玉米对二氧化硫胁迫响应的相关cDNA克隆与分析.pdf

西北植物学报，2 0 0 9，2 9(9)：1 7 3 6 1 7 4 1A e t aB o t B o r e a l-O c c i d e n t s 讯文章编号：1 0 0 0 4 0 2 5(2 0 0 9)0 9 1 7 3 6 0 6玉米对二氧化硫胁迫响应的相关c D N A 克隆与分析夏宗良1，周朋，武轲1，王美平1，李志敏2，吴建宇(1 河南农业大学生命科学学院，郑州4 5 0 0 0 2 1 2 河南农业大学农学院，郑州4 5 0 0 0 2)摘要：应用m R N A 差异显示技术，对高耐S O z 玉米自交系Q 9 进行了S O。胁迫下的基因差异表达分析。结果显示。3 0 对引物组合进行的P C R 扩增中，获得了1 3 条差异表达的c D N A 片段，其中3 条诱导表达，2 条增强表达，6条减量表达，2 条抑制表达。序列分析和数据库比对表明，G e n B a n k 中只搜寻到5 条e D N A 序列，其中2 条增强表达的c D N A 片段D l 和D 5 分别与氨基酸结合蛋白A B P、锌指结构转录因子蛋白D O F 部分序列高度同源，其他诱导表达的3 条c D N A(D 3、D 6、D 1 1)功能未知，可能是新的e D N A 片段。经半定量R T-P C R 分析验证，D 1 和D 5 转录水平受S 0 2 胁迫表达显著增强，推测D 1 和D 5 可能参与了玉米对S O。胁迫的抗性反应。关键词：二氧化硫胁迫；m R N A 差异显示；玉米中图分类号：Q 7 8 5文献标识码：AC l o n i n ga n dA n a l y s i so fD i f f e r e n t i a lc D N A sf r o mM a i z ei nR e s p o n s et oS 0 2S t r e s sX I AZ o n g l i a n 9 1，Z H O UP e n 9 1，W UK e l，W A N GM e i p i n 9 1，L IZ h i m i n 2，W UJ i a n y u l。(1C o l l e g eo fL i f eS c i e n c e s，H e n a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y，Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 2。C h i n a；2C o l l e g eo fA g r o n o m y，H e n a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y，Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 2。C h i n a)A b s t r a c t：E x p r e s s i o no fd i f f e r e n t i a lg e n e su n d e rS 0 2s t r e s sw a ss t u d i e di nS O z-t o l e r a n tm a i z ei n b r e dQ 9b ym R N Ad i f f e r e n t i a ld i s p l a yt e c h n i q u e T h er e s u l t ss h o w e dt h a t13d i f f e r e n t i a lc D N Af r a g m e n t sw e r ea m p l i-f l e df r o m3 0p a i r so fa n c h o rp r i m e r sa n dr a n d o mp r i m e r sc o m b i n a t i o n s，a m o n gw h i c he x p r e s s i o no f3c D N A sw e r ei n d u c e d，2c D N A sw e r eu p r e g u l a t e d，6c D N A Sw e r ed o w n-r e g u l a t e da n d2c D N A sw e r ei n h i b i t e du n d e rS 0 2s t r e s s S e q u e n c ea n a l y s i sa n dh o m o l o g ya l i g n m e n ts h o w e dt h a to n l y5c D N A sw e r ef o u n di nG e n B a n k，i nw h i c ht h eu p r e g u l a t e de x p r e s s i o ne D N AD 1h a d8 2 s i m i l a r i t yw i t ha na m i n oa c i d b i n d i n gp r o t e i n(A B P)a n dt h eu p r e g u l a t e de x p r e s s i o nc D N AD 5h a d91 s i m i l a r i t yw i t haD N Ab i n d i n gp r o t e i nw i t haz i n cf i n g e r(D o F)，a n do t h e r3e D N Af r a g m e n t sm i g h tb eu n k n o w nn e wg e n e s S e m i q u a n t i t a t i v eR T P C Ra n a l y s i sd e m o n s t r a t e dt h a tt h ee x p r e s s i o no fD 1a n dD 5w e r eu p r e g u l a t e ds i g n i f i c a n t l yb yS 0 2s t r e s si nt o l e r a n ti n b r e dQ 9，i n d i c a t i n gt h a tt h et w od i f f e r e n t i a lc D N A sD 1a n dD 5m a yb ei n v o l v e di nr e s i s t a n tr e s p o n s e so fm a i z ep l a n t st oS 0 2s t r e s s K e yw o r d s：s u l f u rd i o x i d es t r e s s；m R N Ad i f f e r e n t i a ld i s p l a y；m a i z e收稿日期：2 0 0 9 0 3 2 6；修改稿收到日期：2 0 0 90 9 0 7基金项目；国家自然科学基金项目(3 0 9 7 1 5 4 8)；教育部科学技术研究重点项目(2 0 8 0 8 0)作者简介：夏宗良(1 9 7 3 一)，男(汉族)。博士。副教授。硕士生导师，主要从事植物抗逆分子遗传学研究。E-m a i l：z o n g l i a n g x i a y a h o o C O m*通讯作者：吴建宇。教授博士生导师，主要从事玉米分子育种研究。E-m a i l：w u j i a n y u 4 0(雪1 2 6 c o r n 万方数据9 期夏宗良，等：玉米对二氧化硫胁迫响应的相关c D N A 克隆与分析二氧化硫(S O：)是当前主要的大气污染物，主要来源于煤、石油的燃烧及含硫矿石的冶炼等 1 。随着世界对能源和自然资源需求的增加，S O z 污染对生物和环境造成的危害日趋严重 2 。近年来，S 0 z 污染造成环境恶化，酸雨次数增多，并且由此诱发的生理性病害对农作物生产的危害也逐年增加，已成为制约作物产量和品质提高的重要因素 3 。玉米是中国第二大粮食作物，又是重要的饲料作物和工业原料。在中国的山西、河南等省一些煤矿、冶炼厂、火电厂、砖瓦厂及造纸厂附近的玉米种植区，常发生玉米因遭受S o：危害导致产量大幅下降甚至绝收的现象，成为影响玉米生产的突出问题f 4 。国内外学者对植物抗S O：胁迫机理的研究表明：植物对S o：的抗性主要通过两种代谢解毒机制来实现的：一是亚硫酸盐的氧化机制 5 6 3；二是自由基的清除机制 7 _ 1 1 。这些研究较好地阐明了植物对S O。胁迫抗性的生理生化基础，但缺乏直接的分子遗传学实验证据。m R N A 差异显示技术(m R N Ad i f f e r e n t i a ld i s p l a yr e v e r s et r a n s c r i p t i o n P C R，D D R T P C R)是一种筛选差异表达基因的有效方法。该技术自问世以来D z ，由于具有快速、灵敏度高、所需R N A 量少及霞复性高等优点，已成功运用于植物逆境胁迫 13|、激素调控 1 4 1 等基因的鉴定、筛选和克隆的研究，显示出强大而独特的作用。本研究拟以高耐S O。胁迫玉米自交系Q 9 为材料，采用D D R T-P C R 技术分离玉米中对S O z 胁迫响应的相关c D N A 片段，为深入理解玉米抗S O：胁迫的分子遗传机理和玉米抗环境污染(S O：、酸雨等)的遗传改良奠定基础。1 材料和方法1 1 植物材料培养和S O：熏气处理玉米优良自交系Q 9(本课题组培育)种子经0 1 的升汞消毒后，播于蛭石与营养土为1：1 的育苗盘中，在光暗交替周期为1 2h 1 2h、温度为2 4 2 6、湿度为6 0 的光照培养室中培养，待出苗后用1 2 浓度的H o a g l a n d 培养液浇灌，每周2次。待幼苗长至3 叶l 心(约1 4d)时，用于S o：熏气处理。S O。熏气采用静态熏气处理方式，在自制的密闭式玻璃缸内进行。熏气封闭缸容积为6 0c m 6 0c m X 6 5c m，容积为0 2 3 4m 3。玻璃缸内顶部装一小吊扇，开始熏蒸处理时打开风扇使S O z 浓度均一。S O：气体来自亚硫酸钠与4 倍稀释的硫酸反应的生成物，其反应式为N a：S O。+H z S O。(稀)一N a 2 S O。+H。O+S 0 2 十。精确称量N a 2 S 0 3 的量，硫酸采用2 倍体积的反应式需要量以保证反应进行的完全迅速。预实验确定了3 个熏蒸浓度：开始出现伤害的临界浓度6 0m g m X2h，急性伤害浓度1 2 0m g m-3 2h，急性严重伤害浓度2 4 0m gm _ 3 2h。对2 叶1 心的玉米幼苗进行1 2 0m gm _ 3 2h 熏气处理后0h 和2 4h 取样，取不同植株的同一部位叶片称重后置液氮中冻存备用。I 2 玉米叶片总R N A 提取和第一链c D N A 合成玉米幼苗叶片总R N A 的提取按照T R I Z O L(I n v i t r o g e n 公司)试剂盒说明书操作，总R N A 经D N a s e I(P r o m e g a 公司)处理后，以锚定引物进行反转录合成第一链c D N A。1 3 引物序列与m R N AD D R T-P C Rm R N AD D R T P C R 所用的锚定引物有3 条，D M l D M 3；随机引物有1 0 条，D S l，D S l 0(表1)。D D R T-P C R 扩增引物为3 条锚定引物与1 0 条随机引物共3 0 个引物对组合。以反转录合成的c D N A第一链为模板，P C R 反应程序为：9 4 预变性5m i n；9 4 变性4 5S，5 2 退火4 5S，7 2 延伸1m i n，1 5 个循环；9 4 变性4 5S，6 0 退火4 5S，7 2 延伸1m i n，2 0 个循环；7 2 延伸1 0m i n。表1D D R T-P C R 所用的锚定引物和随机引物序列T a b l e1S e q u e n c e so fa n c h o r e dp r i m e r sa n dr a n d o mp r i m e r su s e di nD D R T-P C R引物名称引物序列P r i m e rn a m eP r i m e rs e q u e n c e(5 -3)A C G A C T C A C T A T A G G G C T T T T T T T T T T T CA C G A C T C A C T A T A G(；G C T T T T T T T T T T T T GA C G A C T C A C T A T A G G G C T T T T T T T T r T T T AA C A A T T T C A C A C A G G A G T T G C G A T C CA C A A T T T C A C A C A G G A A C G G A C G T C AA C A A T T T C A C A CA G G AG A T C G C A T T GA C A A T T T C A C A C A G G A T A C A A C G A(；GA C A A T T T C A C A C A G G A G G T A C T A A G GA C A A T T T C A C A C A G G A T(X；G T C A T A GA C A A T T T C A C A C A G G A G A T G C C A G A CA C A A T T T C A C A C A G G A G G A T G C C A C TA C A A T T T C A C A C A G G AA G C C A G c G A AA C A A T T T C A C A C A G G A C T T T G G C T C C1 4D D R T-P C R 产物凝胶电泳和差异片段的回收、克隆、测序及序列分析D D R T P C R 产物经3 琼脂糖凝胶电泳分离后，差异片段用凝胶纯化试剂盒回收，与p G M Te a s yv e c t o r(p r o m e g a 公司)连接，转化大肠杆菌洲眦呲嘲晚嘴嗽嘶l嘟嘞嘞啪 万方数据1 7 3 8西北植物学报2 9 卷(E s c h e r i c h i ac o l i)D H l O B，鉴定后送往上海博尚生物工程公司测序。对测序结果提交G e n B a n k，利用B I。A S T(h t t p：b l a s t n c b i n l m n i h g o v B l a s t c g i)进行序列同源性分析和功能预测。1 5 差异片段D I 和D 5 在s 0 2 胁迫下的R T-P C R表达分析采用半定量R T P C R 分析D 1 和D 5 片段在S O。气体胁迫处理后的玉米叶片中的表达丰度。扩增D 1 的特异性引物为：D 1-F 1：5 一G A G C G A G A T C A C C A C G G A G A(、-37；D 1 一R 1：5 -C G G G A G G T T G A G G A A G A T G C-3，产物长度为3 5 0b p；扩增D 5的特异性引物为：5 一C G T A T T T A T T A T C G C C T T C A T C G C 一37：5 -G G G T A A A T C A A G A A A A C A G C A G T A G C 一3，产物长度为3 2 0b p。以玉米A c t i n l为内参基因1 5 ，P C R 引物为：A c t i n F：5 -G G C A G C-T C G T A G C T C T T C T C 一37；A c t i n-R：57 一A A C A G G G A G A A G A T G A C C C A 一3，产物长度为5 7 4b p。半定量R T-P C R 分析的R N A 样品来自3 批独立的S O。胁迫处理的玉米叶片，D 1 和D 5 基因片段表达水平的分析进行了2 3 次的重复，都获得了相似的结果。2 结果与分析2 1总R N A 提取与检测玉米幼苗经1 2 0m g m _ 3 2h 熏气处理后，利用T R I Z O L 试剂盒提取0h(立即取样)和2 4h 后的叶片总R N A，经D N a s e l 处理纯化后，进行1 2 的变性琼脂糖凝胶电泳检测。4 个样品的2 8、1 8 和5 S3 条r R N A 带清晰，各种不同长度的m R N A 形成连续的弥散带，表明R N A 的完整性良好(图1)。A z。A 2。的值在2 0 i t 右，说明各个样品的总R N AO hC KT R2 4hf KT R一2 8S一1 8S一5S图1 总R N A 样品的变性琼脂糖凝胶电泳检测C K 对照；T R 处理F i g 1D e t e c t i o no ft o t a lR N As a m p l e sb yd e n a t u r e da g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i sC K C o n t r o lIT R T r e a t e d纯度较高，可用作逆转录的模板。2 2S O：胁迫处理后玉米基因表达差异分析利用3 条37 端锚定引物与1 0 条5 端随机引物共3 0 个引物对组合，对S 0 z 胁迫处理后0h 和2 4h及对照的逆转录c D N A 模板进行P C R 扩增，均能扩增出特异条带。为了保证实验的重复性和可靠性，我们进行了3 次独立的处理，对同一批处理的样品c D N A 都利用引物组合对进行了3 次P C R 扩增，选取表达差异稳定的条带进行克隆测序。每个引物组合一般扩增3 1 0 条带，长度在1 0 0 5 0 0b p 之间。其中，胁迫处理与对照之间的差异条带有1 3条，包括诱导表达的3 条，增强表达的2 条，减量表达的6 条，抑制表达的2 条。图2 是引物组合D S l D M l、D S 3 D M l、D S 4 D M 2 和D S 6 D M 3，分别对S O：胁迫处理后的0h 和2 4h 及对照的逆转录c D N A 模板的扩增结果。在引物组合D S 3 D M l 扩增的条带中，有1 个约1 8 0b p 的特异条带，在S 0 2 胁迫处理后0h 和2 4h 比对照表达显著增强，将这一胁迫处理诱导增强表达的条带命名为D 1。在引物组合D S 4 D M 2 扩增的条带中，有1 个约2 4 0b p 的特异条带，在S o：胁迫处理后0h 表达无显著变化，但在处理后2 4h 表达显著增强，将这一诱导增强表达的条带命名为D 5(图2)。其他引物组合获得的1 1 个差异片段和D 1、D 5 经克隆和测序后，提交G e n B a n k 和M a i z e s e q 进行搜寻和功能预测。2 3 差异表达基因片段的序列分析对获得的1 3 个差异表达序列提交G e n B a n k 和M a i z e s e q，进行同源性搜寻、比对和功能预测，只有D 1、D 3、D 5、D 6 和D 1 1 等5 条序列找到同源序列(表2)，D 2、D 4、D 7 D 1 0、D 1 2、D 1 3 等8 条序列没有找到。在搜寻到的5 条c D N A 序列中，只有增强表达的D 1 和D 5 与已知功能基因同源性较高，其他诱导表达的D 3、D 6、D l l 等3 条c D N A 功能未知，可能是新基因。在诱导增强表达的两个c D N A 片段中，D l 与已知编码氨基酸结合蛋白A B P 的相似性达8 2，D 5 与已知编码D O F 锌指转录因子蛋白的相似性达9 1，这表明我们克隆的两个表达诱导增强的差异c D N A 克隆分别编码A B P 和D O F 蛋白(表2)。2 4 差异表达基因片段D I 和D 5 的R T-P C R 表达验证为了验证差异片段D 1 和D 5 的表达，利用D 1对应的c D N A 序列(基因登录号：B T 0 3 9 8 6 0)和D 5 对应的c D N A 序列(基因登录号：D Q 4 9 0 9 6 5)设计基 万方数据9 期夏宗良，等：玉米对二氧化硫胁迫响应的相关e D N A 克隆与分析1 7 3 92 5 0 b p 1 0 0 b p+D Sl D M1D S 3 D MlD S 4 D M 2D$6 D M 3O h2 4 h0 h2 4hO h2 4 h0 h2 4 hTCT(、TCTfTCT(、TCTf图2引物组合D s l D M l、D S 3 D M l、D S 4 D M 2 和D S 6 D M 3 的D D R T-P C R 扩增结果C 对照；T S 0 2 处理；实方框D 1 条带；虚方框D 5 条带F i g 2R e s u l t so fD D R T P C Rw i t hp r i m e rc o m b i n a t i o n sD S l D M l，D S 3 D M l，D S 4 D M 2a n dD S 6 D M 3c C o n t r o l；T S O zt r e a t m e n t；S o l i db o x D 1；D a s h e db o x D 5表2D D R P C R 分离的受S 0 2 胁迫诱导差异表达的部分e D N A 的特征T a b l e 2B I，A S T Xs e a r c hr e s u l t so fd i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dc D N A su n d e rS 0 2s t r e s si s o l a t e db ym R N AD D R T-P C RA0 h2 4hC KT RC KT RD lA c t i nBO h2 4 hC KT RC KT RD 5A c t i n图3 差异e D N A 片段D 1 和D 5 在玉米幼苗受S O：胁迫后的表达验证A 差异e D N A 片段D 1 在S 0 2 胁迫后的玉米幼苗中表达的半定量R T P C R 分析；B 差异c D N A 片段D 5 在S 0 2胁迫后的玉米幼苗中表达的半定量R T P C R 分析；玉米A c t i n l 为参照基因；C K 对照；T R 处理F i g 3E x p r e s s i o nv a l i d a t i o no fe D N Af r a g m e n t sD 1a n dD 5i nm a i z es e e d l i n g sa f t e rS 0 2e x p o s u r eA S e m i q u a n t i t a t i v eR T P C Ra n a l y s i so ft r a n s c r i p t i o nl e v e l so fD 1i nm a i z es e e d l i n g ss a m p l e di m m e d i a t e l ya f t e rS O ze x p o s u r e(0h)a n d2 4hl a t e r；B S e m i q u a n t i t a t i v eR T-P C Ra n a l y s i so ft r a n s c r i p t i o nl e v e l so f 9 5i nm a i z es e e d l i n g ss a m p l e di m m e d i a t e l ya f t e rS O ze x p o s u r e(0h)a n d2 4hl a t e r；I n t e r n a lc o n t r o l sw e r eb a s e do na m p l i f i c a t i o no ft h ec o n s t i t u t i v e l ye x p r e s s e dA c t i n lg e n e；C K C o n t r o l；T R T r e a t m e n t因特异性引物，通过半定量R T P C R 进一步验证其表达。结果表明：在S O。胁迫处理后0h 和2 4h 的玉米幼苗中，D 1 的表达水平比对照显著增强，且处理后0h 增幅较大。表明差异片段D 1 确实受S O z胁迫诱导增强表达(图3，A)，这一结果与D D R T P C R 的结果一致。与之相比，D 5 的表达水平在处理后0h 与对照相当，没有明显的增强，但在处理后2 4h 比对照显著增强(图3，B)。这与D D R T P C R的结果基本吻合。这一结果进一步证实差异e D N AD 1 和D 5 可能参与了玉米对S O。胁迫的抗性反应。万方数据西北植物学报2 9 卷5l 习7 B本实验采用m R N A 差异显示技术，从高耐S O。玉米自交系Q 9 中获得了1 3 条差异表达的c D N A片段，在G e n B a n k 中搜寻到5 条c D N A 序列，其中2 条增强表达的c D N A 片段与已知功能基因同源性较高，其他诱导表达的3 条c D N A 功能未知，可能是新基因。m R N A 差异显示技术是一种筛选差异表达基因的有效方法，但它最大缺点是假阳性率较高。为减少“假阳性”的比例，本实验做了以下改进：一是保证实验样品的总R N A 的质量。对处理后的植物样品提取总R N A 后，都要经过严格的D N a s e 处理以去除D N A 污染，并以反转录前的R N A 样品进行内标基因的扩增，检查D N A 去除是否彻底，确保R N A 样品的纯度，减少后续工作中的“假阳性”。二是在随机引物和锚定引物设计时，在锚定引物57 端1 1 个多聚T 前加了T 7R N A 聚合酶启动子序列的1 7 个碱基，在随机引物1 0 个随机碱基的5 端加了M 1 3 p u c 反向序列的1 6 个碱基，将P C R 反应退火温度提高至5 2，以增加扩增的特异性。三是选取差异片段时，经3 次以上重复实验在处理中表达有差异的片段(以未处理为对照)进行回收、测序，并根据测序结果设计基因特异性引物进行半定量R T P C R 重新验证，大大较低了“假阳性”率。通过I)I)R T P C R 方法分离得到了1 3 条受S O z胁迫响应的差异e D N A 条带，对其测序结果在不同的数据库中进行B L A S T X 比对，发现D l 与已知编码氨基酸结合蛋白A B P 高度同源 1 6 1 川，D 5 与已知编码锌指结构转录因子蛋白D O F 有高度同源，且经半定量R T P C R 验证，其转录水平受S O z 胁迫表达显著增强。已有研究表明，D O F 转录因子蛋白参与了植物对逆境胁迫的抗性反应1 8 ，本研究中获得的差异表达增强片段D 5 可能也参与了玉米对S O z 胁迫的抗性反应。另外3 个(D 3、D 6 和D 1 1)未找到同源蛋白，推测其为新的基因片段。本实验分离到的差异表达的e D N A 片段较少，不一定能代表差异表达基因的全部信息。因此，还需结合其他方法如c D N A-A F L P、S S H 等进一步挖掘对S O：胁迫响应的相关基因，并利用R A C E 或其他方法获得差异表达片段的全长e D N A，对其进行进一步的功能鉴定，为从分子水平上更好地认识玉米抗S O：胁迫的分子遗传机理奠定基础。参考文献：1 B R U C E N，P E R E Z P A D I I 上A R，A L B A L A K R I n d o o ra i rp o l l u t i o n i nd e v e l o p i n gc o u n t r i e s：a m a j o re n v i r o n m e n t a la n dp u b l i ch e a l t he h a l l e n g e J B u l l W o r l dH e a l t hO r g，2 0 0 0，7 8(9)：10 7 8 10 9 2 2 3A G R A W A LM，S I N G HB，R A J P U TM。M A R S H A I。I。F，B E L I。JN E f f e c to fa i rp o l l u t i o no np e r i u r b a na g r i c u l t u r e：ac a s es t u d y J E n v i r o n P o l l u t i o n，2 0 0 3，1 2 6(3)：3 2 3 3 2 9 I s R A J P U TM，A G R A W A LM B i o m o n i t o r i n go fa i rp o l l u t i o ni nas e a s o n a l l yd r yt r o p i c a ls u b u r b a na r e au s i n gw h e a tt r a n s p l a n t s J E n v i r u n M o n A s s e$。2 0 0 5。1 0 1(3)：3 9 5 3 4 3C A()HF(曾洪法)A i rp o l l u t i o na n di t se f f e c t so np l a n t si nC h i n a J A c t aE c o l o g i c aS i n i c a(生态学报)，1 9 9 0，1 0(3)：8 1 2(i nC h i n e s e)5 S I L V I U SJE I N G L EM B A E RCH S u l f u rd i o x i d ei n h i b i t i o no fp h o t o s y n t h e s i si ni s o l a t e ds p i n a c hc h l o r o p l a s t s J P l a n tP h y s i 0 1，1 9 7 5，5 6(4)：4 3 4 4 3 7 6 3Q I A NYC H(钱永常)，Y US Hw(余叔文)O x i d a t i o no fs u l f u rd i o x i d eo np l a n t sa n da n t i o x i d a t i o no fp l a n t s J P l a n tP h y s i 0 1 C o m m u n(植物生理学通讯)，1 9 9 1，2 7(5)：3 2 6 3 3 1(i nC h i n e s e)7 3M A D A M A N c H INR，A L S C H E RRG M e t a b o l i cb a s e sf o rd i f f e r e n c e si ns e n s i t i v i t yo ft w op e ac u l t i v a r st os u l f u rd i o x i d e J P l a n tP h y s i 0 1，1 9 9 1，9 7(1)：8 8 9 3 8 Y US Hw(余叔文)，L I U Y(刘愚)。L I z H G(李振国)，w u Y M(吴有梅)，Y A N G H D(杨惠东)S t u d i e so f t h er e s p o n s ea n dr e s i s t a n c eo fp l a n t st os u l f u rd i o x i d e V T h ec o r r e l a t i o nb e t w e e nt h er e s i s t a n c eo fp l a n t st Os u l f u rd i o x i d ea n dP h J A c t sP I l y f o p y s i o z D g 缸S i n i c a(植物生理学报)，1 9 8 0 6(3)：3 4 5 3 5 1(i nC h i n e s e)9 Y UZw(俞子文)，T A NC H(谭常)。Y A N GHD(杨惠东)。Y US Hw(余叔文)S t u d i e so ft h er e s p o n s ea n dr e s i s t a n c eo fp l a n t st Os u l f u rd i o x i d e S u l f u rd i o x i d ei n j u r ya n dt h ei n c r e a s eo fm e m b r a n el i p i dp e r o x i d e s J A c t aP h y t o p h y s i o l o g i aS i n i c a(植物生理学报)，1 9 8 1。7(1)：5 7 6 5(i nC h i n e s e)万方数据9 期夏宗良，等：玉米对二氧化硫胁迫响应的相关e D N A 克隆与分析1 7 4 1D 0 2T A N C H(谭常)，L I U Y(刘愚)，L IZ H G(李振国)，Y u z w(俞予文)，Y A N G H D(杨惠东)，Y U S H w(余叔文)S t u d i e so f t h er e s p o n s ea n dr e s i s t a n c eo fp l a n t st os u l f u rd i o x i d e 一一V 1 P r o t e c t i v ee f f e c to ff r e er a d i c a l s c a v e n g e r sa g e n t sS 0 2i n j u r y J ,A c t sS c i e n t i a eC i r c u m s t a n t i a e(环境科学学报)，1 9 8 1，3(2)：1 9 7 2 0 6(i nC h i n e s e)1 1 S H I M A Z A K IK。S A K A IT，K O N D ON，S U G A H A R AK A c t i v eo x y g e np a r t i c i p a t i o ni nc h l o r o p h y l ld e s t r u c t i o na n dl i p i dp e r o x i d a t i o ni nS 0 2 f u m i g a t e dl e a v e so fs p i n a c h J P l a n t C e l lP h y s i 0 1，1 9 8 0 2 1(7)1 1 9 3 2 0 4 1 2 3L I A N GP，P A R D E EA1 3 D i f f e r e n t i a ld i s p l a yo fe u k a r y o t i cm e s s e n g e rR N Ab ym e a n so ft h ep o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n J S c i e n c e，1 9 9 2，2 5 7(50 7 2)：9 6 7 9 7 1 1 3 P A R KJH，O HSA，K I MYH，W O OHR，N A MHG D i f f e r e n t i a