血型交叉配血课件ppt.ppt

血型与交叉配血血型与交叉配血1.主要内容：w红细胞血型概述胞血型概述w抗体抗体检查和和鉴定定w交叉配血方法交叉配血方法w日常工作中日常工作中问题对策策2.血型的血型的发现w19001900年，奥地年，奥地利科学家利科学家兰德德斯坦斯坦纳红细胞胞血清血清凝集凝集不凝集不凝集遇到遇到3.红细胞抗原胞抗原w血型系血型系统（Blood group systemsBlood group systems）29 24529 245w血型集合血型集合（Blood group collectionsBlood group collections）6 126 12w血型系列血型系列（seriesseries）：）：低低频率系列（率系列（700 series700 series，low-incidence low-incidence antigens)33 antigens)33 高高频率系列率系列 (901 serise,high-incidence(901 serise,high-incidence antigens)12 antigens)124.5.Rh血型系统wDuDu比正常比正常D D阳性阳性细胞抗原弱，但一旦胞抗原弱，但一旦输给RhRh阴性的受血者后，自然有免疫阴性的受血者后，自然有免疫产生抗生抗D D的可的可能。同能。同时DuDu型人者接受型人者接受RhRh阳性的阳性的细胞后，也胞后，也有可能有可能产生抗生抗D D抗体。抗体。w作作为供血者，供血者，DuDu型型归类为RhRh阳性，阳性，作作为受血者受血者DuDu型型归类为RhRh阴性者。阴性者。6.红细胞抗体胞抗体(1)(1)w预期抗体期抗体：若已知：若已知红细胞胞ABOABO血型，按血型，按 LandsteinersLandsteiners法法则可可预知的知的ABOABO血型血型 抗体，即抗抗体，即抗-A-A和抗和抗-B-B。预期抗体也叫做期抗体也叫做规则抗体抗体w意外抗体意外抗体：抗：抗-A-A或抗或抗-B-B以外的抗体。在以外的抗体。在ABOABO亚型型 中，中，变异的抗异的抗-A-A1 1或某种抗或某种抗-B-B等抗体，等抗体，也称也称为意外抗体。意外抗体。意外抗体意外抗体过去也叫做不去也叫做不规则抗体抗体7.红细胞抗体胞抗体(2)(2)w天然抗体天然抗体：没有可察：没有可察觉的抗原刺激，而机体的抗原刺激，而机体对抗原免抗原免疫疫应答的答的产物。天然抗体多物。天然抗体多为IgMIgM抗体，能与含有相抗体，能与含有相应抗原的抗原的红细胞胞结合，在合，在盐水介水介质中出中出现肉眼可肉眼可见的凝集的凝集反反应，所以也叫，所以也叫盐水抗体。水抗体。IgMIgM抗体的最适反抗体的最适反应温度温度为0-250-25。w免疫抗体免疫抗体：抗原刺激机体而：抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多生的。免疫抗体多为IgGIgG抗体，在抗体，在盐水介水介质中只能致敏含有相中只能致敏含有相应抗原的抗原的红细胞，胞，但不但不产生凝集，需要采用抗球蛋白搭生凝集，需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理理细胞或胞或聚凝胺介聚凝胺介导等方法，才能等方法，才能产生凝集反生凝集反应。IgGIgG抗体的最抗体的最适反适反应温度温度为3737。8.免疫血液学的免疫血液学的传统方法方法w凝集凝集实验和溶血和溶血实验w玻片法玻片法/试管法管法/微孔板法微孔板法w抗人球抗人球实验9.在抗原抗体反在抗原抗体反应中的去离子和低离子中的去离子和低离子盐水凝集法：水凝集法：例如，例如，ABOABO血型血型鉴定定试验 包括玻片法、包括玻片法、试管管 法和微孔法法和微孔法但灵敏度相但灵敏度相对较低，只在低，只在一些基一些基层医院血医院血库使用使用低离子低离子强度度盐水法：水法：通通过降低介降低介质溶液离子溶液离子强度，减少度，减少红细胞膜外胞膜外围的的离子云，促离子云，促进红细胞凝集，胞凝集，因而其灵敏度有所提高。因而其灵敏度有所提高。10.聚凝胺聚凝胺试验w原理原理：聚凝胺是一种高价阳离子季胺聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，多聚物，溶解后能溶解后能产生很多正生很多正电荷，可以中和荷，可以中和红细胞表胞表面的面的负电荷，使荷，使红细胞之胞之间距离减小，能引起距离减小，能引起正常正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗体致敏的体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集不可逆；胞，加入中和液后，凝集不可逆；无抗体致敏的无抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集解胞，加入中和液后，凝集解散。散。w程序程序：按：按试剂盒盒说明明书操作。操作。11.聚凝胺凝集法：聚凝胺凝集法：通通过多聚季氨多聚季氨盐溶液提供大量正溶液提供大量正电荷来中荷来中和和红细胞表面胞表面负电荷，减少荷，减少红细胞胞间的排斥，的排斥，促促进红细胞凝集，其灵敏度有胞凝集，其灵敏度有较大提高。此方大提高。此方法目前在国内使用法目前在国内使用较多。（多。（Rh,DuffyRh,Duffy）12.抗人球抗人球试验-检测 IgGIgG抗人球抗人球试验：在在盐水凝集法或低离水凝集法或低离子子强度度盐水法的基水法的基础上，上，加入抗人球蛋白抗体，通加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异抗人球蛋白抗体的特异性性桥连作用，促作用，促进红细胞胞的凝集。可分的凝集。可分为直接和直接和间接抗人球接抗人球试验。K,k,Fya,K,k,Fya,Fyb,JKa,JKb,Kpa,Kpb,Fyb,JKa,JKb,Kpa,Kpb,S,s,Lua,Lub S,s,Lua,Lub13.间接抗人球蛋白接抗人球蛋白试验(IAT)(IAT)w经典典IATIATwLISS-IAT:LISS-IAT:试管法管法 卡卡wPEG-IATPEG-IATw酶IATIATw聚凝胺聚凝胺IATIAT14.经典典IATIAT 程序程序：2 2滴血清、滴血清、1 1滴滴2-5%2-5%的的红细胞，胞，3737孵育孵育45-6045-60分分钟，生理，生理盐水洗水洗涤3 3遍遍后后倾倒上清液，控干，加倒上清液，控干，加2 2滴抗人球蛋白滴抗人球蛋白试剂，离心后判，离心后判读结果。用抗体致敏的果。用抗体致敏的红细胞胞检测试验结果的正确性果的正确性。15.LISS-IATw原理原理：通通过降低降低红细胞周胞周围的离子氛，使抗体易于接的离子氛，使抗体易于接近抗原，促近抗原，促进抗体在更短的抗体在更短的时间内致敏内致敏红细胞，再使用胞，再使用抗人球蛋白抗人球蛋白试剂，使被致敏的，使被致敏的红细胞胞产生凝集生凝集w程序程序：2 2滴血清、滴血清、1 1滴滴2-5%2-5%的的红细胞，加胞，加2-42-4滴滴LISSLISS液后液后混匀，混匀，3737孵育孵育1515分分钟，离心，离心观察察细胞的凝集情况，用胞的凝集情况，用生理生理盐水洗水洗涤3 3遍后遍后倾倒上清液，控干，加倒上清液，控干，加2 2滴抗人球蛋滴抗人球蛋白白试剂，离心后判，离心后判读结果。果。16.PEG-IATw原理原理：PEG（聚乙二醇）是一种水溶性的中性多聚体，当含有抗原与相应抗体的溶液中加入PEG时，由于空间排斥效应作用，使溶液中的抗体饱和度提高，加速溶液中的抗原-抗体复合物的形成。w程序程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加4滴PEG溶液后混匀，37孵育15分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。17.微柱凝胶技微柱凝胶技术(卡卡)w原理原理：微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶颗粒具有分子筛作用，离心后，不凝集的红细胞通过全程进入微管底部，而凝集的红细胞则悬浮停留在颗粒中。w程序程序：按厂家说明操作18.反反应原理原理 微柱凝胶免疫反微柱凝胶免疫反应的本的本质是是红细胞凝集胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝，也可称之微柱凝胶血凝试验（Microcolumn Gel Heamagglutination AssayMicrocolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHAMGHA）在微柱凝胶）在微柱凝胶管中，管中，红细胞和相胞和相应抗体抗体结合后，形成合后，形成红细胞凝集胞凝集团块。在一定离心力下，。在一定离心力下，该凝集凝集团块位于胶表面或胶中；而位于胶表面或胶中；而红细胞未和相胞未和相应抗体抗体结合，仍合，仍为分散的分散的红细胞，在同胞，在同样的离心力下，的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。胞沉降到微柱管尖底部。19.4+4+红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面胞复合物（凝集）位于凝胶表面3+3+大部分大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部2+2+大部分大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部1+1+红细胞复合物位于凝胶中下部胞复合物位于凝胶中下部 与同一卡中阴性管与同一卡中阴性管结果果对照，如与阴性照，如与阴性结果有差果有差别，即，即为 红细胞完全沉胞完全沉积在凝胶管尖底部在凝胶管尖底部完全溶血完全溶血 凝胶和液体无凝集或未凝集的凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出胞，液体出现透明清澈透明清澈红色色不完全溶血不完全溶血 残留残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈透明清澈红色色混合凝集混合凝集 红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部反反应强度度现象及象及说明明 完全完全 不完全不完全 混合凝集混合凝集20.抗人球蛋白抗人球蛋白试验(Coombs(Coombs试验)w直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白试验(DAT)(DAT)检测红细胞是否在体内被抗体或补体致敏,用于检测自身免疫溶血性贫血、药物引起的溶血、新生儿溶血病、溶血性输血反应w间接抗人球蛋白接抗人球蛋白试验(IAT)(IAT)在体外抗体致敏红细胞,用于抗体筛选和鉴定、交叉配血、血型鉴定21.酶试验w原理原理：蛋白水解：蛋白水解酶可将可将红细胞表面的多胞表面的多肽链打断，使多打断，使多肽链带负电荷的唾液酸也一起离开荷的唾液酸也一起离开红细胞表面，减少了胞表面，减少了红细胞之胞之间的排斥力，的排斥力，缩短了短了红细胞之胞之间的距离，容易的距离，容易产生凝集反生凝集反应w程序程序：2 2滴血清、滴血清、1 1滴滴2-5%2-5%红细胞，加入胞，加入2 2滴滴酶，3737孵孵育育1515分分钟，离心看，离心看结果。果。注：注：酶会破坏一些抗原会破坏一些抗原结构，如构，如M M、N N、FyFya a、FyFyb b 等等22.影响影响输血效果的免疫血清学血效果的免疫血清学问题w速速发型型输血后溶血反血后溶血反应血管内溶血血管内溶血主要原因主要原因:ABOABO血型不和血型不和w迟发型型输血后溶血反血后溶血反应 血管外溶血血管外溶血主要原因主要原因:针对红细胞抗原的同种抗体胞抗原的同种抗体 血型抗原的同种免疫血型抗原的同种免疫红细胞抗原免疫胞抗原免疫强弱依次弱依次为RhRh（DE C c eDE C c e）、KellKell、DuffyDuffy、Kidd Kidd 23.传统方法的局限性方法的局限性w不利于不利于标准化管理准化管理w重复性重复性较差差w要求操作者的要求操作者的经验丰富丰富w难以以实现自自动化操作化操作24.凝胶凝集试验 25.凝胶凝集试验-原理(1)w通通过离心使离心使红细胞被胞被挤过装有装有过滤介介质的小柱的小柱w凝集的凝集的红细胞被阻胞被阻挡在小柱中在小柱中过滤介介质的的顶部或部或中央，中央，而未凝集的而未凝集的红细胞胞则到达小柱的底部到达小柱的底部w血型或血型或AHGAHG试剂被加入到被加入到过滤介介质w由于由于红细胞和血清成分以不同的速度通胞和血清成分以不同的速度通过小柱小柱（重力加速度不同），从而消除了血清中未（重力加速度不同），从而消除了血清中未结合合的球蛋白中和的球蛋白中和AHGAHG的可能性，因而，在抗人球的可能性，因而，在抗人球试验中，不用清洗中，不用清洗红细胞胞26.凝胶凝集试验 27.凝胶抗人球试验新技新技术卡式卡式检测法：法：19861986年法国年法国Dr.Yves LappierreDr.Yves Lappierre发明了用于分离凝明了用于分离凝集集红细胞的凝胶卡式胞的凝胶卡式检测法。法。经过不断改不断改进和和临床的床的大量大量应用，目前在用，目前在发达国家已作达国家已作为临床常床常规的的红细胞胞血型血清学血型血清学检测新技新技术。1994 1994年凝胶卡式年凝胶卡式检测法用于法用于临床常床常规的的红细胞血胞血型血清学型血清学检测，已得到美国，已得到美国FDAFDA权威机构的威机构的认证。28.凝胶酶试验酶法：法：利用木瓜利用木瓜酶或菠或菠萝酶来破坏来破坏红细胞表面的唾液酸，胞表面的唾液酸，使使细胞膜表面失去胞膜表面失去电荷，减少荷，减少红细胞胞间的排斥；同的排斥；同时暴暴露某些露某些隐蔽抗原，增蔽抗原，增强凝集反凝集反应。主要用于一些不完全。主要用于一些不完全抗体的抗体的检测。29.凝胶凝集试验-原理(2)w标准化的孵育准化的孵育时间w标准化的离心准化的离心时间w标准化的判准化的判读-消除主消除主观因素因素对弱反弱反应结果的判果的判读w结果果稳定保存定保存30.凝胶凝胶试验应用于血型血清学用于血型血清学w血型血型实验室中的一次革命室中的一次革命w在全世界在全世界许多多发达国家已被公达国家已被公认为是常是常规免疫血液学免疫血液学实验的的“金金标准准”。31.19901990年，卡式年，卡式检测法的法的发明人明人Dr.Yves LapierreDr.Yves Lapierre等用等用低离子低离子强度度盐水法（水法（试管法）、聚凝胺管法）、聚凝胺试验（试管法）和卡管法）和卡式式检测法（凝胶）研究了法（凝胶）研究了400400例已知抗体的例已知抗体的样本。血清与本。血清与细胞的比例是按照胞的比例是按照试管法管法标准配置。准配置。结果果为：卡式卡式检测法法检出出359359例（例（检出率出率为90%90%）低离子低离子强度度盐水法水法检出出243243例（例（检出率出率为61%61%）聚凝胺聚凝胺试验检出出301301例（例（检出率出率为75%75%）凝胶凝胶试验应用于血型血清学用于血型血清学32.THANK YOUSUCCESS2023/1/133.结果果判判断断模模式式凝胶凝胶试验应用于血型血清学用于血型血清学34.临床输血技术规范w 明确明确规定部分病人定部分病人应做做“抗体抗体筛选”检测，第四章第，第四章第1717条：条：“凡遇以下情况凡遇以下情况必必须按按全国全国临床床检验操作操作规程程有关有关规定做定做抗体抗体筛选试验：1 1、交叉配血不合的；、交叉配血不合的；2 2、对有有输血史、妊娠史或短期内需接受多次血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。血者。35.为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查 1 1、目前已知、目前已知红细胞有胞有2626个抗原系个抗原系统（确（确认2121个，如个，如ABOABO、RhRh、MNMN、LWLW、MNSMNS、JKJK等）等），500500多种抗原（确多种抗原（确认200200多种）。多种）。红细胞胞抗原的多抗原的多样性决定了抗体的多性决定了抗体的多样性，性，检测抗抗A A、抗、抗B B、抗、抗D D（ABOABO血型、血型、RhRh血型）可确血型）可确保保绝大多数病人的大多数病人的输血安全，但仍不能避血安全，但仍不能避免因血型不合（免因血型不合（ABOABO、RhRh血型以外）而引血型以外）而引发的溶血。的溶血。36.2 2、临床有的病人出床有的病人出现慢性（慢性（迟缓性）溶血反性）溶血反应，易忽，易忽视或引不起或引不起临床医床医师重重视。（理（理论上上讲，成年人每，成年人每输1U1U的的浓缩红细胞，在不胞，在不丢失、失、不被破坏（溶血）的前提下，不被破坏（溶血）的前提下，应能提升能提升Hb5-10g/L Hb5-10g/L(0.5-1g/dl),(0.5-1g/dl),保持保持15-3015-30天。如果天。如果输3-4U RBC3-4U RBC，病人，病人HbHb上升不到上升不到10g/L10g/L，或几天后（，或几天后（1 1周内）周内）HbHb仍旧下降到原来仍旧下降到原来水平，甚至更低。水平，甚至更低。这种情况，就要考种情况，就要考虑是否有慢性溶血是否有慢性溶血反反应存在。）存在。）3 3、有利于早期、有利于早期发现和确和确认具有具有临床意床意义的抗体，的抗体，获得充得充足的足的时间来来选择相配合的血，避免由于相配合的血，避免由于寻找不到相合的找不到相合的血液而造成患者病情的延血液而造成患者病情的延误。37.抗体筛选检查一、什么叫一、什么叫“抗体抗体筛选”检查 1 1、不、不规则抗体的含抗体的含义：通常把抗：通常把抗A A、抗、抗B B以外以外的所有的所有红细胞血型抗体称胞血型抗体称为不不规则抗体。如抗抗体。如抗D D、抗抗N N、抗、抗M M、jk-jk-抗体。抗体。2 2、“抗体抗体筛选”的含的含义：用具：用具备有有临床意床意义的血型抗原的的血型抗原的O O型型红细胞，胞，检测病人血清（含多病人血清（含多种抗体）；如果出种抗体）；如果出现聚集聚集现象，象，则提示病人有提示病人有不不规则抗体存在，可判抗体存在，可判为“抗体抗体筛选”阳性。阳性。38.抗体筛选技术要求w尽可能多的尽可能多的检测出有出有临床意床意义的抗体。的抗体。w尽可能少的尽可能少的检测出无出无临床意床意义的抗体。的抗体。w尽可能快的完成抗体尽可能快的完成抗体检测39.方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况w盐水法：可以用于水法：可以用于检测干干扰ABOABO定型的定型的盐水反水反应活性抗体，如：活性抗体，如：MNMN、P P血型抗体。但此方法会血型抗体。但此方法会检查出无出无临床意床意义的抗体，如冷凝集素抗的抗体，如冷凝集素抗I I及抗及抗IHIH等，而且会漏等，而且会漏检IgGIgG性性质的抗体。的抗体。w低离子聚凝胺法（低离子聚凝胺法（LIP-IATLIP-IAT）：所需）：所需试验时间少少（3 35 5分分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无无法排除无临床意床意义抗体的干抗体的干扰。w间接抗人球方法：是很灵敏且有效的接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体抗体的方法，同的方法，同时此方法可以有效的避免无此方法可以有效的避免无临床意床意义抗体的干抗体的干扰。缺点：耗。缺点：耗时间长，步，步骤多。多。40.抗体特异性鉴定w使用使用谱细胞确定抗体的特异性，胞确定抗体的特异性，谱细胞一胞一般由般由8-168-16种含有不同抗原的种含有不同抗原的O O型型红细胞配胞配套套组成，根据成，根据谱细胞的反胞的反应格局一般可以格局一般可以鉴定常定常见的抗体。的抗体。41.检测新生儿溶血的“三项试验”直抗直抗试验：即用直接抗球蛋白：即用直接抗球蛋白试验的方法，的方法，检测新生儿新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。胞上是否存在免疫抗体。游离游离试验：是：是检测新生儿血清中的血型抗体。新生儿血清中的血型抗体。释放放试验：和直抗：和直抗试验相同，也是相同，也是检测新生儿新生儿红细胞上的致敏的血型抗体，只是方法不同。胞上的致敏的血型抗体，只是方法不同。42.交叉配血交叉配血试验的涵的涵义 w目的：是目的：是检查供、受血者血液中是否含有不相合供、受血者血液中是否含有不相合的抗原的抗原 和抗体成分的和抗体成分的试验。发现ABOABO血型血型鉴定的定的错误：如将：如将O O型受血者型受血者误定定为A A型，当与型，当与A A型型献血者交叉配血献血者交叉配血时，病人血清与献血者，病人血清与献血者红细胞即可出胞即可出现凝集，从而凝集，从而避免避免严重的溶血性重的溶血性输血反血反应。发现不不规则凝集素：如含抗凝集素：如含抗A1A1不不规则凝集素的凝集素的A2A2型血清，与型血清，与A1A1型型献血者献血者红细胞配血胞配血时，可出，可出现凝集，凝集，这种不种不规则凝集素一般凝集素一般为冷凝冷凝集素，如效价不高，影响不大。但若集素，如效价不高，影响不大。但若为免疫性抗体，免疫性抗体，3737条件下效条件下效价价较高，就必高，就必须选用用亚型相同的血液，否型相同的血液，否则可可产生溶血性生溶血性输血血应。发现ABOABO血型以外的其他抗体：如抗血型以外的其他抗体：如抗P1P1，抗，抗H H等天然抗体和抗等天然抗体和抗D D等免等免疫性抗体，疫性抗体，虽然然输入的血液入的血液ABOABO血型相同，但血型相同，但ABOABO血型以外的其他抗血型以外的其他抗体存在体存在时，同，同样可能引起可能引起严重的溶血性重的溶血性输血反血反应。特。特别是是现在在许多多化化验室因室因为条件的限制不可能条件的限制不可能对ABOABO及及RHRH（D D）以外的血型全部）以外的血型全部进行行鉴定，全靠交叉配血定，全靠交叉配血发现血型的不同和血型的不同和ABOABO、RHRH（D D）血型以外的其他抗）血型以外的其他抗体的存在。体的存在。43.程序程序 n查询受血者既往血型受血者既往血型检查纪录；n对受血者血受血者血样作作ABOABO、RHRH血型血型鉴定及血型抗体定及血型抗体筛选、抗体抗体鉴定；定；n选择预先先进行血型行血型检查的合格供血者作交叉配血的合格供血者作交叉配血试验；wA.A.主主侧配血：受血者血清配血：受血者血清 +供血者供血者红细胞胞检测对供供者者红细胞起反胞起反应的抗体；的抗体；wB.B.次次侧配血：受血者配血：受血者红细胞胞 +供血者血清供血者血清检测对受受者者红细胞起反胞起反应的抗体；的抗体；wC.C.自身自身对照：受血者照：受血者红细胞胞 +受血者血清受血者血清显示自身示自身抗体、直接抗体、直接Coomb,sCoomb,s阳性阳性红细胞胞缗钱状凝集（假阳性）以状凝集（假阳性）以及在低温下的冷凝集。及在低温下的冷凝集。44.结果果 w交叉配血交叉配血试验的任何步的任何步骤中均不中均不产生生溶血溶血和凝集和凝集的的结果，供者的血液成分才可果，供者的血液成分才可发给患者患者输注。注。红细胞抗原与相胞抗原与相对应的免疫抗的免疫抗体相遇，在有体相遇，在有补体存在就可体存在就可发生溶血。溶生溶血。溶血反血反应与凝集反与凝集反应在交叉配血上意在交叉配血上意义相同，相同，都是抗原抗体反都是抗原抗体反应。溶血的溶血的标本不本不应用作配血。用作配血。45.交叉配血中交叉配血中责任性任性错误：w1.1.无无论是是对病人病人还是工作都要有高度的工作是工作都要有高度的工作责任感，并任感，并严格格按照按照规程操作。程操作。w2.2.各种器材要干各种器材要干净，干燥（或用等渗，干燥（或用等渗盐水洗水洗涤），防止溶血。），防止溶血。w3.3.配血、配血、发血和登血和登记时要仔要仔细核核对病人的姓名、病房、床号、病人的姓名、病房、床号、住院号、血型。不要加住院号、血型。不要加错血清、血清、红细胞和胞和试剂，防止由于滴管、，防止由于滴管、吸管、吸管、试管的紊乱，而造成被管的紊乱，而造成被检者之者之间、血清和、血清和红细胞之胞之间的的相互相互污染。染。w4.4.病人和献血者的血病人和献血者的血标本必本必须符合符合标准，不要准，不要长期放在室温期放在室温下，以免下，以免污染和滋生染和滋生细菌。等渗菌。等渗盐水必水必须等渗、新等渗、新鲜、无微生、无微生物滋生。物滋生。w5 5 观察察结果要仔果要仔细，微弱凝集或肉眼，微弱凝集或肉眼观察未凝集的察未凝集的标本，要本，要用用显微微镜观察。注意特异性凝集与察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、性血液凝固、缗钱状凝状凝集形成的区集形成的区别。46.w6.6.观察察结果，要遵守果，要遵守规定定时间，冬季要注意保温，避，冬季要注意保温，避免冷凝集素干免冷凝集素干扰结果。果。w7.7.注意病人的注意病人的输血史，有无不良反血史，有无不良反应，女病人要注意，女病人要注意妊娠及分娩史。妊娠及分娩史。对反复反复输血的病人，每取一次配血血的病人，每取一次配血标本，本，不要不要连用三天以上，更不能供反复多次配血用。因用三天以上，更不能供反复多次配血用。因为任任何一次何一次输血都有血都有产生抗体的可能，因此前次生抗体的可能，因此前次输血使用血使用过的配血的配血标本不能代表病人再次本不能代表病人再次输血血时体内的情况，所以，体内的情况，所以，超超过三天，三天，应另取病人另取病人标本配血。本配血。w8.8.登登记结果和填果和填发报告要仔告要仔细正正规，查对无无误后，才后，才能能发出出报告。特告。特别要注意不要在配血要注意不要在配血结果尚未出来果尚未出来时就就已填好已填好报告，防止很忙告，防止很忙时将配血将配血试管管遗忘在离心机内。忘在离心机内。w9.9.配血后配血后应将配血将配血标本置冰箱保存，保留至血液本置冰箱保存，保留至血液输完完至少七天后，以至少七天后，以备复复查。47.假阳性及其控制假阳性及其控制对策：策：1.1.红细胞胞缗钱状凝集：状凝集：红细胞相互重叠，胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的接成串，象一串重叠的钱币，又称，又称串串钱状凝集。可由以下原因引起。患者状凝集。可由以下原因引起。患者纤维蛋白原升高蛋白原升高或异常蛋白血症（多或异常蛋白血症（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症），新性骨髓瘤、巨球蛋白血症），新生儿生儿脐带血中含有血中含有华顿胶，胶，实验室中温度室中温度过高、作用高、作用时间太太长致水分蒸致水分蒸发、血清、血清浓缩。红细胞胞缗钱状凝集不是状凝集不是抗原抗体反抗原抗体反应，不是配血禁忌，如献血者正常，明确是，不是配血禁忌，如献血者正常，明确是假凝集后，可以假凝集后，可以输血。血。控制控制对策：策：多加生理多加生理盐水可稀水可稀释血液使血液使缗钱状状红细胞散开胞散开用高倍用高倍显微微镜仔仔细观察察红细胞凝集胞凝集块的形的形态（红细胞未被破坏）胞未被破坏）察看病人察看病人诊断断用洗用洗涤后的后的红细胞配血。胞配血。48.2 2.冷凝集冷凝集：在：在较低温度下出低温度下出现凝集而温度凝集而温度2525时凝集即可消失的凝集称凝集即可消失的凝集称为冷凝集。多数正常人的血清在冷凝集。多数正常人的血清在0044时能凝集本人的能凝集本人的红细胞，所以又称自身凝集，胞，所以又称自身凝集，这种冷凝集素的效价一般不超种冷凝集素的效价一般不超过1 1：1616，这种凝集是可种凝集是可逆的。但一些自身免疫性疾病、非典型性肺炎、病毒性逆的。但一些自身免疫性疾病、非典型性肺炎、病毒性肝炎、肝硬化、多肝炎、肝硬化、多发性骨髓瘤、性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等疾病患者性淋巴瘤等疾病患者的血清中，可以出的血清中，可以出现高效价的冷凝集素且能与本人及其高效价的冷凝集素且能与本人及其它各型人的它各型人的红细胞胞发生凝集。注意配血生凝集。注意配血报告要注明有冷告要注明有冷凝集凝集现象。象。控制控制对策：策：标本在血清没有完全析出之前不要放入本在血清没有完全析出之前不要放入冰箱冰箱可将配血可将配血结果置果置3737水浴箱温浴之后看，并反复水浴箱温浴之后看，并反复观几次几次将将红细胞用胞用3737生理生理盐水洗水洗涤或用或用2Me2Me处理理血清以消除冷凝集素之后血清以消除冷凝集素之后进行配血行配血可用自身或兔可用自身或兔红细胞反复吸收放散的方法除去血清中的冷凝集素。胞反复吸收放散的方法除去血清中的冷凝集素。49.3.3.自身免疫性温型抗体：自身免疫性温型抗体：自身免疫性溶血性自身免疫性溶血性贫血的病人血清中可有温型自身抗体。血的病人血清中可有温型自身抗体。其特点是反其特点是反应温度在温度在3737比室温作用比室温作用强或相同，能凝集或相同，能凝集自身和其他各型自身和其他各型红细胞，病人胞，病人红细上吸附了上吸附了这种抗体，种抗体，在自身或他人血清中，均可出在自身或他人血清中，均可出现凝集。凝集。控制控制对策：可用策：可用递增温度（由增温度（由22223737 45 45）生理生理盐水洗水洗涤红细胞后再胞后再进行配血。如果最后仍有凝集，行配血。如果最后仍有凝集，可可选用凝集用凝集较弱的血与患者弱的血与患者输注。注。缓慢慢输注，密切注，密切观察，察，一旦病人出一旦病人出现反反应应立即停止立即停止输注。此注。此类病人万不得已病人万不得已不要不要输血血,可用其他可用其他办法替代法替代.50.4.4.全凝集与多凝集：全凝集与多凝集：全凝集：人的全凝集：人的红细胞都含有胞都含有H H抗原，如果抗原，如果标本被棒状杆菌本被棒状杆菌污染，血清染，血清中可出中可出现H H抗体，抗体，这种抗体与含有种抗体与含有H H抗原的各型抗原的各型红细胞胞发生凝集，生凝集，这种种血清称血清称为全凝集血清。取多个已知全凝集血清。取多个已知O O型血人的型血人的红细胞与此胞与此怀疑的血清作疑的血清作试验，如都能凝集，即可，如都能凝集，即可证明明为全凝集血清。全凝集血清。多凝集：人的多凝集：人的红细胞上含有一种无活性的胞上含有一种无活性的T T隐性受体，在性受体，在实验室中某室中某些些细菌或菌或细菌菌产生的生的酶污染染红细胞后可以使胞后可以使T T受体致活，而正常人血清受体致活，而正常人血清中多数都含有抗中多数都含有抗T T抗体，因此抗体，因此这种被活化了的种被活化了的T T受体的受体的红细胞能被各型胞能被各型人的人的红细胞凝集（新生儿的血清除外）。胞凝集（新生儿的血清除外）。这种种现象称又称象称又称为T T凝集凝集现象。象。T T凝集凝集现象也可偶象也可偶见于某些有明于某些有明显细菌感染的病人且多菌感染的病人且多为O O型病人，其型病人，其次次为A A和和B B型，型，ABAB型病人出型病人出现T T凝集凝集现象的象的则未未见报道。病人的道。病人的T T凝集凝集现象具有以下特点：象具有以下特点：病人的病人的红细胞不被本人的胞不被本人的红细胞凝集，冷凝集的胞凝集，冷凝集的病人血清能凝集自己的病人血清能凝集自己的红细胞；胞；T T凝集在室温凝集在室温较强，3737较弱或消失，弱或消失，冷凝集在冷凝集在3737消失，在消失，在44最最强；病人有感染史，多凝集的表病人有感染史，多凝集的表现未未暂时性的，一般在病愈后即自行消失；性的，一般在病愈后即自行消失；血血库储存的血液制品出存的血液制品出现全凝全凝时，细菌培养可菌培养可为阳性；阳性；多凝集的凝多凝集的凝块较大，但游离大，但游离红细胞胞较多。多。控制控制对策：策：试管、滴管等管、滴管等应经常保持清常保持清洁，不被，不被细菌菌污染染如如怀疑疑为全凝集或多凝集，首先用多份全凝集或多凝集，首先用多份ABAB型血清加以型血清加以证明。明。注意注意标本的本的保存，新保存，新鲜不被不被污染。染。51.5.5.类B B抗原形成抗原形成(即即获得性得性B B抗原抗原)：某些某些A A型老年癌症患者和型老年癌症患者和肠道革道革兰氏阴性杆菌（如大氏阴性杆菌（如大肠杆菌杆菌O86O86、普通普通变形杆菌等）感染的病人，其形杆菌等）感染的病人，其红细胞除能被抗胞除能被抗A A血清凝集外，血清凝集外，也能与抗也能与抗B B血清血清发生凝集。血清中仍含有正常的抗生凝集。血清中仍含有正常的抗B B，好像，好像红细胞胞获得了一种与得了一种与B B类似的抗原称似的抗原称为类B B抗原。此抗原。此类病人可能病人可能导致血型致血型鉴定定错误,所以必所以必须要有正反定型才能判定血型要有正反定型才能判定血型.交叉配血、交叉配血、输血血时一定要一定要谨慎。有人慎。有人认为有些有些细菌的菌的酶含有乙含有乙酰基基酶能使特异性能使特异性A A物物质末端的末端的NN乙乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖。氨基半乳糖水解成半乳糖。类B B抗原有以下抗原有以下特点：特点：类B B与抗与抗B B的反的反应与正常与正常B B抗原与抗抗原与抗B B的反的反应弱，一般无溶弱，一般无溶血血现象。象。类B B是是获得性的，不符合得性的，不符合遗传规律，病情好律，病情好转，类B B就消就消失。失。类B B与抗与抗B B结合疏松，用合疏松，用红细作吸收放散作吸收放散试验，可放散出大，可放散出大量抗量抗B B。类B B病人的唾液不含病人的唾液不含该血型物血型物质。在在ABAB血的交叉配血血的交叉配血时，如如发现主主侧凝集，凝集，应考考虑类B B存在，存在，应重新定血型并重新定血型并检查唾液中唾液中的血型物的血型物质。类B B与多凝集不同，前者只与抗与多凝集不同，前者只与抗B B反反应，在，在ABAB型血型血清中不凝集，后者与清中不凝集，后者与ABAB型血清中凝集。型血清中凝集。52.6.6.抗抗储存存红细胞抗体：胞抗体：红细胞在胞在3737储存存2 2天，在室温室温天，在室温室温储存存4747天，在天，在44冰箱冰箱储存存2323个月以后，能与个月以后，能与少数人的血清少数人的血清发生非特异性凝集。生非特异性凝集。这种血清种血清中抗体叫做抗中抗体叫做抗储存存红细胞抗体，能与胞抗体，能与酶处理理红细胞胞发生非特异凝集或溶血，造成交叉配生非特异凝集或溶血，造成交叉配血的紊乱。此抗体血的紊乱。此抗体对输血无影响。血无影响。53.7.7.自自发性或性或继发性凝固：性凝固：这种凝固不种凝固不是抗原抗体的反是抗原抗体的反应，而是因，而是因为采血采血动作作缓慢，血液自行凝固，或是用血慢，血液自行凝固，或是用血浆配血配血时，当用具或生理当用具或生理盐水中水中CaCa离子离子较多，即可多，即可发生生继发性凝固。性凝固。这种凝固往往看到白色的种凝固往往看到白色的纤维蛋白网。蛋白网。控制控制对策：防止策：防止CaCa离子离子污染，注意判断染，注意判断结果果时继发性凝固与性凝固与红细胞凝集的区胞凝集的区别。54.假阴性及其控制假阴性及其控制对策策1.1.红细胞胞过浓或或过淡：淡：抗原抗体比例适当，反抗原抗体比例适当，反应最明最明显。如果。如果红细胞胞悬液（最适液（最适为3%5%3%5%）过浓，血清中的抗体全被，血清中的抗体全被吸收呈后吸收呈后带现象，以致凝集不明象，以致凝集不明显，不凝集；，不凝集；如果如果红细胞胞悬液液过淡，血清中的抗体淡，血清中的抗体浓度相度相对太高呈前太高呈前带现象，以致凝集不明象，以致凝集不明显，不凝集。，不凝集。控制控制对策：按策：按规定配制定配制红细胞胞悬液，微弱凝集液，微弱凝集用用显微微镜看看结果。果。55.2.2.溶血性抗原或血型物溶血性抗原或血型物质的中和作用的中和作用 未未经洗洗涤的的红细胞胞悬液中，液中，带有血有血浆中的中的血型物血型物质。特。特别是是轻度溶血度溶血时，部分，部分红细胞溶解，胞溶解，释放出大量溶解性抗原，可将血放出大量溶解性抗原，可将血清中清中对应抗体中和，抗体中和，导致抗体不足，使致抗体不足，使红细胞不凝集。胞不凝集。控制控制对策：不使用溶血策：不使用溶血标本，本，红细胞洗胞洗涤后使用。后使用。56.3.3.血型抗体水平下降：血型抗体水平下降：老年人血型抗体水平下降某些免疫缺陷老年人血型抗体水平下降某些免疫缺陷的病人或慢性淋巴的病人或慢性淋巴细胞白血病、胞白血病、遗传性无性无丙种球蛋白血症以及某些使用免疫抑制丙种球蛋白血症以及某些使用免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，抗体水平的患者，由于免疫球蛋白下降，抗体水平下降甚至缺如。可出下降甚至缺如。可出现交叉配血假阴性。交叉配血假阴性。控制控制对策：注意病人的年策：注意病人的年龄、诊断，用断，用显微微镜观察察结果果。57.4.4.抗原减弱：抗原减弱：由于白血病或某些由于白血病或某些恶性性肿瘤使瘤使A A或或B B抗原抗原变弱，易判弱，易判为不凝集。不凝集。婴儿及老人的儿及老人的红细胞抗原也胞抗原也较青年人弱。在青年人弱。在实验室保存室保存过久久的的标本中本中红细胞抗原性也会减弱。胞抗原性也会减弱。控制控制对策：用策：用显微微镜观察察结果，注意病果，注意病人年人年纪，尽量不用，尽量不用储存存过久的久的标本。本。58.5.5.试验温度不适当：温度不适当：完全抗体作用的最适温度多在完全抗体作用的最适温度多在420420左右，如达左右，如达3737则凝集力下降；不完全抗凝集力下降；不完全抗体作用的最适温度多在体作用的最适温度多在3737左右。左右。控制控制对策：策：