实验动物学的基本技术操作ppt课件.ppt

Basic operating techniques for animal experiments 动物实验基本操作技术动物实验基本操作技术陈丽颖陈丽颖 130 1550 6893 这些规范和操作对动物实验室条件、工作人这些规范和操作对动物实验室条件、工作人员素质、技术水平和操作方法都要求标准化，包员素质、技术水平和操作方法都要求标准化，包括动物实验过程中消毒剂选择、消毒方法、动物括动物实验过程中消毒剂选择、消毒方法、动物实验前准备、实验前准备、动物实验技术操作动物实验技术操作、样品采集样品采集等各等各个环节。个环节。动物实验操作的总要求：动物实验操作的总要求：达到良好实验室操作规范（达到良好实验室操作规范（good laboratory practice，GLP）和标准操作程序（）和标准操作程序（standard operating procedure，SOP）。）。动物实验操作是畜牧动物实验操作是畜牧兽医学科研究生必须兽医学科研究生必须熟练熟练掌握掌握的基本功。的基本功。由于研究目的不同，由于研究目的不同，动物实验的操作技术方法动物实验的操作技术方法多种多样，但其多种多样，但其基本操作基本操作技术方法技术方法是一样的。是一样的。中国农业出版社，中国农业出版社，2012第第1版。定价：版。定价：180内内 容容 提提 要要l一、实验动物的分组与编号一、实验动物的分组与编号 l二、实验动物的抓取与固定二、实验动物的抓取与固定l三、实验动物的被毛去除技术三、实验动物的被毛去除技术 l四、实验动物给药技术四、实验动物给药技术l五、实验动物麻醉技术五、实验动物麻醉技术l六、实验动物各种体液标本的采集方法六、实验动物各种体液标本的采集方法l七、实验动物安乐死技术七、实验动物安乐死技术l八、尸体剖检及脏器标本采集原则及检验方法八、尸体剖检及脏器标本采集原则及检验方法（详见（详见兽医实验动物学兽医实验动物学第十章第二节第十章第二节“动物实验操作技术动物实验操作技术”）一、实验动物的分组与编号一、实验动物的分组与编号（一）实验动物性别的鉴定（一）实验动物性别的鉴定（一）实验动物性别的鉴定（一）实验动物性别的鉴定 1 1 鉴别小、大鼠的性别 2 鉴别豚鼠的性别 3 鉴别家兔的性别 4 鉴别鸡的性别（二）（二）（二）（二）实验动物实验动物实验动物实验动物编号和标记方法编号和标记方法编号和标记方法编号和标记方法 1 染色法 2 挂牌法 3 耳号法 4 纹身法（黔刺法）5 剪毛法 6 打孔或剪趾、剪耳、剪尾法 7 烙印法 8 电子标识（一）实验动物性别的鉴定（一）实验动物性别的鉴定鉴鉴别别小小、大大鼠鼠的的性性别别：根根据据外外生生殖殖器器与与肛肛门门之之间间的的距距离离来来判判断断这些动物新生仔的性别。一般间隔短的是雄性。这些动物新生仔的性别。一般间隔短的是雄性。鉴鉴别别豚豚鼠鼠的的性性别别：雌雌性性外外生生殖殖器器阴阴蒂蒂突突起起比比较较小小；雄雄性性外外生生殖殖器器处有包皮覆盖的阴茎的小隆起。处有包皮覆盖的阴茎的小隆起。鉴鉴别别家家兔兔的的性性别别：新新生生仔仔兔兔是是根根据据肛肛门门和和尿尿道道口口之之间间的的距距离离以以及及尿尿道道开开口口部部形形态态来来判判断断雌雌雄雄。雄雄性性的的肛肛门门和和尿尿道道口口间间距距是是雌雌性性的的1.51.52 2倍；雌的尿道口形态是裂缝、细长形，雄的则是圆筒形。倍；雌的尿道口形态是裂缝、细长形，雄的则是圆筒形。鉴鉴别别鸡鸡的的性性别别：根根据据生生殖殖突突起起来来鉴鉴别别。常常在在雏雏鸡鸡出出壳壳后后8 81212小小时时之之内内进进行行。方方法法：将将雏雏鸡鸡握握在在手手中中，排排除除粪粪便便，将将头头夹夹在在中中指指与与无无名名指指之之间间，大大拇拇指指固固定定肛肛门门上上方方，用用右右手手大大拇拇指指和和食食指指轻轻按按肛肛门门旁旁边边使使肛肛门门翻翻开开，在在亮亮光光下下如如看看到到很很小小的的粒粒状状阴阴茎茎突突起起就就是是雄雄性性，无无突起的是雌雏鸡。突起的是雌雏鸡。（二）（二）实验动实验动物物编编号和号和标记标记方法方法 1 1 染色法染色法 2 2 挂牌法挂牌法 3 3 耳号法耳号法 4 4 纹身法（黔刺法）纹身法（黔刺法）5 5 剪毛法剪毛法 6 6 打孔或剪趾、剪耳、剪尾法打孔或剪趾、剪耳、剪尾法 7 7 烙印法烙印法 8 8 电子标识电子标识标记的方法很多，但基本标记的方法很多，但基本原则是：原则是：号码清楚、耐久、号码清楚、耐久、简便、易认和适用。简便、易认和适用。染染色色法法是是用用化化学学剂剂在在动动物物身身体体明明显显部部位位如如被被毛毛、四四肢肢等等处处进进行行涂涂染染，或或用用不不同同颜颜色色等等来来区区别别各各组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。常用的标记溶液有：常用的标记溶液有：3 5苦味酸苦味酸苦味酸苦味酸溶液（黄色）；溶液（黄色）；0.5中性红中性红中性红中性红或品红溶液（红色）；或品红溶液（红色）；2硝酸银硝酸银硝酸银硝酸银溶液溶液(咖啡色，涂后需光照咖啡色，涂后需光照10min)；煤焦油煤焦油煤焦油煤焦油酒精溶液（黑色）；酒精溶液（黑色）；龙胆紫龙胆紫龙胆紫龙胆紫溶液（紫色）。溶液（紫色）。1 1、染色法、染色法(Staining)(Staining)1 1、染色法、染色法(Staining)(Staining)编号的原则是：编号的原则是：先左后右，先左后右，先左后右，先左后右，从前到后从前到后从前到后从前到后。若动物编号是若动物编号是二位数或三位数，则采用二位数或三位数，则采用2 2种或种或3 3种不同颜色分别代表种不同颜色分别代表不同位数（个位、十位、不同位数（个位、十位、百位），标记的原则同上。百位），标记的原则同上。左前肢：左前肢：1号，号，左侧腹部：左侧腹部：2号，号，左后肢：左后肢：3号，号，头顶部：头顶部：4号，号，腰背部：腰背部：5号，号，尾基部：尾基部：6号，号，右前肢：右前肢：7号，号，右侧腰部：右侧腰部：8号，号，右后肢：右后肢：9号。号。小鼠的染色标记方法小鼠的染色标记方法 若动物编号若动物编号超过超过1010或更大数字时，可使用上述两种或更大数字时，可使用上述两种不同颜色的溶液，即把不同颜色的溶液，即把一种颜色作为个位数，另一种一种颜色作为个位数，另一种颜色作为十位数颜色作为十位数。这种交互使用可编到。这种交互使用可编到9999号。号。(如红色如红色为十位，黄色为个位为十位，黄色为个位)。NO.12 染色法多用于实验周期较短、动染色法多用于实验周期较短、动物数量不多的情况，物数量不多的情况，不宜用于长期实不宜用于长期实验验。此法主要用于此法主要用于大、小鼠、豚鼠和白大、小鼠、豚鼠和白色家兔。色家兔。挂挂牌牌法法可用来标记多种动物，一般用于兔、豚鼠标记。犬、猴、猫等动物有时可挂在颈部或笼箱或链条上。使用自制的或购买的烙压有编号的圆形或方形牌（铝、不锈钢或者塑胶等材料），或将号码按实验分组编号烙在动物颈圈皮带上，将其固定在动物颈部。也可挂在实验动物的耳部、肢体或笼具上。2、挂牌法挂牌法3 3、耳号法、耳号法 用刺数钳（耳号钳）将号码打在动物耳朵上。打号前用蘸有酒精的棉球擦净耳朵，用耳号钳刺上号码，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。该法适用于耳朵比较大的兔、狗等动物。l用7号或8号注射针头蘸取少量碳素墨水，在动物唇的内侧、耳部、前后肢以及尾部等少毛部位进行纹身，刺出相应数字。用黑墨涂在打号局部，数天后黑墨浸入皮下，显示出蓝黑色字号。l该法适用于大小鼠、豚鼠等。在实验动物数量少的情况下，也可用于兔、狗等动物。l目前有市售的兔用打号器，原理与此相同，附带有不同数字和符号的针刺字号。4、纹身法（黔刺法）纹身法（黔刺法）5 5、剪毛法、剪毛法 该该法法适适用用于于大大、中中型型动动物物，如如狗狗、兔兔等等。方方法法是是用用剪剪毛毛刀刀在在动动物物一一侧侧或或背背部部剪剪出出号号码码，此此法法编编号号清清楚楚可靠，仅适于短期观察。可靠，仅适于短期观察。6、打孔或剪趾、剪耳、剪尾法、打孔或剪趾、剪耳、剪尾法耳孔法是用打孔机直接在实验动物的耳朵上打孔编号，根据耳孔法是用打孔机直接在实验动物的耳朵上打孔编号，根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少，来表示一定的号码。打在动物耳朵上的部位和孔的多少，来表示一定的号码。也可用剪刀在耳廓上剪出缺口作为标记。也可用剪刀在耳廓上剪出缺口作为标记。该法常在饲养大量动物时作为终身号采用（下页图）。该法常在饲养大量动物时作为终身号采用（下页图）。剪趾、剪尾、剪耳若可能损害动物的生命时，必须选择其他的剪趾、剪尾、剪耳若可能损害动物的生命时，必须选择其他的剪趾、剪尾、剪耳若可能损害动物的生命时，必须选择其他的剪趾、剪尾、剪耳若可能损害动物的生命时，必须选择其他的标记方法。当其是唯一可行的方法时，要报请动物管理委员会标记方法。当其是唯一可行的方法时，要报请动物管理委员会标记方法。当其是唯一可行的方法时，要报请动物管理委员会标记方法。当其是唯一可行的方法时，要报请动物管理委员会审查批准。审查批准。审查批准。审查批准。7 7、烙印法、烙印法 是是一一种种直直接接把把标标记记编编号号烙烙印印在在实实验验动动物物身身体体上上的的方方法法。方方法法是是将将标标记记号号码码烙烙印印在在大大动动物物（如如犬犬等等）的耳、面、鼻、四肢等部位皮肤上。的耳、面、鼻、四肢等部位皮肤上。烙烙印印后后应应于于伤伤口口处处涂涂抹抹酒酒精精黑黑墨墨等等颜颜料料，即即可可清楚读出号码。清楚读出号码。该该法法对对实实验验动动物物可可造造成成轻轻微微损损伤伤，操操作作时时宜宜轻轻巧、敏捷，以减少痛苦。巧、敏捷，以减少痛苦。8 8、电子标识、电子标识l动物电子标识动物电子标识(Animal Electronic Identification)又又被称为被称为“动物电子身份证动物电子身份证”，是用来标识动物属性，是用来标识动物属性的一种具有信息存储和处理能力的无线射频标识的一种具有信息存储和处理能力的无线射频标识（Radio frequency identification devices，RFID），），标识内置集成电路（标识内置集成电路（IC芯片），用于动物信息存芯片），用于动物信息存贮、识读和数据通信、交换。贮、识读和数据通信、交换。l使用动物电子标识可以实现对动物的全过程、可追使用动物电子标识可以实现对动物的全过程、可追溯管理，在动物识别及建立溯管理，在动物识别及建立“动物标识及疫病可追动物标识及疫病可追溯体系溯体系”方面具有极大的应用前景。方面具有极大的应用前景。l根据不同用途，动物电子标识可封装成注射植入型、根据不同用途，动物电子标识可封装成注射植入型、耳挂型、留胃型和脚环型等多种形式。耳挂型、留胃型和脚环型等多种形式。8 8、电子标识、电子标识二、实验动物的抓取与固定二、实验动物的抓取与固定l l1 1、小鼠、小鼠(mouse)(mouse)的抓取与固定的抓取与固定l l2 2、大鼠、大鼠(rat)(rat)的抓取与固定的抓取与固定l l3 3、豚鼠、豚鼠(Guinea pig)(Guinea pig)的抓取与固定的抓取与固定l l4 4、家兔、家兔(rabbit)(rabbit)的抓取与固定的抓取与固定l l5 5、犬、犬(dog)(dog)的抓取与固定的抓取与固定l l6 6、猪、猪(pig)(pig)的抓取固定方法的抓取固定方法小鼠的抓取小鼠的抓取小鼠的固定方法小鼠的固定方法台面固定台面固定固定架固定固定架固定手手持持固固定定 抓取方法基本同小鼠，但最好戴抓取方法基本同小鼠，但最好戴防护手套防护手套。大鼠的抓取与固定大鼠的抓取与固定 大鼠的尾静脉采血和手术操作需固定大鼠。麻醉后置于大鼠实验板上(仰卧位)，先用线固定好四肢，然后用棉线将大鼠两上门齿固定于实验板上。如做大鼠尾静脉注射，可将大鼠置于固定器内，使鼠尾留在外面进行操作。固定板固定大鼠固定板固定大鼠豚鼠的抓取与固定豚鼠的抓取与固定家兔的抓取家兔的抓取Which is wrong?兔头固定兔头固定台式固定台式固定手持固定手持固定 5 5、犬、犬(dog)(dog)的抓取与固定的抓取与固定 经过驯服的犬抓取是很方便的，而未经驯服的经过驯服的犬抓取是很方便的，而未经驯服的犬抓取时，要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部，使犬抓取时，要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部，使犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。急性实验用犬，可用犬夹夹住犬颈部后急性实验用犬，可用犬夹夹住犬颈部后,将它将它压倒在地，由助手将其四肢固定好。压倒在地，由助手将其四肢固定好。犬嘴的捆绑方法犬嘴的捆绑方法狗的头部固定器狗的头部固定器 手术台固定手术台固定 抓取猪时，一人从背后紧抓猪的两耳将其提起，使其臀部着地，两腿膝部合拢将其躯干夹住。猪的抓取与固定猪的抓取与固定小猪的抓取 带柄绳套及其用法 三角架固定三角架固定固定带悬吊固定固定带悬吊固定猪固定带实验中如需从猪静脉取血、注射或输液时，或要在猪腹部或颈部操作时，可将猪仰放在“V“字型槽内进行固定，也可用木制三角固定架和帆布吊兜来固定小型猪。马的六柱栏保定 马的二柱栏保定 提拉前肢倒牛法 一条绳倒牛法 旋转式尾栏挤压笼 十字军式挤压笼 三、实验动物的被毛去除技术三、实验动物的被毛去除技术l动物被毛去除方法有动物被毛去除方法有拔毛法拔毛法、剪毛法剪毛法、剃毛法剃毛法和和脱毛法脱毛法等。等。l（一）拔毛法（一）拔毛法l一般适用于大鼠、小鼠、鸡、家兔、羊和狗的体表静一般适用于大鼠、小鼠、鸡、家兔、羊和狗的体表静脉采血、皮下和腹腔注射或动、静脉穿刺等实验。脉采血、皮下和腹腔注射或动、静脉穿刺等实验。l（二）剪毛法（二）剪毛法l将动物固定后，先用湿纱布蘸湿被毛，用一只手绷紧将动物固定后，先用湿纱布蘸湿被毛，用一只手绷紧局部皮肤，另一只手用剪毛剪紧贴动物皮肤，依次将局部皮肤，另一只手用剪毛剪紧贴动物皮肤，依次将所需部位被毛剪去。所需部位被毛剪去。l剪毛时切忌提起被毛。剪毛时切忌提起被毛。l此法适用于皮肤实验或外科手术实验。此法适用于皮肤实验或外科手术实验。三、实验动物的被毛去除技术三、实验动物的被毛去除技术l（三）剃毛法（三）剃毛法l剃毛法常用于大动物手术区域皮肤的术前准备。适用于皮剃毛法常用于大动物手术区域皮肤的术前准备。适用于皮肤实验或外科手术实验，尤其是大动物慢性手术时常用。肤实验或外科手术实验，尤其是大动物慢性手术时常用。l（四）脱毛剂法（四）脱毛剂法l一般常用于大动物作无菌手术的术野准备或观察动物皮肤一般常用于大动物作无菌手术的术野准备或观察动物皮肤血液循环和病理变化时。血液循环和病理变化时。l具体方法：先剪短脱毛区被毛，用棉球或纱布蘸取脱毛剂具体方法：先剪短脱毛区被毛，用棉球或纱布蘸取脱毛剂涂一薄层，涂一薄层，2 23 3分钟后用温水洗去脱落的被毛，纱布擦干分钟后用温水洗去脱落的被毛，纱布擦干局部，涂一层凡士林即可。局部，涂一层凡士林即可。l常用的脱毛剂是硫化钠，与不同成分组成配方使用。常用的脱毛剂是硫化钠，与不同成分组成配方使用。四、实验动物给药技术四、实验动物给药技术l（一）经口给药（一）经口给药 （Oral administrationOral administration）l拌料饲喂拌料饲喂l灌胃灌胃l（二）注射法（二）注射法 （injection)injection)l皮内注射皮内注射(intracutaneous injection)(intracutaneous injection)l皮下注射皮下注射(Subcutaneous injection)(Subcutaneous injection)l腹腔注射腹腔注射(intraperitoneal injection)(intraperitoneal injection)l肌内注射肌内注射(intramuscular injection)(intramuscular injection)l静脉注射静脉注射(intravenous injection)(intravenous injection)l（三）吸入给药（三）吸入给药l（四）滴鼻点眼接种（四）滴鼻点眼接种l（五）豚鼠或小鼠的角膜注射法（五）豚鼠或小鼠的角膜注射法（一）经口给药（一）经口给药l经口给药是最常用、最方便而且较安全的给药法。经口给药是最常用、最方便而且较安全的给药法。适宜于将药物经口服后，药物被胃肠道吸收入血，适宜于将药物经口服后，药物被胃肠道吸收入血，起到局部或全身的作用，以达到防治和诊断疾病的起到局部或全身的作用，以达到防治和诊断疾病的目的。目的。l方法包括方法包括拌料饲喂拌料饲喂和和灌胃给服灌胃给服两种。两种。胃内灌注法(stomach perfusion)大鼠与小鼠的胃内灌注：大鼠与小鼠的胃内灌注：大鼠用左手拇指和食指固定头部和一侧前肢，中指和无名指固定另一肢；小鼠用拇指和食指固定头部，中指固定一侧前肢，无名指和小指固定住一侧后肢。使动物腹部朝上，头部向上有一个倾斜度。固定好动物后，右手持注射器，使灌胃针头沿着鼠嘴侧角通过食管进入胃内，即可灌注，如很通畅，则说明针头确已进入胃内；如果不通畅，动物挣扎或者发生呕吐，则表示针头没有进入胃内，应将针头拔出重操作。小鼠灌胃方法小鼠灌胃方法 大鼠灌胃方法大鼠灌胃方法实验动物种类实验动物种类灌胃使用针头等灌胃使用针头等途径和剂量途径和剂量(ml/kg)灌胃最大给药量灌胃最大给药量(ml)皮下注射皮下注射肌肉注射肌肉注射腹腔注射腹腔注射静脉静脉输输液液静脉注射（推注）静脉注射（推注）小白鼠小白鼠9（钝头）（钝头）10（50）10(40)0.05b（0.1）b20（80）(25)5 大鼠大鼠静脉切开静脉切开 针针10（40）5(10)0.1b（0.2）b10（20）(20)5家兔家兔10号导尿管号导尿管10（15）1（2）0.25（0.5）5（20）(10)2犬犬5（15）1（2）0.25（0.5）1（20）(5)2.5短尾猿短尾猿5（15）2（5）0.25（0.5）c（10）c2狨猴狨猴10（15）2（5）0.25（0.5）c（20）(10)2.5小型猪小型猪10（15）1（2）0.25（0.5）1（20）(5)2.5蛙蛙淋巴囊注射，最大注射量淋巴囊注射，最大注射量 1ml/只只符合良好操作规范的各种实验动物的一次给药量符合良好操作规范的各种实验动物的一次给药量（二）注射（二）注射 (injection)(injection)皮内注射皮内注射是将药液注入动物皮肤的表皮和真皮之间。常用于免疫评价、炎症和敏感性应答等试验。注射时，皮内注射针头的孔朝上与皮肤平行刺入注射时，皮内注射针头的孔朝上与皮肤平行刺入皮内皮内(表皮与真皮之间表皮与真皮之间)，然后推液。，然后推液。兔、豚鼠和大鼠的兔、豚鼠和大鼠的皮内注射部位皮内注射部位均为均为背部脊柱两背部脊柱两侧的皮肤侧的皮肤。l根据皮肤的厚度，注射量为根据皮肤的厚度，注射量为0.05 mL0.05 mL 0.1 mL0.1 mL。1 皮内注射皮内注射(Intracutaneous injection)（二）注射（二）注射 (injection)(injection)实验者用左手拇指和食指轻轻提起皮肤，右手实验者用左手拇指和食指轻轻提起皮肤，右手持注射器将针头斜刺入皮下持注射器将针头斜刺入皮下(真皮下真皮下)，以能轻松摆，以能轻松摆动针头为准。轻抽无回血后，可将药液缓慢注入。动针头为准。轻抽无回血后，可将药液缓慢注入。注射后形成的小泡因为皮下组织疏松而很快消失。注射后形成的小泡因为皮下组织疏松而很快消失。一般选择后肢大腿外侧、颈背部或下腹部腹中一般选择后肢大腿外侧、颈背部或下腹部腹中线对侧皮下等皮下脂肪较少的部位。线对侧皮下等皮下脂肪较少的部位。2 皮下注射皮下注射(Subcutaneous injection)（二）注射（二）注射 进行大鼠、小鼠腹腔注射时，实验者可先用左手进行大鼠、小鼠腹腔注射时，实验者可先用左手抓取和保定动物，使其腹部向上，头略低于尾部，抓取和保定动物，使其腹部向上，头略低于尾部，右手持注射器在腹部的下右手持注射器在腹部的下l/3l/3处靠近腹中线的两侧，处靠近腹中线的两侧，朝头方向平行刺入皮肤朝头方向平行刺入皮肤0.5cm0.5cm1cm1cm，再把针竖起呈，再把针竖起呈4545穿过腹肌和腹膜进入腹腔，此时应没有阻力感，穿过腹肌和腹膜进入腹腔，此时应没有阻力感，然后固定针头，缓慢地注入药液。然后固定针头，缓慢地注入药液。注射量：注射量：注射量：注射量：大鼠、大鼠、小鼠,0.51ml，豚鼠、兔,5m1。3 腹腔注射腹腔注射(intraperitoneal injection)（二）注射（二）注射 (injection)(injection)动物的肌内注射给药，可选择肌肉丰满、内无大血动物的肌内注射给药，可选择肌肉丰满、内无大血管经过的部位注射，一般选择臀部。大鼠、小鼠管经过的部位注射，一般选择臀部。大鼠、小鼠等小动物常选择大腿外侧肌肉部位。等小动物常选择大腿外侧肌肉部位。注射时，将针头呈注射时，将针头呈9090角迅速刺入肌肉，回抽无血角迅速刺入肌肉，回抽无血即可注入药液。用药量不超过即可注入药液。用药量不超过0.1ml/10g0.1ml/10g体重。肌体重。肌内注射一般每只实验动物每日不宜超过两个注射内注射一般每只实验动物每日不宜超过两个注射部位。部位。4 肌内注射肌内注射(intramuscular injection)（二）注射（二）注射 (injection)(injection)是将药液直接推入静脉管内，在动物实验中经常使是将药液直接推入静脉管内，在动物实验中经常使用。用。静脉注射可分为静脉推注、缓慢的静脉注射和静脉静脉注射可分为静脉推注、缓慢的静脉注射和静脉输液。输液。不同的实验动进行静脉注射的方法不同。不同的实验动进行静脉注射的方法不同。5 静脉注射静脉注射(intravenous injection)用透明玻璃塑料容器扣住大鼠或小鼠，置于试验台边缘，使尾巴外露。用75%酒精棉球反复擦拭尾部，或于50C左右温水中浸泡鼠尾几分钟，使尾静脉血管扩张。然后，左手拇指和食指捏住尾部两侧，使静脉更为充盈，中指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾梢；右手持注射器（4号针头）与尾平行，从尾巴下1/4处刺入。若注射器回抽见血，推进时无阻力，且无白色皮丘出现，说明针头已刺入血管，即可缓慢注入药液。注射量：一般为注射量：一般为0.5ml为宜。为宜。小鼠、大鼠尾静脉注射小鼠、大鼠尾静脉注射 如出现尾部发白、皮下出血或肿胀，同时注射阻力增大，则应立即停止注射，按次序向尾根部移动，重新选择血管位置进行注射。注射完毕马上拔出针头，用干棉球压迫止血。注射前应确认针头针筒内无气泡注意：操作术式？注意：操作术式？小鼠、大鼠尾静脉注射小鼠、大鼠尾静脉注射 将兔置固定盒内或由助手固定好动物，操作者将注射部位的毛拔去并用酒精棉轻轻擦拭耳部外缘，静脉即明显可见。先由耳尖部静脉注射，若失败，再逐步向耳根移动重新注射。注射完毕抽出针头时，应压迫针孔，避免出血。兔耳静脉注射兔耳静脉注射其他静脉注射其他静脉注射 方法：方法：鸡的静脉注射 豚鼠静脉注射 犬静脉注射 猪耳静脉注射 马的静脉注射牛的静脉注射（二）注射（二）注射 (injection)(injection)6 脚掌注射脚掌注射7 脑腔注射脑腔注射（详见（详见兽医实验动物学兽医实验动物学第十章第二节第十章第二节“动物实验操作技术动物实验操作技术”）（三）吸入给药（三）吸入给药l吸入给药是非注射给药的重要方法，能将药物直接吸入给药是非注射给药的重要方法，能将药物直接输送到上呼吸道，或者肺部病灶区，并减少在其他输送到上呼吸道，或者肺部病灶区，并减少在其他组织的分布，同时也是跨越肺黏膜屏障进行非侵入组织的分布，同时也是跨越肺黏膜屏障进行非侵入全身给药的重要途径。全身给药的重要途径。l吸入给药主要采用喷雾方法。吸入给药主要采用喷雾方法。（四）滴鼻点眼接种（四）滴鼻点眼接种l鸡的滴鼻、点眼鸡的滴鼻、点眼l其他动物的鼻内或点眼接种其他动物的鼻内或点眼接种l接种量：小鼠接种量：小鼠 0.030.030.05ml0.05ml；大鼠；大鼠 0.050.050.1ml0.1ml；豚鼠；豚鼠和兔可达和兔可达2ml.2ml.（五）豚鼠或小鼠的角膜注射（五）豚鼠或小鼠的角膜注射涂擦、划痕、浸泡涂擦、划痕、浸泡等研究对皮肤、黏膜的吸收、致敏、光感等；直肠给药直肠给药对兔、犬、猫、猪等动物。（六）其他给药方法（六）其他给药方法豚鼠经局部麻醉后平卧，左眼朝上并固定好。操作者手持注射器，针头由角巩膜连接处的眼球顶部斜刺入，用力刺入角膜约为3mm深。由于眼球的转动，角膜可转到下眼睑内，达到要求深度后即可推液，注入量5l。五、实验动物麻醉技术五、实验动物麻醉技术(anesthetics)anesthetics)l利用物理或化学的方法，使动物的全身或局部暂时失去痛觉或痛觉迟钝，以减轻动物痛苦，减少动物挣扎，使实验操作得以顺利进行，这就是动物的麻醉技术麻醉技术(anesthesia)(anesthesia)。l动物的麻醉有全身麻醉、局部麻醉、针刺麻醉、复合麻醉、低温麻醉等多种方法，一般实验常选择全身麻醉法全身麻醉法和局部麻醉法局部麻醉法。（一）局部麻醉（一）局部麻醉 局部麻醉的方法有局部浸润麻醉、表面麻醉和神经局部麻醉的方法有局部浸润麻醉、表面麻醉和神经阻断麻醉等。阻断麻醉等。常用局部麻醉剂有盐酸普鲁卡因和利多卡因。这两常用局部麻醉剂有盐酸普鲁卡因和利多卡因。这两种麻醉剂的常用浓度均为种麻醉剂的常用浓度均为0.50.51 1。注药时应避免将麻醉剂误注入血管。注药时应避免将麻醉剂误注入血管。l普鲁卡因普鲁卡因是一种无刺激性的快速局部麻醉剂，对皮是一种无刺激性的快速局部麻醉剂，对皮肤和黏膜的穿透力较弱，需注射给药才能产生局部肤和黏膜的穿透力较弱，需注射给药才能产生局部麻醉作用。注射后麻醉作用。注射后l l3 3分钟内产生麻醉，可维持分钟内产生麻醉，可维持30304545分钟。分钟。l利多卡因利多卡因的局部麻醉作用比普鲁卡因强的局部麻醉作用比普鲁卡因强1010倍，但毒倍，但毒性也比前者强，常用于表面、浸润、传导麻醉和硬性也比前者强，常用于表面、浸润、传导麻醉和硬脊膜外腔麻醉。利多卡因能穿透黏膜，作用迅速，脊膜外腔麻醉。利多卡因能穿透黏膜，作用迅速，1 13 3分钟生效，持续分钟生效，持续60609090分钟。分钟。l黏膜麻醉、鼻、咽喉表面麻醉时也可用黏膜麻醉、鼻、咽喉表面麻醉时也可用2%2%盐酸可卡盐酸可卡因因。在进行兔眼球手术时，于结膜囊滴入。在进行兔眼球手术时，于结膜囊滴入0.02%0.02%盐酸盐酸可卡因溶液，数秒钟即可达到麻醉效果。可卡因溶液，数秒钟即可达到麻醉效果。（二）全身麻醉（二）全身麻醉l全身麻醉常用于较深部位或较大的手术时。全身麻醉常用于较深部位或较大的手术时。l麻醉药作用于中枢神经系统（脑和脊髓），使麻醉药作用于中枢神经系统（脑和脊髓），使其被抑制而呈现出意识消失、全身无疼痛感。其被抑制而呈现出意识消失、全身无疼痛感。l常用的全身麻醉方法有常用的全身麻醉方法有吸入麻醉吸入麻醉和和注射麻醉注射麻醉两两类。类。l吸入麻醉常用药物有乙醚、氯仿和氟烷类等挥发性吸入麻醉常用药物有乙醚、氯仿和氟烷类等挥发性麻醉药。麻醉药。l非吸入麻醉法（注射麻醉）常用药物有戊巴比妥钠、非吸入麻醉法（注射麻醉）常用药物有戊巴比妥钠、硫喷妥钠、乌拉坦、水合氯醛等麻醉药。硫喷妥钠、乌拉坦、水合氯醛等麻醉药。（二）全身麻醉（二）全身麻醉l l1 1 全身麻醉前的准备全身麻醉前的准备l全身麻醉前的准备工作包括麻醉药物与器械的全身麻醉前的准备工作包括麻醉药物与器械的准备、麻醉药剂量的准确计算、麻醉中毒解救准备、麻醉药剂量的准确计算、麻醉中毒解救药物的预备等。药物的预备等。l哺乳类实验动物和鸟类动物麻醉前应禁食哺乳类实验动物和鸟类动物麻醉前应禁食1010小小时时l2l2小时；大型反刍类动物麻醉前空腹时间小时；大型反刍类动物麻醉前空腹时间应长至应长至3636小时小时4848小时。小时。（二）全身麻醉（二）全身麻醉l l2 2 2 2 吸入麻醉吸入麻醉吸入麻醉吸入麻醉l吸入麻醉是用挥发性麻醉剂或气体麻醉剂使动物吸吸入麻醉是用挥发性麻醉剂或气体麻醉剂使动物吸入体内，达到麻醉的效果。入体内，达到麻醉的效果。l多选用乙醚，适用于大鼠、小鼠和豚鼠等小动物。多选用乙醚，适用于大鼠、小鼠和豚鼠等小动物。l其他常用的气体麻醉剂有氯仿、氟脘、甲氧氟脘、其他常用的气体麻醉剂有氯仿、氟脘、甲氧氟脘、环丙烷、一氧化氮等。环丙烷、一氧化氮等。l具体方法：（略）。具体方法：（略）。l在使用乙醚时应注意，乙醚易燃易爆，使用时应远在使用乙醚时应注意，乙醚易燃易爆，使用时应远离火源。离火源。（二）全身麻醉（二）全身麻醉l l3 3 3 3 注射麻醉注射麻醉注射麻醉注射麻醉l注射麻醉的方法有静脉注射、肌内注射、皮下注射注射麻醉的方法有静脉注射、肌内注射、皮下注射和腹腔注射，其中腹腔和静脉注射麻醉在实验室最和腹腔注射，其中腹腔和静脉注射麻醉在实验室最常采用。常采用。l常用的麻醉药有戊巴比妥钠、硫喷妥钠（戊硫巴比常用的麻醉药有戊巴比妥钠、硫喷妥钠（戊硫巴比妥钠）、水合氯醛、盐酸氯胺酮等。妥钠）、水合氯醛、盐酸氯胺酮等。l在腹腔和静脉麻醉时，一定控制药物的浓度和注射在腹腔和静脉麻醉时，一定控制药物的浓度和注射量。量。动物种类与麻醉方法的选择：动物种类与麻醉方法的选择：动动物物的的种种类类不不同同，选选择择麻麻醉醉方方法法也也不不尽尽相相同同。比比如如腹腹腔腔注注射射麻麻醉醉多多用用于于大大鼠鼠、小小鼠鼠和和豚豚鼠鼠；而而对对兔、犬、羊、猴等动物则多用静脉注射麻醉。兔、犬、羊、猴等动物则多用静脉注射麻醉。实验类型与麻醉方法的选择：实验类型与麻醉方法的选择：若若实实验验时时间间短短，可可以以给给予予吸吸入入性性麻麻醉醉或或短短效效静静脉脉麻麻醉醉等等。若若实实验验时时间间很很长长，选选择择静静脉脉输输液液连连续续麻麻醉醉比比选选择择肌肌肉肉和和腹腹腔腔注注射射麻麻醉醉更更好好。因因为为静静脉脉麻麻醉醉可可以以根根据据实实验验时时间间的的长长短短继继续续给给药药，延延长长麻麻醉醉时时间。间。（三）常用的麻醉剂（三）常用的麻醉剂 动动物物实实验验中中常常用用的的麻麻醉醉剂剂分分为为三三类类，即即挥挥发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂。发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂。常用实验动物全身麻醉药的用法与用量见下表。常用实验动物全身麻醉药的用法与用量见下表。常用麻醉药的用法与用量常用麻醉药的用法与用量麻醉药名 适用动物 给药途径 剂量(mg/kg)常配浓度(%)用药量(ml/kg)麻醉维持时间 戊巴比 犬,猫,兔 静脉 30 3 1.0 24h,中途加 妥钠 腹腔 4050 3 1.41.7 1/5量，可多 豚鼠 腹腔 40 50 2 2.02.5 维持1h以上 大小鼠 腹腔 45 2 2.3 鸟类 肌肉 50100 2 2.55.0 氨基甲 犬,猫,兔 腹腔,静脉 7501000 25 34 24h,主要适 酸乙酯 豚鼠 肌肉 1350 20 7.0 用于小动物。(乌拉坦)大,小鼠 肌肉 1350 20 7.0 有时可降低血 鸟类 肌肉 1250 20 6.3 压 蛙类 皮下淋巴囊 2000mg/kg 20 23ml/只 或400600mg/只 异戊 犬,猫,兔 静脉 4050 5 0.81.0 巴比妥 肌肉,腹腔 80100 10 0.81.0 鼠类 直肠 100 10 1.0 4-6h 腹腔 100 10 1.0 硫喷妥钠 犬,猫,兔 静脉,腹腔 2550 2 1.32.5 1530分,效力 大白鼠 静脉,腹腔 50100 1 5.010 强,宜慢注射 氯仿 各种动物 吸入 *实验过程中一直要吸入麻醉药维持，毒性大 乙醚 各种动物 气管内插管吸入 *实验中一直要吸入麻醉药维持（四）麻醉深度的判定和麻醉后动物护理（四）麻醉深度的判定和麻醉后动物护理 麻醉深度常用判定指标麻醉深度常用判定指标麻醉深度常用判定指标麻醉深度常用判定指标(j(judge indexudge index)轻度麻醉 中度麻醉（最佳麻醉）深度麻醉呼吸表现 不规则，由痛反射 规则的胸腹式呼吸,呼吸 腹式呼吸,换气量 可致呼吸数 数、换气量 明显循环表现 心率，血压 血压、心率一定 心率，血压 由痛反射可致心率眼的表现 有眼球运动,眼睑,对光 眼球置中央或靠近中央,眼睑对光,角膜反射 反射眼球向内下方,瞳 眼睑反射迟钝,对光反射 消失瞳孔散大,角膜 孔收缩,结膜露出,流泪 亦迟钝，瞳孔稍开大 干燥口腔反射 尚有咽下、喉头反射 无 无肌松弛 有 腹肌明显 腹肌异常运动其他表现 流涎、出汗，分泌多，内脏牵引引起的迷走神 排便、排尿 经反射，收缩反射消失 六、实验动物各种体液的采集方法六、实验动物各种体液的采集方法body fluid acquisitionbody fluid acquisition （一）血液的采集（一）血液的采集（一）血液的采集（一）血液的采集 (Blood collection)(Blood collection)重点讲述！重点讲述！重点讲述！重点讲述！（二）尿液的采集（二）尿液的采集（二）尿液的采集（二）尿液的采集（三）淋巴液的采集（三）淋巴液的采集（三）淋巴液的采集（三）淋巴液的采集（四）胸、腹腔液采集方法（四）胸、腹腔液采集方法（四）胸、腹腔液采集方法（四）胸、腹腔液采集方法（五）消化液采集方法（五）消化液采集方法（五）消化液采集方法（五）消化液采集方法（六）脑脊液和骨髓的采集（六）脑脊液和骨髓的采集（六）脑脊液和骨髓的采集（六）脑脊液和骨髓的采集（七）精液的采集方法（七）精液的采集方法（七）精液的采集方法（七）精液的采集方法（八）阴道内液体的采集（八）阴道内液体的采集（八）阴道内液体的采集（八）阴道内液体的采集（一）血液的采集（一）血液的采集l表表 常用试验动物的总血液量和推荐的最大采血量常用试验动物的总血液量和推荐的最大采血量品种（重量）品种（重量）血液总量血液总量7.5%（ml）10%（ml）15%（ml）20%（ml）小鼠（小鼠（25g）1.80.10.20.30.4大鼠（大鼠（250g）161.21.62.43.2兔（兔（4kg）22417223435犬（犬（10kg）8506485127170恒河猴恒河猴（5kg）28021284256短尾猿短尾猿(食蟹猴食蟹猴)（5kg）32524324965绒猴（绒猴（350g）252.02.53.55小型猪（小型猪（15kg）9757398146195（一）血液的采集（一）血液的采集鼠尾鼠尾鼠尾鼠尾静脉采血法静脉采血法静脉采血法静脉采血法 将鼠置于固定盒内，将鼠置于固定盒内，固定好，露出鼠尾用手固定好，露出鼠尾用手轻揉或用温水轻揉或用温水(45左右左右)加温，也可用二甲苯涂加温，也可用二甲苯涂擦鼠尾，使擦鼠尾，使尾静脉充血尾静脉充血后，用剪刀剪去尾尖，后，用剪刀剪去尾尖，尾静脉血即可流出，用尾静脉血即可流出，用手轻轻的从尾根部向尾手轻轻的从尾根部向尾尖部推挤，即可收集到尖部推挤，即可收集到少量血液。少量血液。小鼠的摘眼球采血小鼠的摘眼球采血 小鼠的静脉窦采血及静脉窦采血管制作小鼠的静脉窦采血及静脉窦采血管制作移液器移液器1ml枪头，在酒精灯火焰上边烤边枪头，在酒精灯火焰上边烤边拉伸，使枪头末端孔径约为拉伸，使枪头末端孔径约为0.51mm，然后用剪刀在孔径约然后用剪刀在孔径约1mm处以处以45角剪断，角剪断，即成为自制的静脉窦采血管。即成为自制的静脉窦采血管。大鼠后眼眶静脉丛采血法大鼠后眼眶静脉丛采血法 穿刺部位穿刺部位穿刺部位穿刺部位是在眼球和眼眶后界之间的后眼眶静脉丛。用10可卡因局部麻醉。小鼠心内取血方法小鼠心内取血方法兔的心脏采血兔的心脏采血兔的心脏采血和耳边沿静脉采血兔的心脏采血和耳边沿静脉采血 羊的颈静脉采血羊的颈静脉采血