教育精品：91基因工程和细胞工程.ppt

走向高考走向高考 生物生物路漫漫其修远兮路漫漫其修远兮 吾将上下而求索吾将上下而求索新课标版新课标版 二轮专题复二轮专题复习习现代生物科技专题现代生物科技专题专题九专题九第第1讲基因工程和细胞工程讲基因工程和细胞工程专题九专题九考纲解读考纲解读考点预测考点预测1.基因工程的诞生基因工程的诞生1.基因工程操作工具的作用基因工程操作工具的作用及特点及特点2基因工程的操作流程分基因工程的操作流程分析析3植物组织培养的原理、植物组织培养的原理、过程及应用过程及应用4动物细胞培养的原理、动物细胞培养的原理、过程及应用过程及应用5单克隆抗体制备的过程单克隆抗体制备的过程2.基因工程的原理、技术基因工程的原理、技术及应用及应用3.蛋白质工程蛋白质工程4.植物的组织培养植物的组织培养5.动物细胞培养与体细胞动物细胞培养与体细胞克隆克隆6.细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体复复习习指指导导：(1)用用比比较较、归归纳纳法法来来掌掌握握基基因因工工程程操操作作工工具具的的种种类类、作作用用以以及及基基因因工工程程操操作作流流程程中中各各步步骤骤的的原原理理、方方法法。(2)以以流流程程图图的的形形式式复复习习植植物物组组织织培培养养、体体细细胞胞杂杂交交、动动物物细细胞培养、单克隆抗体制备的原理和操作步骤。胞培养、单克隆抗体制备的原理和操作步骤。高频热点精析高频热点精析2真题模拟强化真题模拟强化3课后强化作业课后强化作业4体系整合拓展体系整合拓展1体系整合拓展体系整合拓展答答案案：限限制制酶酶载载体体基基因因表表达达载载体体的的构构建建目目的的基基因因的的检检测测和和鉴鉴定定转转基基因因动动物物基基因因治治疗疗基基因因可可产产生生自自然然界界没没有有的的蛋蛋白白质质细细胞胞的的全全能能性性、细细胞胞膜膜的的流流动动性性植植物物体体细细胞胞杂杂交交培培育育作作物物新新品品种种细细胞胞增增殖殖动动物物细细胞胞核核的的全全能能性性获获得得克克隆隆动动物物个个体体细细胞胞膜膜流流动动性性给小鼠注射抗原给小鼠注射抗原产生专一抗体的杂交瘤细胞产生专一抗体的杂交瘤细胞1转基因植物的培养涉及到哪些生物工程？转基因植物的培养涉及到哪些生物工程？_2基因工程和克隆技术涉及哪些工具酶？基因工程和克隆技术涉及哪些工具酶？_3转基因动物的培育涉及到哪些生物工程？转基因动物的培育涉及到哪些生物工程？_答案：答案：1.基因工程、植物组织培养。基因工程、植物组织培养。2基基因因工工程程的的工工具具酶酶是是限限制制酶酶和和DNA连连接接酶酶，克克隆隆技技术术的工具酶是纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶。的工具酶是纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶。3基因工程、动物细胞工程、胚胎移植。基因工程、动物细胞工程、胚胎移植。1(2014常常州州)某某兴兴趣趣小小组组拟拟用用组组织织培培养养繁繁殖殖一一种种名名贵贵花花卉卉，其其技技术术路路线线为为“取取材材消消毒毒愈愈伤伤组组织织培培养养出出芽芽生生根根移栽移栽”。下列有关叙述，错误的是。下列有关叙述，错误的是()A消消毒毒的的原原则则是是既既杀杀死死材材料料表表面面的的微微生生物物，又又减减少少消消毒毒剂对细胞的伤害剂对细胞的伤害B在在愈愈伤伤组组织织培培养养中中加加入入细细胞胞融融合合的的诱诱导导剂剂，可可获获得得染染色体加倍的细胞色体加倍的细胞C出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控D生根时，培养基通常应含生根时，培养基通常应含萘乙酸等生长素类调节剂萘乙酸等生长素类调节剂 答案答案 B 解解析析 消消毒毒剂剂的的使使用用既既可可杀杀死死材材料料表表面面的的微微生生物物，又又要要防防止止其其伤伤害害组组织织细细胞胞，影影响响组组织织培培养养；植植物物细细胞胞融融合合是是指指经经纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶处处理理后后得得到到的的原原生生质质体体的的诱诱导导融融合合，带带有有细细胞胞壁壁的的愈愈伤伤组组织织细细胞胞不不能能诱诱导导融融合合形形成成染染色色体体加加倍倍的的细细胞胞；出出芽芽和和生生根根都都是是细细胞胞再再分分化化的的结结果果，其其实实质质是是基基因因的的选选择择性性表表达达；萘乙酸为生长素类似物，可诱导愈伤组织生根。萘乙酸为生长素类似物，可诱导愈伤组织生根。2普普通通番番茄茄细细胞胞中中含含有有多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶基基因因，控控制制细细胞胞产产生生多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶，该该酶酶能能破破坏坏细细胞胞壁壁，使使番番茄茄软软化化，不不耐耐贮贮藏藏。科科学学家家们们通通过过基基因因工工程程技技术术，培培育育出出了了抗抗软软化化、保保鲜时间长的番茄新品种，操作流程如下图。请据图回答：鲜时间长的番茄新品种，操作流程如下图。请据图回答：(1)在在番番茄茄新新品品种种的的培培育育过过程程中中，将将目目的的基基因因导导入入受受体体细细胞胞采采用用最最多多的的方方法法是是_，筛筛选选出出含含重重组组DNA的的土土壤壤农农杆杆菌时通常依据质粒上的菌时通常依据质粒上的_的表达。的表达。(2)为为促促使使图图中中、过过程程的的顺顺利利完完成成，需需要要在在_条条件件下下进进行行。要要快快速速繁繁殖殖转转基基因因抗抗软软化化番番茄茄植植株株，目目前前常常用用的的科科技技方方法法是是_。为为获获得得这这种种番番茄茄的的脱脱毒毒苗苗，应应用用其其_进行培养。进行培养。(3)除除了了图图示示培培育育方方法法外外，还还可可通通过过蛋蛋白白质质工工程程技技术术，对对_的的结结构构进进行行特特定定的的改改变变，从从而而获获得得抗抗软软化化的的番番茄茄品品种种，关键的操作是对关键的操作是对_进行定向改造。进行定向改造。(4)为为防防止止转转基基因因番番茄茄通通过过花花粉粉将将抗抗多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶基基因因传传播播给给其其他他植植物物而而造造成成基基因因污污染染，可可将将抗抗多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶基因导入番茄植物细胞的基因导入番茄植物细胞的_(结构结构)中。中。答案答案(1)农杆菌转化法标记基因农杆菌转化法标记基因(2)无菌和人工控制植物组织培养无菌和人工控制植物组织培养(微型繁殖微型繁殖)茎尖茎尖(3)多聚半乳糖醛酸酶多聚半乳糖醛酸酶基因多聚半乳糖醛酸酶多聚半乳糖醛酸酶基因(4)线粒体或叶绿体线粒体或叶绿体 解解析析(1)将将目目的的基基因因导导入入植植物物细细胞胞采采用用最最多多的的方方法法是是农农杆杆菌菌转转化化法法。标标记记基基因因的的作作用用是是为为了了鉴鉴定定受受体体细细胞胞中中是是否否含含有有目目的的基基因因，从从而而将将含含有有目目的的基基因因的的细细胞胞筛筛选选出出来来，因因此此筛筛选选出出含含重重组组DNA的的土土壤壤农农杆杆菌菌时时通通常常依依据据质质粒粒上上标标记记基基因因的的表表达达。(2)和和过过程程是是植植物物组组织织培培养养，该该过过程程只只有有在在无无菌菌和和人人工工控控制制条条件件下下才才能能顺顺利利完完成成。运运用用植植物物组组织织培培养养技技术术可可以以快快速速繁繁殖殖优优良良品品种种，该该技技术术又又称称植植物物的的微微型型繁繁殖殖技技术术。植植物物分分生生区区附附近近如如茎茎尖尖的的病病毒毒极极少少，可可以以切切取取一一定定大大小小的的茎茎尖尖进进行行组组织织培培养养，从而获得脱毒苗。从而获得脱毒苗。(3)人人们们要要获获得得抗抗软软化化的的番番茄茄品品种种，就就必必须须对对多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶基基因因进进行行定定向向改改造造，从从而而达达到到对对多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶的的结结构构进进行行特特定定的的改改变变。(4)细细胞胞质质基基因因遗遗传传表表现现为为母母系系遗遗传传，因因此此将将抗抗多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶基基因因导导入入番番茄茄植植物物细细胞胞的的线线粒粒体体或或叶叶绿绿体体中中可可防防止止转转基基因因番番茄茄通通过过花花粉粉将将抗抗多多聚聚半半乳乳糖糖醛醛酸酸酶酶基基因因传传播播给其他植物而造成基因污染。给其他植物而造成基因污染。高频热点精析高频热点精析1基因工程的基本工具和基本方法的比较基因工程的基本工具和基本方法的比较基因工程及蛋白质工程基因工程及蛋白质工程基本基本工具工具的比较的比较限制酶限制酶识别目的基因和载体上特定的识别目的基因和载体上特定的核苷酸序列，在特定位点上切核苷酸序列，在特定位点上切割割DNA连接酶连接酶 拼接拼接DNA片段，形成重组片段，形成重组DNA载体载体携带目的基因进入受体细胞；携带目的基因进入受体细胞；能在宿主细胞内稳定存在并大能在宿主细胞内稳定存在并大量复制，并有一个至多个限制量复制，并有一个至多个限制酶切割位点，具有特殊的标记酶切割位点，具有特殊的标记基因基因目的基目的基因导入因导入受体细受体细胞方法胞方法的比较的比较农杆菌转化法农杆菌转化法将目的基因整合到植物体细将目的基因整合到植物体细胞的染色体胞的染色体DNA上上显微注射法显微注射法将目的基因注入动物受精卵将目的基因注入动物受精卵中中Ca2处理法处理法使处于感受态的原核生物细使处于感受态的原核生物细胞吸收基因表达载体胞吸收基因表达载体目的基目的基因的检因的检测与鉴测与鉴定方法定方法的比较的比较DNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和DNA之间之间)检测目的基因是否插入受体检测目的基因是否插入受体细胞染色体的细胞染色体的DNA上上核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术(DNA和和mRNA之间之间)检测目的基因是否转录出检测目的基因是否转录出mRNA抗原抗原抗体杂交技抗体杂交技术术(蛋白质分子杂交蛋白质分子杂交)检测目的基因是否翻译出蛋检测目的基因是否翻译出蛋白质白质抗虫或抗病的接种抗虫或抗病的接种实验等实验等个体水平鉴定个体水平鉴定2.蛋白质工程蛋白质工程(1)蛋白质工程流程图蛋白质工程流程图(2)蛋白质工程与基因工程的比较蛋白质工程与基因工程的比较项目项目蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程区区别别原理原理中心法则的逆推中心法则的逆推基因重组基因重组过程过程预期蛋白质功能预期蛋白质功能设计预期的蛋设计预期的蛋白质结构白质结构推测推测应有的氨基酸序应有的氨基酸序列列找到相对应找到相对应的脱氧核苷酸序的脱氧核苷酸序列列合成合成DNA表达出蛋白质表达出蛋白质获取目的基因获取目的基因构建构建基因表达载体基因表达载体将目将目的基因导入受体细胞的基因导入受体细胞目的基因的检测与目的基因的检测与鉴定鉴定项目项目蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程区区别别实质实质定向改造或生产人类定向改造或生产人类所需蛋白质所需蛋白质定向改造生物的遗传特性，定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类以获得人类所需的生物类型或生物产品型或生物产品(基因的异基因的异体表达体表达)结果结果生产自然界没有的蛋生产自然界没有的蛋白质白质生产自然界已有的蛋白质生产自然界已有的蛋白质联系联系蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出的第二代蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出的第二代基因工程，因为是对现有的蛋白质的改造或制造基因工程，因为是对现有的蛋白质的改造或制造新的蛋白质，所以必须通过基因修饰或基因合成新的蛋白质，所以必须通过基因修饰或基因合成实现实现下下图图是是培培育育表表达达人人乳乳铁铁蛋蛋白白的的乳乳腺腺生生物物反反应应器器的的技技术术路路线线。图图中中tetR表表示示四四环环素素抗抗性性基基因因，ampR表表示示氨氨苄苄青青霉霉素素抗抗性性基基因因，BamH、Hind、Sma直直线线所示为三种限制酶的酶切位点。所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：据图回答：(1)图图中中将将人人乳乳铁铁蛋蛋白白基基因因插插入入载载体体，需需用用_限限制制酶酶同同时时酶酶切切载载体体和和人人乳乳铁铁蛋蛋白白基基因因。筛筛选选含含有有重重组组载载体体的的大大肠肠杆菌首先需要在含杆菌首先需要在含_的培养基上进行。的培养基上进行。(2)能能使使人人乳乳铁铁蛋蛋白白基基因因在在乳乳腺腺细细胞胞中中特特异异性性表表达达的的调调控控序列是序列是_(填字母代号填字母代号)。A启动子启动子 BtetR C复制原点复制原点 DampR(3)过过程程可可采采用用的的操操作作方方法法是是_(填填字字母母代代号号)技技术。术。A农杆菌转化农杆菌转化 B大肠杆菌转化大肠杆菌转化 C显微注射显微注射 D细胞融合细胞融合(4)为为检检测测人人乳乳铁铁蛋蛋白白是是否否成成功功表表达达，可可采采用用_(填填字母代号字母代号)技术。技术。A核酸分子杂交核酸分子杂交 B基因序列分析基因序列分析 C抗原抗体杂交抗原抗体杂交 DPCR 解解析析 构构建建目目的的基基因因表表达达载载体体必必须须使使目目的的基基因因和和载载体体被被限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶同同时时酶酶切切后后露露出出相相同同的的黏黏性性末末端端。从从图图中中可可以以看看出出，载载体体无无Sma酶酶的的切切割割位位点点，若若要要将将人人乳乳铁铁蛋蛋白白基基因因插插入入载载体体，就就只只能能选选择择Hind和和BamH；要要选选出出含含有有目目的的基基因因的的大大肠肠杆杆菌菌可可以以通通过过检检测测标标记记基基因因是是否否表表达达来来确确定定，四四环环素素抗抗性性基基因因中中插插入入了了目目的的基基因因而而失失活活，故故标标记记基基因因是是氨氨苄苄青青霉霉素素抗抗性性基基因因；启启动动子子位位于于基基因因首首端端，是是RNA聚聚合合酶酶识识别别和和结结合合的的部部位位，具具有有调调控控转转录录的的功功能能；要要使使人人乳乳铁铁蛋蛋白白基基因因在在乳乳腺腺细细胞胞中中特特异异性性表表达达就就必必须须在在重重组组载载体体中中插插入入乳乳腺腺蛋蛋白白基基因因的的启启动动子子；检测蛋白质一般使用抗原抗体杂交技术。检测蛋白质一般使用抗原抗体杂交技术。答案答案(1)Hind和和BamH氨苄青霉素氨苄青霉素(2)A(3)C(4)C质质粒粒是是常常用用的的基基因因工工程程载载体体。如如图图是是某某种种天天然然土土壤壤农农杆杆菌菌Ti质质粒粒结结构构示示意意图图(标标示示了了部部分分基基因因及及部部分分限限制制酶酶作作用用位位点点)，据图分析下列说法正确的是据图分析下列说法正确的是()A图中的终止子是由三个相邻碱基组成的终止密码图中的终止子是由三个相邻碱基组成的终止密码B用用农农杆杆菌菌转转化化法法可可将将该该质质粒粒构构建建的的表表达达载载体体导导入入动动物物细胞细胞C用用限限制制酶酶和和DNA连连接接酶酶改改造造后后的的质质粒粒无无法法被被限限制制酶酶切割切割D用用限限制制酶酶处处理理能能防防止止该该质质粒粒构构建建的的表表达达载载体体引引起起植植物疯长物疯长 答案答案 D 解解析析 密密码码子子是是mRNA上上三三个个相相邻邻的的碱碱基基，不不会会出出现现在在DNA上上；农农杆杆菌菌转转化化法法是是将将重重组组载载体体导导入入植植物物细细胞胞；用用限限制制酶酶和和DNA连连接接酶酶构构建建的的表表达达载载体体中中仍仍存存在在限限制制酶酶的的识识别别位位点点；用用限限制制酶酶切切割割后后，编编码码控控制制细细胞胞分分裂裂素素合合成成的的物物质质就就不不能能合合成了。成了。1植物组织植物组织(细胞细胞)培养和动物细胞培养培养和动物细胞培养细胞工程细胞工程项目项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养取材取材植物幼嫩部位植物幼嫩部位(芽芽尖、根尖等尖、根尖等)动物胚胎或出生不久动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或的幼龄动物的器官或组织组织项目项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养结果结果获得植株个体，可以体获得植株个体，可以体现全能性现全能性新的细胞，不形成个体，新的细胞，不形成个体，不体现全能性不体现全能性目的目的植株快速繁殖；植株快速繁殖；脱脱毒植株的培养；毒植株的培养；人工人工种子；种子；生产药物、杀生产药物、杀虫剂等；虫剂等；转基因植物转基因植物的培育的培育蛋白质生物制品的生产；蛋白质生物制品的生产；皮肤移植材料的培育；皮肤移植材料的培育；检测有毒物质；检测有毒物质；生理、生理、病理、药理学的研究病理、药理学的研究相同相同点点两技术手段培养过程中都进行有丝分裂，都是无两技术手段培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，都不涉及减数分裂；性繁殖，都可称为克隆，都不涉及减数分裂；均均为无菌操作，需要适宜的温度、为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件等条件2.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合(单克隆抗体制备单克隆抗体制备)理论基理论基础础(原理原理)细胞膜的流动性、植物细胞细胞膜的流动性、植物细胞的全能性的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性融合前融合前处理处理先用纤维素酶和果胶酶除去先用纤维素酶和果胶酶除去细胞壁细胞壁先用胰蛋白酶使细胞分散开先用胰蛋白酶使细胞分散开促融方促融方法法电激、振动、离心、聚乙二电激、振动、离心、聚乙二醇醇电激、聚乙二醇、灭活的病毒电激、聚乙二醇、灭活的病毒等等植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合(单克隆抗单克隆抗体制备体制备)结果结果杂种植株杂种植株杂交细胞杂交细胞应用应用培育植物新品种培育植物新品种主要用于制备单克隆抗体主要用于制备单克隆抗体意义意义突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合扩展了杂交的亲本组合3.动物体细胞核移植的过程动物体细胞核移植的过程(流程图流程图)现现有有甲甲、乙乙两两种种植植物物(均均为为二二倍倍体体纯纯种种)，其其中中甲甲种种植植物物的的光光合合作作用用能能力力高高于于乙乙种种植植物物，但但乙乙种种植植物物很很适适宜宜在在盐盐碱碱地地种种植植。且且相相关关性性状状均均为为核核基基因因控控制制。要要利利用用甲甲、乙乙两两种种植植物物的的优优势势，培培育育出出高高产产、耐耐盐盐的的植植株株，有有多多种种生生物物技技术术手手段段可可以以利利用用。下下列列所所采采用用的的技技术术手手段段中中，不不可可行行的的是是()A利利用用植植物物体体细细胞胞杂杂交交技技术术，可可获获得得满满足足要要求求的的四四倍倍体体杂种目的植株杂种目的植株B将将乙乙种种植植物物耐耐盐盐基基因因导导入入到到甲甲种种植植物物的的受受精精卵卵中中，可可培育出目的植株培育出目的植株C两两种种植植物物杂杂交交后后，得得到到的的F1再再利利用用单单倍倍体体育育种种技技术术，可较快获得纯种的目的植株可较快获得纯种的目的植株D诱诱导导两两种种植植物物的的花花粉粉融融合合，并并培培育育成成幼幼苗苗，幼幼苗苗用用秋秋水仙素处理，可培育出目的植株水仙素处理，可培育出目的植株 解解析析 两两种种植植物物存存在在着着生生殖殖隔隔离离，无无法法杂杂交交，即即使使能能够够杂杂交交，所所得得F1也也不不能能产产生生正正常常可可育育的的配配子子，因因而而不不能能用用于于单单倍倍体育种。体育种。答案答案 C科科学学家家用用植植物物体体细细胞胞杂杂交交方方法法，将将番番茄茄的的原原生生质质体体和和马马铃铃薯薯的的原原生生质质体体融融合合，成成功功地地培培育育出出了了“番番茄茄马马铃铃薯薯”杂杂种种植植株株(如如图图所所示示)，其其中中表表示示过过程程，英英文文字字母母表表示示细细胞胞、组组织或植株。据图回答下列问题：织或植株。据图回答下列问题：(1)在在实实现现过过程程的的技技术术之之前前使使用用_酶酶处处理理细细胞胞以以去除细胞壁。去除细胞壁。(2)在在将将杂杂种种细细胞胞培培育育成成为为杂杂种种植植株株的的过过程程中中，依依据据的的原原理理是是_，其其中中过过程程相相当当于于_过过程程，过过程程涉涉及及的分裂方式为的分裂方式为_。(3)若若番番茄茄细细胞胞内内有有m条条染染色色体体，马马铃铃薯薯细细胞胞内内有有n条条染染色色体体，则则“番番茄茄马马铃铃薯薯”细细胞胞内内含含_条条染染色色体体；若若杂杂种种细细胞胞培培育育成成的的“番番茄茄马马铃铃薯薯”植植株株为为四四倍倍体体，则则此此杂杂种种植植株株的花粉经离体培育得到的植株属于的花粉经离体培育得到的植株属于_倍体植株。倍体植株。(4)若若将将该该方方案案用用在在单单克克隆隆抗抗体体制制备备过过程程中中，请请用用箭箭头头把把下列各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来：下列各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来：解解析析(1)植植物物体体细细胞胞杂杂交交过过程程中中应应该该用用纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶去去除除细细胞胞壁壁。(2)杂杂种种细细胞胞培培育育成成为为杂杂种种植植株株依依据据的的原原理理是是细细胞胞的的全全能能性性，杂杂种种细细胞胞的的组组织织培培养养过过程程要要经经过过脱脱分分化化和和再再分分化化过过程程，在在植植物物组组织织培培养养过过程程中中只只涉涉及及有有丝丝分分裂裂。(3)若若番番茄茄细细胞胞内内有有m条条染染色色体体，马马铃铃薯薯细细胞胞内内有有n条条染染色色体体，则则产产生生的的“番番茄茄马马铃铃薯薯”细细胞胞所所含含的的染染色色体体为为mn条条，属属于于异异源源四四倍倍体体。该该杂杂种种植植株株的的花花粉粉经经离离体体培培养养得得到到的的植植株株无无论论含含几几个个染染色色体体组组，均均为为单单倍倍体体。(4)制制备备单单克克隆隆抗抗体体的的过过程程包包括括“正正常小鼠免疫处理常小鼠免疫处理融合融合筛选筛选提纯提纯”四步。四步。真题模拟强化真题模拟强化1(2014天天津津，4)为为达达到到相相应应目目的的，必必须须通通过过分分子子检检测测的是的是()A携带链霉素抗性基因受体菌的筛选携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B产生抗人白细胞介素产生抗人白细胞介素8抗体的杂交瘤细胞的筛选抗体的杂交瘤细胞的筛选C转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D21三体综合征的诊断三体综合征的诊断 答案答案 B 解解析析 本本题题考考查查基基因因工工程程、细细胞胞工工程程与与变变异异的的有有关关实实验验筛筛选选诊诊断断问问题题。携携带带链链霉霉素素抗抗性性基基因因受受体体菌菌的的筛筛选选可可利利用用含含链链霉霉素素选选择择性性培培养养基基筛筛选选；必必需需利利用用抗抗原原抗抗体体杂杂交交技技术术筛筛选选产产生生抗抗人人白白细细胞胞介介素素的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞；转转基基因因抗抗虫虫棉棉植植株株抗抗虫虫效效果果的的鉴鉴定定可可采采用用个个体体生生物物学学水水平平的的饲饲喂喂法法进进行行检检测测；利利用用显显微微镜镜检测检测21三体综合征。三体综合征。2(多多选选)(2014江江苏苏，23)下下列列关关于于基基因因工工程程技技术术的的叙叙述，错误的是述，错误的是()A切切割割质质粒粒的的限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶均均特特异异性性地地识识别别6个个核核苷苷酸序列酸序列BPCR反反应应中中温温度度的的周周期期性性改改变变是是为为了了DNA聚聚合合酶酶催催化化不同的反应不同的反应C载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D抗抗虫虫基基因因即即使使成成功功地地插插入入到到植植物物细细胞胞染染色色体体上上也也未未必必能正常表达能正常表达 答案答案 ABC 解解析析 本本题题考考查查基基因因工工程程的的相相关关知知识识。不不同同的的限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶特特异异性性地地识识别别核核苷苷酸酸序序列列不不同同，A错错误误；酶酶具具有有专专一一性性，PCR反反应应中中温温度度的的周周期期性性改改变变是是为为了了不不同同的的酶酶将将DNA解解旋旋、扩扩增增，B错错误误；载载体体质质粒粒通通常常采采用用抗抗生生素素抗抗性性基基因因作作为为筛筛选选标标记记基基因因，C错错误误；基基因因成成功功插插入入也也未未必必会会表表达达，D正正确确。解解答答此类题目一定要准确把握基因工程的步骤、基因工程的工具。此类题目一定要准确把握基因工程的步骤、基因工程的工具。3(2014湖湖北北质质检检)在在25的的实实验验条条件件下下可可顺顺利利完完成成的的是是()A光合色素的提取与分离光合色素的提取与分离B用斐林用斐林(本尼迪特本尼迪特)试剂鉴定还原糖试剂鉴定还原糖C大鼠神经细胞的培养大鼠神经细胞的培养D制备用于植物组织培养的固体培养基制备用于植物组织培养的固体培养基 答案答案 A 解解析析 本本题题考考查查实实验验的的理理解解和和评评价价能能力力。光光合合色色素素的的提提取取分分离离对对温温度度没没有有特特别别的的要要求求，在在室室温温下下能能顺顺利利完完成成；用用斐斐林林试试剂剂鉴鉴定定还还原原糖糖，需需要要5065的的温温水水加加热热；体体外外培培养养组组织织细细胞胞的的温温度度一一般般与与相相应应动动物物的的体体温温相相近近，对对于于大大鼠鼠来来说说应应该该在在37左左右右；固固体体培培养养基基需需要要加加琼琼脂脂，琼琼脂脂的的溶溶解解温温度度9597。解解答答本本题题易易出出现现的的一一个个问问题题就就是是不不能能准准确确记记忆忆各各实实验验的的真真正正温温度度，但但可可借借助助选选项项分分析析获获取取有有用用信信息息，如如大大鼠鼠神神经经细细胞胞的的培培养温度与其体温相同。养温度与其体温相同。课后强化作业课后强化作业（点此链接）（点此链接）