恶性血液病治疗前后T细胞亚群和NK细胞活性测定分析.pdf
论著恶性血液病治疗前后T细胞亚群和N K细胞活性测定分析陆紫敏,顾凤英,申远,吴金莺(同济大学附属同济医院、血液内科、肿瘤实验室.上海200065)摘要 目的 检测46例恶性血液病患者化疗前后外周血T细胞亚群及NK细胞活性,观察胸腺肽免疫功能。方法 应用单克隆抗体和流式细胞仪。结果(1)恶性血液病患者各项免疫活性细胞表达均低于对照组;(2)晚期和复发型恶性血液病患者各项免疫指标均低于初发型恶性血液病;(3)AL各项免疫指标明显低于其它恶性血液病;(4)治疗后A、B两组比较;A组的NK细胞活性明显高于B组,A组治疗后CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞活性明显高于治疗前。结论 T细胞亚群、NK细胞活性在恶性血液病患者中受到抑制并随病情程度而进一步加剧,其中AL患者受抑更甚,胸腺肽能明显提高恶性血液病患者的细胞免疫功能,尤其对NK细胞,它是一种低毒高效的生物反应调节剂。关键词 恶性血液病:T细胞亚群;NK细胞活性;胸腺肽中图分类号R733.73文献标识码A文章编号1005-8664(2002)02-0014-03Determination of T cell subsets and NKcell activity before and after treatment in malignant hemopathic patientsLU Zi2min,GU Feng2ying,SHEN Yuan,et al.Affiliated Tongji Hospital of Shanghai Tongji University,Shanghai 200065,China AbstractObjectiveTo determine the peripheral blood T cell and NKcell activity in 46 cases of malignant hemopathicpatients before and after chemotherapy,and to observe thymopeptides(TP)immune function.MethodsThe activities of pe2ripheral blood T cell subsets and NK cell were determined with monoclonal antibody and flow cytometry.Results(1)The im2mune indexes of malignant hemopathic patients were lower than those of the control group.(2)The immune indexes of the ad2vanced and recurrent malignant hemopathic patients were lower than those of first occurredpatients.(3)The immune indexes ofthe acute leukemia were obviously lower than those of any other malignant hemopathy.(4)After treatment,the NKcell activityin A group was significantly greater than that of B group.There was a statistically significant increase in CD+3and CD+4cells,ra2tio of CD+4/CD+8and NK cell activity after treatment.ConclusionThe activity of T cell subsets and NK cell in malignanthemopathic patients was further inhibited with the advancing of illness.The suppression on acute leukemia patients is more sig2nificant.The thymopeptides can significantly improve the cell immune function of malignant hemopathic patients,particularly forNK cell.It is a highly effective biological2response2regulator with few side effects.Key wordsmalignant hemopathy;T cell subsets;NK cell activity;thymopeptidesT淋巴细胞亚群作为机体免疫防御体系重要部分,而N K细胞作为一种天然免疫活性细胞,在肿瘤的发生发展上同样起着重要作用,近年来已有报道。胸腺肽是体内胸腺细胞分裂和增殖的必需要素,它可促使骨髓产生的干细胞在胸腺内发育成成熟的T细胞。本文采用双荧光标记单克隆抗体和双激光型流式细胞仪对46例恶性血液病患者在治疗前后外周血进行联合测定T细胞亚群和免疫活性细胞,以进一步探讨患者细胞免疫状况与肿瘤关系,同时应用胸腺肽,为恶性血液病免疫治疗及判断予后提供依据。材料与方法一、检测对象:观察组:选择住院的恶性血液病患者46例,其中男18例,女28例,年龄2083岁,平均收稿日期:2001-01-09作者简介:陆紫敏(1960-),女,浙江宁波人,学士,副主任医师,从事血液内科专业。52岁。均经骨髓细胞学、组化染色、生化或病理活检确诊。本组急性白血病(AL)18例,多发性骨髓瘤(MM)8例,恶性淋巴瘤14例,慢性白血病(CL)6例,以上病人分别采用COMP,CHOP,VAP,VDP,DA等联合化疗方案进行全身化疗。将患者随机分为A、B两组,A组25例,白血病13例,MM 4例,淋巴瘤8例,A组为化疗+胸腺肽治疗组。B组21例,白血病11例,MM 4例,淋巴瘤6例,B组为单纯化疗。所有病例在化疗前后一周内采血检测;所有患者在本次治疗前3周内未接受过抗肿瘤治疗。对照组:为同期住院的非肿瘤患者38例,男21例,女17例,年龄2870岁,平均48.3岁,其中缺铁性贫血(IDA)10例,巨幼细胞性贫血6例,急性支气管炎11例,淋巴结炎3例,原发性血小板减少性紫癜(ITP)7例,传染性单核细胞增多症1例。二、研究方法:46例患者分别采用COMP、CHOP、HAD等方案,均21天为一周期,A、B两组患者均化疗41中国肿瘤临床与康复 2002年第9卷 第2期一周期,A组患者开始化疗时即加用胸腺肽100mg(西安长城制药厂生产),每日静滴连续21天为一疗程。三、检测方法:采血1ml放入肝素抗凝管中摇匀,取100l全血,分别加入CD32FITC、CD42FITC、CD82PE、CD16+CD562FITC各20l进行双荧光染色,室温孵育40分钟,加溶血素50l后,室温置放30分钟,加生理盐水1ml置放15分钟,离心取沉淀物,再加生理盐水5001,用Bryle2Hs流式细胞仪检测,记录阳性细胞百分率,减去非特定对照值。四、统计学处理:各项数据均用?XS表示,两组间参数比较采用t检验,治疗前后比较采用配对资料t检验。结 果一、恶性血液病化疗前与对照组T细胞亚群和N K细胞活性测定值比较(见表1),肿瘤组的CD3、CD4、CD4/CD8、N K细胞活性较对照组降低(P 0.01)有显著意义,CD8细胞高于正常。二、恶性血液病临床病情变化与T细胞和N K细胞活性变化,初发患者较对照组的CD3、CD4、CD4/CD8、N K细胞活性均低,有显著差异(P 0.01),完全缓解患者较对照组的T细胞亚群无明显变化,而N K细胞活性明显高于对照组(P 0.05),有显著差异。晚期和复发病人CD3、CD4、CD4/CD8、N K细胞活性明显低于对照组及其它两组。见表2。表1 恶性血液病化疗前与对照组T细胞亚群和NK细胞活性测定值(?XS)组 别例数CD3CD4CD8CD4/CD8NK血 液肿瘤组4643.145.3225.804.4127.213.710.940.258.961.23对照组3863.474.1535.833.2023.022.141.530.1213.210.89P 0.01 0.01 0.01 0.01表2 临床病情与T细胞亚群和NK细胞活性变化(?XS)病例例数CD3CD4CD8CD4/CD8NK初发型1440.748.643 319.766.213 325.123.210.780.433 38.071.103 3晚期和复发2228.618.263 316.245.313 324.903.420.610.523 37.141.233 3完全缓解1064.707.1334.813.2722.323.1631.560.3117.532.03对照组3863.474.1535.833.2023.022.141.530.1213.210.893与对照组比较P 0.053 3P 0.01明显高于对照组P 0.05三、恶性血液病临床类型与T细胞亚群和N K细胞活性关系比较(见表3),AL组CD3、CD4、CD4/CD8、N K细胞活性均明显低于对照组及其它类型恶性肿瘤;CL、MM的CD4、N K细胞活性较对照组下降有差异(P 0.05和P 0.01),淋巴瘤组CD3、CD4、N K细胞活性均明显低于对照组。四、治疗前,A、B两组各项指标均无差异,A组治疗后,CD3、CD4、CD4/CD8、N K细胞活性明显高于治疗前,B组治疗前后各项指标无明显差异,治疗后A组N K细胞活性明显高于B组。表3 临床类型与T细胞亚群和NK活性变化(?XS)类型例数CD3CD4CD8CD4/CD8NK淋巴瘤1448.413.143 328.605.213 324.102.461.180.5239.432.373 3AL1812.142.793 38.532.633 316.841.403 30.560.213 35.414.323 3CL660.184.1731.364.223 327.301.511.120.3738.221.853 3MM858.214.65330.702.62325.302.311.260.6410.321.033 3对照组3863.474.1535.833.2023.022.141.530.1213.210.893与对照组比较P 0.053 3P 0.01讨 论近年来人们已注意到抗肿瘤免疫反应主要是细胞免疫反应,其中T细胞亚群起着主导作用,N K细胞能够杀伤肿瘤细胞,在免疫监视中也起着主要作用,本研究应用流式细胞检测发现恶性血液病外周血CD3、CD4、CD4/CD8比值、N K活性细胞均明显下降,显著低于对照组,CD8上升高于对照组(见表1),说明了恶性血液病患者细胞免疫功能出现不同程度的抑制,这可能与癌细胞产生大量免疫抑制因子有关1,同时,本研究发现CD3、CD4、CD4/CD8比值、N K细胞活性在晚期和复发型的恶性血液病患者较初发型患者减少更为明显(见表2);而完全缓解组恶性血液病患者CD3、CD4值与对照组无明显差异(见表2),这表明随着恶性血液病临床病程的进展,其机体细胞免疫功能受到进一步的抑制和破坏,其结果更使肿瘤增殖2,这与近年来有关肺癌等患者T细胞亚群紊乱,细胞免疫受损3报道相一致,有关恶性血液病报道尚不多见。本研究还发现完全缓解患者N K细胞活性和上升与对照组比较有明显差异(P 0.05)(见表2),作者认为:N K细胞活性上升反映其直接杀伤肿瘤细胞的能力,有研究认为N K细胞在形态上类似大颗粒淋巴细胞(L GL),而L GL数与N K细胞活性的相关性随不同疾病和疾病的不同阶段而变化4,由于恶性血液病与淋巴系统有密切的关系,因而显示恶性血液病患者N K细胞活性变化更显著。恶性血液病患者外周血T细胞亚群和N K细胞随病情不同阶段出现特征性改变,这一定量检测结果对恶性血液病判断预后、指导评估起辅助作用。引起恶性血液病的因素很多,其中机体免疫机能失调是很重要的因素之一,本文恶性血液病按临床不同类型进行T细胞亚群和N K细胞活性测定发现AL组CD3、CD4、CD4/CD8比值、N K细胞活性均明显低于51中国肿瘤临床与康复 2002年第9卷 第2期其它类型恶性血液病,更低于对照组(见表3)。这提示AL患者机体免疫功能紊乱程度较其它恶性血液病更严重。有研究认为,当肿瘤处于相对早期,未侵及淋巴系统时,机体通过减少CD8细胞在一定程度上提高机体自身对肿瘤的免疫能力,一旦侵及淋巴系统,机体这一功能将会受到打击而减弱4,这提示了AL可能较其它类型恶性血液病更早更密切接触淋巴系统,以致CD8增多,CD3、CD4、CD4/CD8比值、N K细胞活性下降更显著。因此,对于判断恶性血液病的类型,T细胞亚群和N K细胞活性的定量测定指标可以作为一个参考。肿瘤患者伴有细胞免疫功能低下,化疗进一步抑制了已经降低的免疫功能,有研究认为胸腺肽可以增强肿瘤治疗效果及疫苗接种的效果5。胸腺肽治疗肿瘤疾病主要是通过调节T细胞功能来增强机体的免疫效应。本文将其中25例恶性血液病患者化疗同时应用胸腺肽并动态观察化疗前后的T细胞亚群和N K细胞活性,与单纯化疗组进行对照。研究结果表明,化疗同时应用胸腺肽组CD3、CD4、CD4/CD8比值、N K细胞活性均明显高于化疗前以及单纯化疗组化疗后的水平。单纯化疗组化疗后较化疗前相比:CD3、CD4、N K细胞虽有一定升高,但无统计学意义。这就提示胸腺肽有明显提高恶性血液病患者的免疫功能,有研究认为,化疗后CD3、CD4和N K细胞活性升高者可能与肿瘤细胞大量坏死所产生的免疫抑制因子减少有关6。当然细胞毒性药物对这些免疫活性细胞有直接杀伤作用,而化疗同时应用胸腺肽来进一步保护增强这些免疫活性细胞,一方面以保证化疗的预期进行,另一方面通过调动提高机体免疫活性细胞达到机体免疫功能良性循环。胸腺肽副作用少,本组25例应用胸腺肽后无不良反应出现,这对临床综合治疗恶性血液病提供了新的途径,尤其对缓解后恶性血液病患者用免疫机制进一步治疗有待随访探讨。参 考 文 献1 王中和、吴直江、陆顺娟等.头颈部癌患者手术及放疗前后T细胞亚群变化及其预后价值J.实用口腔医学杂志,1994,10(4):235.2 Ohovada S.Peripheral blood T cell subsets as a prognosticfactor in gastric cancerJ.Jpn J Clin Oncol,1994,24:7.3 陈伟强、张世能.肝癌患者治疗前后T细胞亚群和SIL22R水平的变化J.上海免疫学杂志,1998,18(4):238.4 朱理玮、李克敏、薛承锐.乳腺癌患者T细胞亚群变化的定量检测及其临床意义J.中国肿瘤临床,1994,21(3):209.5Goldstein AL.Clinical applications of thymosin alpha21J.Cancer Invest,1994,12(5):545.6 尹浩然、朱正纲、陈雪华等.进展期胃癌患者手术前后自然杀伤细胞活性及T细胞亚群变化的研究J.中华消化杂志,1992,12(5):276.小儿急性白血病外周血自然杀伤细胞的变化及临床意义王积岚(盐城市城区人民医院儿科.江苏224001)中图分类号R733.71文献标识码B文章编号1005-8664(2002)02-0016-01 我们于1997年5月1999年6月对20例小儿急性白血病进行了NK细胞活性检测,现报告如下。资料与方法 一、检测对象:本组急性白血病20例,根据临床、骨髓及细胞组化染色检查确诊。均为初发者,男13例,女7例,年龄413岁。其中急性非淋巴细胞性白血病15例,急性淋巴细胞性白血病5例,经化疗后完全缓解者9例,复发者5例。对照组:正常健康儿童27例,男12例,女15例,年龄513岁。二、NK细胞活性检测:取病儿及正常儿童外周血用肝素抗凝,按常规方法分离单个核细胞(PBMC)计活细胞数,用1640培养液调细胞数为5106/ml备用。靶细胞为传代24小时的K526细胞,效靶比为501,在96孔微量板中反应,置37、5%CO2孵箱中培养4小时,计算NK细胞活性。计算公式:NK细胞活性(%)=(试验孔OD值-自然释放孔OD值)(最大释放孔OD值-自然释放孔OD值)100%结果:急性白血病20例(初发组)NK细胞活性为(10.794.51)%,与对照组27例NK活性为(26.569.69)%,P 0.05,有显著差异。收稿日期:2001-08-23作者简介:王积岚(1950-),女,江苏盐城人,主治医师,从事儿科专业。结果表明:初发期患者NK细胞活性明显下降,通过化疗病情缓解后NK活性显著上升,但未达到正常水平,当病情复发时NK活性又显著下降。讨论 结果表明,急性白血病患儿NK细胞活性明显下降与对照组相比有显著性差异(P 0.05)。急性白血病是属于造血干细胞恶性增殖性疾病,而NK细胞来源于骨髓干细胞,因此当白血病时,NK的数量及质量势必受到影响,其它如化疗影响,体内产生干扰素及IL22的水平低下等,也都可能是NK细胞活性降低的原因。本组通过对白血病患者不同病期NK活性的检测可以看出NK活性随病情而变化:初发期NK活性下降与对照组相比P 0.05。经化疗后,获完全缓解的9例其NK活性上升,与治疗前相比有显著差异(P 0.05),但未达到正常水平,说明机体的免疫功能还没有完全恢复。因未坚持化疗,病情缓解后在不同时间里复发者5例,其NK活性明显下降与缓解期相比有非常显著的差异(P 0.01),值得提出的是,本组5例复发者,经临床观察,在临终前23周检测的NK活性值均很低,临床上均出现严重感染、出血,病情进展迅速。故提示低NK活性可能与白血病患者易感染有一定的关系。因此在白血病的治疗中,还应采用生物反应调节剂来提高NK细胞的活性,可能对提高白血病的缓解率,减少感染的发生均有积极的临床意义。61中国肿瘤临床与康复 2002年第9卷 第2期
