力消失、应用应用：消毒灭菌消毒灭菌 低温保存生物制剂低温保存生物制剂篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统复性复性(renaturation)：蛋白质的变：蛋白质的变性程度较轻，去除变性因素后，又性程度较轻，去除变性因素后，又恢复了原有的空间构象和生物活性。恢复了原有的空间构象和生物活性。不可逆变性不可逆变性2.沉淀沉淀(precipitation)蛋白质的沉淀：蛋白质的肽链相互蛋白质的沉淀：蛋白质的肽链相互聚集而从溶液中析出的现象。聚集而从溶液中析出的现象。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统+-+-蛋白质胶体颗粒的沉淀蛋白质胶体颗粒的沉淀（沉淀沉淀）（疏水胶体）（疏水胶体）（疏水胶体）（疏水胶体）篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统蛋白质的凝固作用（蛋白质的凝固作用（coagulation）蛋白质经强酸、强碱作用发生变性后，蛋白质经强酸、强碱作用发生变性后，仍能溶解于强酸或强碱溶液中，若将仍能溶解于强酸或强碱溶液中，若将 pH 调至调至pI，则变性蛋白质立即结成絮状的，则变性蛋白质立即结成絮状的不溶解物，此絮状物仍可溶解于强酸和不溶解物，此絮状物仍可溶解于强酸和强碱中。如再加热则絮状物可变成比较强碱中。如再加热则絮状物可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中，这种现象称为蛋白质的凝固作强碱中，这种现象称为蛋白质的凝固作用。用。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（四）蛋白质的紫外吸收（四）蛋白质的紫外吸收波长：波长：280nm引起紫外吸收的因素：主要是引起紫外吸收的因素：主要是色色氨酸和酪氨酸氨酸和酪氨酸(Trp,Tyr)的共轭的共轭双键。双键。可用于蛋白质的定量可用于蛋白质的定量篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（五）蛋白质的呈色反应（五）蛋白质的呈色反应茚三酮反应：肽和氨基酸的自由氨基茚三酮反应：肽和氨基酸的自由氨基与茚三酮生成蓝紫色化合物。与茚三酮生成蓝紫色化合物。双缩脲反应：蛋白质和肽类分子中的双缩脲反应：蛋白质和肽类分子中的肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈紫红色。紫红色。呈色反应可用于蛋白质的定性和定量。呈色反应可用于蛋白质的定性和定量。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统二、蛋白质的分离和纯化二、蛋白质的分离和纯化（一）丙酮沉淀及盐析（一）丙酮沉淀及盐析（二）电泳（二）电泳（三）透析（三）透析（四）层析（四）层析（五）分子筛（五）分子筛（六）超速离心（六）超速离心篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（一）丙酮沉淀及盐析（一）丙酮沉淀及盐析原理原理：破坏亲水胶体的两个稳定因素。：破坏亲水胶体的两个稳定因素。丙酮沉淀丙酮沉淀：0 044，1010倍于蛋白质体积倍于蛋白质体积 的丙酮，沉淀后立即分离。的丙酮，沉淀后立即分离。盐析盐析：将大量中性盐（如硫酸铵）加到：将大量中性盐（如硫酸铵）加到 蛋白质溶液中，破坏蛋白质在水蛋白质溶液中，破坏蛋白质在水 溶液中的稳定因素，而使之从溶溶液中的稳定因素，而使之从溶 液中沉淀析出的现象。液中沉淀析出的现象。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（二）电泳（二）电泳（electrophoresis）u蛋白质在电场中可向其所带电荷相反的蛋白质在电场中可向其所带电荷相反的方向移动，这种现象叫电泳。方向移动，这种现象叫电泳。u由于不同的蛋白质带电多少、分子量大由于不同的蛋白质带电多少、分子量大小及分子形状不同，因此在电场中泳动小及分子形状不同，因此在电场中泳动的速度就不同，从而可将蛋白质分离开的速度就不同，从而可将蛋白质分离开来。来。u应用：分离蛋白质和测分子量应用：分离蛋白质和测分子量篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（三）透析（三）透析（dialysis）u蛋白质是高分子化合物，不能透过半蛋白质是高分子化合物，不能透过半透膜。将蛋白溶液装入用半透膜制成透膜。将蛋白溶液装入用半透膜制成的透析袋中，可将蛋白质溶液中的小的透析袋中，可将蛋白质溶液中的小分子化合物除去，这种方法叫透析。分子化合物除去，这种方法叫透析。u如在袋外放吸水剂（如聚乙二醇）还如在袋外放吸水剂（如聚乙二醇）还可达到浓缩的目的。可达到浓缩的目的。u应用：除盐和浓缩应用：除盐和浓缩篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统超超 滤滤u利用超滤膜在压力下使大分子滞利用超滤膜在压力下使大分子滞留，而小分子及溶剂滤过的方法留，而小分子及溶剂滤过的方法叫超滤。叫超滤。u超滤法在蛋白质溶液除盐、浓缩超滤法在蛋白质溶液除盐、浓缩及分离纯化中有广泛的应用。及分离纯化中有广泛的应用。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（四）层析（四）层析（chromatography）u离子交换层析：根据蛋白质的电荷离子交换层析：根据蛋白质的电荷与层析载体（离子交换剂）电荷之与层析载体（离子交换剂）电荷之间的相互作用而达到分离目的。间的相互作用而达到分离目的。u应用：分离蛋白质应用：分离蛋白质篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统 阴离子阴离子交换树脂交换树脂篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（五）分子筛（五）分子筛u根据多孔载体对不同大小，形状的蛋根据多孔载体对不同大小，形状的蛋白分子的排阻能力不同而将各个组分白分子的排阻能力不同而将各个组分分开的一种层析，又称凝胶过滤层析。分开的一种层析，又称凝胶过滤层析。u 应用：分离蛋白质、除盐应用：分离蛋白质、除盐篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统（六）超速离心（六）超速离心（ultracentrifugation）不同蛋白质的密度与形态各不相不同蛋白质的密度与形态各不相同，在离心力场中沉降的速度也同，在离心力场中沉降的速度也不同，从而将其分离。不同，从而将其分离。蛋白质在离心场中的行为用沉降蛋白质在离心场中的行为用沉降系数（系数（S）表示。）表示。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统S与蛋白质大体上和分子量成正与蛋白质大体上和分子量成正比关系。比关系。S与蛋白质的密度和形状相关与蛋白质的密度和形状相关，如分子量相同，紧密颗粒的摩擦如分子量相同，紧密颗粒的摩擦系数小沉降快；而疏松颗粒的系数小沉降快；而疏松颗粒的摩擦系数大沉降慢。摩擦系数大沉降慢。应用应用：蛋白质的分离纯化和测分：蛋白质的分离纯化和测分子量。子量。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统多肽链多肽链AAAA序列分析序列分析改进的改进的Sanger法法1.1.分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成。分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成。2.2.测定多肽链的测定多肽链的N-N-端与端与C-C-端的氨基酸残基。端的氨基酸残基。3.3.把肽链水解成肽段，再分离纯化肽段。把肽链水解成肽段，再分离纯化肽段。4.4.测各肽段的氨基酸排列顺序。测各肽段的氨基酸排列顺序。5.5.经过组合排列对比，得出完整肽链中氨经过组合排列对比，得出完整肽链中氨基酸顺序。基酸顺序。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统水解肽链的方法及特征水解肽链的方法及特征裂解剂裂解剂裂解位点裂解位点胰蛋白酶胰蛋白酶Lys、Arg（C）胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶Phe、Tyr、Trp（C）弹性蛋白酶弹性蛋白酶Ala、Gly、Ser、Val（C）胃蛋白酶胃蛋白酶Phe、Trp、Tyr（N）溴化氰溴化氰Met（C）羟胺羟胺AsnGly篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统通过核酸推演的方法通过核酸推演的方法分离编码蛋白质的基因分离编码蛋白质的基因测测DNADNA序列序列排列出排列出mRNAmRNA的序列的序列按照三联体密码推演出氨基酸的序列按照三联体密码推演出氨基酸的序列篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统本次课重点本次课重点u蛋白质的三、四级结构蛋白质的三、四级结构u蛋白质的蛋白质的pIu维持蛋白质胶体稳定的因素维持蛋白质胶体稳定的因素u蛋白质的变性蛋白质的变性u蛋白质的紫外吸收蛋白质的紫外吸收u蛋白质分离纯化的方法及基本原理蛋白质分离纯化的方法及基本原理篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统复复 习习 题题1.1.名词解释：肽单元名词解释：肽单元 模序模序 结构域结构域 蛋白质的一蛋白质的一 、二、三、四级结构、二、三、四级结构2.2.蛋白质的基本组成单位是什么？有多少蛋白质的基本组成单位是什么？有多少种？按侧链的结构和功能不同可分为几种？按侧链的结构和功能不同可分为几类？各包括哪些氨基酸？类？各包括哪些氨基酸？3.3.蛋白质的二级结构有几种？各有何特征，蛋白质的二级结构有几种？各有何特征，由什么化学键维持？由什么化学键维持？