DNA粗提取与鉴定实验课件.ppt

1HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number1 1.提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路选用一定的用一定的 或或 方法分离具有不同方法分离具有不同_的生物大分子。的生物大分子。2 2.提取提取DNADNA的思路的思路：利利用用DNADNA与与 、和和 等在等在 和和 性性质质方面的差异，提取方面的差异，提取DNADNA，去除其他成分。，去除其他成分。一、提取一、提取DNADNA的方法的方法物理物理化学化学物理或化学性质物理或化学性质RNA蛋白质蛋白质脂质脂质物理物理化学化学DNADNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定 回扣基础知识点回扣基础知识点3 3.原理原理(1)DNA(1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的 溶液中溶解度不同。溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的利用这一特点，选择适当的 就能使就能使DNADNA充分溶解，而使杂质沉淀，充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。或者相反，以达到分离的目的。NaCl盐浓度盐浓度2HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number(2 2)能水解蛋白质，但对能水解蛋白质，但对DNADNA没有影响。大多数蛋白质不能忍没有影响。大多数蛋白质不能忍受受 的高温，而的高温，而DNADNA在在 以上才会变性。洗涤剂能瓦解以上才会变性。洗涤剂能瓦解 ，但对，但对DNADNA没有影响。没有影响。(3 3)DNA)DNA不溶于不溶于 ，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。酒精酒精蛋白酶蛋白酶608080细胞膜细胞膜4 4.DNADNA的鉴定的鉴定在在 的条件下，的条件下，DNADNA遇二苯胺会染成遇二苯胺会染成 。注意二苯胺试。注意二苯胺试剂要剂要 。沸水浴沸水浴蓝色蓝色现配现用现配现用通常选用通常选用2 mol/LNaCl2 mol/LNaCl溶液溶解细胞中的溶液溶解细胞中的_，此时杂质易沉淀；在，此时杂质易沉淀；在0.14 mol/LNaCl0.14 mol/LNaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度溶解度_，可使，可使_。DNADNA最小最小DNADNA析出析出3HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number1 1.利用利用DNADNA的溶解特性粗提取的溶解特性粗提取DNADNADNADNA与蛋白与蛋白质质在不同在不同浓浓度的度的NaClNaCl溶液中溶解度不同。溶液中溶解度不同。溶解特性溶解特性质质量量浓浓度度为为2 2 mol/Lmol/LNaClNaCl溶液溶液质质量量浓浓度度为为0.14 mol/L0.14 mol/LNaClNaCl溶液溶液DNADNA在在NaClNaCl溶液中，溶液中，质质量量浓浓度度为为0.14 mol/L0.14 mol/L时时溶解溶解度最小度最小溶解溶解析出析出蛋白蛋白质质NaClNaCl的的质质量量浓浓度从度从2 2 mol/Lmol/L降低降低过过程中，溶解程中，溶解度逐度逐渐渐增大增大部分部分发发生生盐盐析析溶解溶解考点一考点一 DNADNA提取与鉴定原理提取与鉴定原理4HONEYWELL-CONFIDENTIALFile NumberDNADNA不溶于酒精溶液，但是不溶于酒精溶液，但是细细胞中的某些蛋白胞中的某些蛋白质则质则溶于酒精。利溶于酒精。利用用这这一原理，可将一原理，可将DNADNA与蛋白与蛋白质进质进一步分离。一步分离。NaClNaCl溶液溶液酒精酒精(体体积积分数分数为为95%95%的冷酒精的冷酒精)DNADNA不溶不溶蛋白蛋白质质NaClNaCl溶液溶液质质量量浓浓度从度从2 mol/L2 mol/L逐逐渐渐稀稀释释的的过过程中溶解度逐程中溶解度逐渐渐增大增大某些蛋白某些蛋白质质可溶可溶5HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number思考：思考：为提取到提取到DNADNA，曾先后使用不同，曾先后使用不同浓浓度的度的NaClNaCl溶液，溶液，则则在在质质量量浓浓度度为为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液及溶液及0.14 mol/L NaCl0.14 mol/L NaCl溶液中溶液中应应取取滤滤液，液，还还是是滤滤得的固体物？得的固体物？在在质量量浓度度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中溶液中DNADNA呈溶解状呈溶解状态，应取取滤液，在液，在质量量浓度度为0.14 mol/L NaCl0.14 mol/L NaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度极低，溶解度极低，易析出，易析出，应取固体物。取固体物。6HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number2.2.利用利用DNADNA对酶、高温及洗、高温及洗涤剂的耐受性提取的耐受性提取DNA(DNA(见下表下表)DNADNA蛋白蛋白质质蛋白蛋白酶酶没影响没影响水解水解高温高温80 80 以上才会以上才会变变性性606080 80 会会变变性性洗洗涤剂涤剂没影响没影响瓦解瓦解细细胞膜胞膜特别提醒特别提醒(1)(1)甲基绿可将甲基绿可将DNADNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNADNA属于颜色反属于颜色反应，需要水浴加热应，需要水浴加热5 min5 min，可使，可使DNADNA呈蓝色。呈蓝色。(2)(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。7HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number归纳 DNADNA的粗提取原理及目的的粗提取原理及目的归纳基本原理基本原理方法方法目的目的DNADNA在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度不同，在质量浓度不同，在质量浓度为度为0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度最低度最低溶于溶于NaClNaCl溶溶液中并稀释液中并稀释NaClNaCl溶液质量浓度为溶液质量浓度为2 2 mol/Lmol/L时，时，DNADNA溶解，而部分蛋溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不过过滤可除去部分蛋白质及不溶于溶于NaClNaCl溶液的杂质溶液的杂质当当NaClNaCl溶液稀释至质量浓度溶液稀释至质量浓度为为0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA析析出，过滤可除去溶于出，过滤可除去溶于NaClNaCl中的中的部分蛋白质和其他杂质部分蛋白质和其他杂质DNADNA不被蛋白酶所不被蛋白酶所水解水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质蛋白质DNADNA不溶于酒精溶不溶于酒精溶液液加入冷却酒加入冷却酒精精(体积分体积分数为数为95%)95%)DNADNA析出，除去溶于酒精的蛋析出，除去溶于酒精的蛋白质白质8HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number1.1.蛋蛋白白酶酶能将蛋白能将蛋白质质水解而使染色水解而使染色质质中的中的DNADNA分离出来。下列分离出来。下列药药品可达到上述同一目的的是品可达到上述同一目的的是()A A.蒸蒸馏馏水水 B B.NaClNaCl溶液溶液C C.NaOHNaOH溶液溶液 D D.盐盐酸酸2.(20132.(2013江江苏)某同学用洋葱某同学用洋葱进行行DNADNA粗提取和粗提取和鉴定定实验，操作，操作错误的是的是 ()()A.A.加入洗加入洗涤剂后用力后用力进行快速、充分的研磨行快速、充分的研磨B.B.用蛋白用蛋白酶纯化化过滤后的研磨液中的后的研磨液中的DNADNAC.C.加入酒精后用玻璃棒加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌拌D.D.加二苯胺加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加匀后沸水浴加热B BA A学以致用学以致用9HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number3.3.关于关于DNADNA粗提取与粗提取与鉴鉴定定实验实验的有关的有关说说法正确的是法正确的是()()A.A.充分溶解充分溶解DNADNA的的盐盐溶液是溶液是0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液溶液B.B.实验实验中提取中提取较纯净较纯净的的DNADNA利用了利用了DNADNA不溶于酒精的特点不溶于酒精的特点C.C.对对最后提取出最后提取出DNADNA用二苯胺用二苯胺试剂鉴试剂鉴定定时时需用酒精灯直接加需用酒精灯直接加热热D.D.实验实验操作操作过过程中先后两次加入蒸程中先后两次加入蒸馏馏水的作用相同水的作用相同4.4.下列关于下列关于DNADNA粗提取与粗提取与鉴鉴定的定的说说法正确的是法正确的是 ()()A.A.析出析出DNADNA时时要要缓缓慢地加蒸慢地加蒸馏馏水，当析出黏稠物水，当析出黏稠物时时即不再加水即不再加水B.B.在探究洗在探究洗涤剂对涤剂对植物植物细细胞胞DNADNA提取的影响提取的影响实验实验中，自中，自变变量是洗量是洗涤剂涤剂和食和食盐盐C.C.提取的提取的DNADNA溶解后加入二苯胺溶解后加入二苯胺试剂试剂即可染成即可染成蓝蓝色色D.D.将含有将含有DNADNA的的滤滤液放在液放在60607575的恒温水浴箱中保温后的恒温水浴箱中保温后过滤过滤，能去除蛋白，能去除蛋白质杂质质杂质A AD D10HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number1 1.实验材料的材料的选取取选用用 含量相含量相对较对较高的生物高的生物组织组织。2 2.破碎破碎细胞，胞，获取含取含DNADNA的的滤液液(1)(1)动物物细细胞的破碎胞的破碎以以鸡鸡血血为为例例在在鸡鸡血血细细胞液中加入一定量的胞液中加入一定量的 ，同，同时时用玻璃棒用玻璃棒搅搅拌，拌，过滤过滤后收集后收集 即可。即可。二、二、DNADNA粗提取实验流程粗提取实验流程 DNADNA蒸馏水蒸馏水滤液滤液(2)(2)植物细胞的破碎植物细胞的破碎以洋葱为例以洋葱为例先将洋葱切碎，然后先将洋葱切碎，然后加入一定量加入一定量 _；进行充分进行充分 和和 _，过滤后收集研磨液。过滤后收集研磨液。搅拌搅拌研磨研磨洗涤剂和食盐洗涤剂和食盐思考：思考：用用猪的血液与猪的血液与鸡鸡的血液提取的血液提取DNADNA哪个效果更好？哪个效果更好？用鸡的血液；因为鸡血细胞核用鸡的血液；因为鸡血细胞核DNADNA含量丰富，材料易得，而猪的红细胞无含量丰富，材料易得，而猪的红细胞无细胞核细胞核DNADNA含量少。含量少。11HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number思考：思考：1 1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜细胞膜和核膜的破裂和核膜的破裂)，从而释放出，从而释放出DNADNA。2 2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNADNA的释放；食盐的主要的释放；食盐的主要成分是成分是NaClNaCl，有利于，有利于DNADNA的溶解。的溶解。3 3.在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会对如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？实验结果产生什么影响？破碎细胞壁，使破碎细胞壁，使DNADNA更多地溶解在更多地溶解在NaClNaCl溶液中溶液中,研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，提取的释放不完全，提取的DNADNA量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。用二苯胺鉴定不显示蓝色等。12HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number3.3.去除去除滤滤液中的液中的杂质杂质最初最初获获得的得的DNADNA滤滤液含有蛋白液含有蛋白质质、脂、脂质质等等杂质杂质，需要，需要进进一步提一步提纯纯DNADNA。具体。具体做法如下：做法如下：方案一：方案一：滤滤液液NaCl(2 mol/L)NaCl(2 mol/L)过滤过滤除去除去杂质杂质加入蒸加入蒸馏馏水使水使NaClNaCl溶液溶液浓浓度度为为0.14 mol/LDNA0.14 mol/LDNA析出析出过滤过滤得到得到过滤过滤物物放到放到2 mol/LNaCl2 mol/LNaCl溶液中溶液中溶解溶解DNADNANaClNaCl溶解液溶解液方案二：方案二：滤滤液液嫩肉粉嫩肉粉(木瓜蛋白木瓜蛋白酶酶)静置静置101015 min15 min过滤获过滤获得得DNADNA滤滤液液方案三：方案三：滤滤液液60607575处处理理过滤获过滤获得得DNADNA滤滤液液方案一的原理是方案一的原理是_；方案二的原理是方案二的原理是_；方案三的原理是方案三的原理是_。DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同蛋白蛋白酶酶分解蛋白分解蛋白质质，不分解，不分解DNA蛋白蛋白质质和和DNA的的变变性温度不同性温度不同13HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number思考：思考：1.1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？选用尼龙布进行过滤选用尼龙布进行过滤2.2.方案二与方案三的原理有什么不同？方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNADNA与蛋白质分开；与蛋白质分开；方案三利用的是方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与与DNADNA分离。分离。3.3.为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除杂质？，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使浓度使DNADNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质溶解度不同的多种杂质14HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number4 4.DNADNA的的进一步提一步提纯利利用用DNADNA不溶于不溶于冷却冷却的的 这这一原理，可从溶液中一原理，可从溶液中析出析出较纯净较纯净的的DNADNA，此，此时时DNADNA的状的状态为态为 。5 5.DNADNA的的鉴定定将将呈呈丝丝状物的状物的DNADNA溶解于溶解于5 mL5 mL质质量量浓浓度度为为 溶液溶液中，再加入中，再加入4 mL4 mL的的 试剂试剂，加加热热5 min5 min，冷却后冷却后观观察溶液的察溶液的颜颜色。注意要同色。注意要同时设时设置置 实验实验。酒精溶液酒精溶液白色丝状物白色丝状物2mol/L的的NaCl二苯胺二苯胺沸水沸水对照对照15HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number1 1.实验材料的材料的选取取本本实验实验用用鸡鸡血血细细胞胞作作实验实验材料有两个原因：一是因材料有两个原因：一是因为鸡为鸡血血细细胞胞的核的核DNADNA含量丰富，材料易得；二是含量丰富，材料易得；二是鸡鸡血血细细胞极易吸水胞极易吸水涨涨破，破，而用而用动动物肝物肝脏细脏细胞等作胞等作实验实验材料常常需要匀材料常常需要匀浆浆和离心，和离心，对设备对设备要求要求较较高，操作繁高，操作繁琐琐，历时较长历时较长。考点二考点二 实验设计实验设计（1 1）不同生物的组织中）不同生物的组织中DNADNA含量不同含量不同在选取材料时，应本着在选取材料时，应本着DNADNA含量高、材料易得、便于提取的原则。含量高、材料易得、便于提取的原则。（2 2）材料不同所采用的提取方法不同）材料不同所采用的提取方法不同植物组织：取材植物组织：取材研磨研磨过滤过滤沉淀。沉淀。在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐剂和食盐(洗涤剂能够溶解细胞膜洗涤剂能够溶解细胞膜)，充分搅拌和研磨，过滤后收集，充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨研磨液液鸡血：制备鸡血细胞液鸡血：制备鸡血细胞液提取核提取核DNADNA溶解细胞核内溶解细胞核内DNADNA析出并滤取析出并滤取DNADNADNADNA再溶解再溶解提取较纯净的提取较纯净的DNADNA。16HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number2 2.提取提取DNADNA的具体步骤的具体步骤 (2)(2)溶解核内溶解核内DNADNA：滤液质量浓度为：滤液质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液溶液 (3)(3)过滤：除去不溶的杂质，得滤液过滤：除去不溶的杂质，得滤液 (4)(4)析出含析出含DNADNA的黏稠物：向滤液中缓缓加入蒸馏水，并用玻璃棒轻轻沿一的黏稠物：向滤液中缓缓加入蒸馏水，并用玻璃棒轻轻沿一个方向不停地搅拌，直到丝状物不再增加时，停止加水个方向不停地搅拌，直到丝状物不再增加时，停止加水(此时此时NaClNaCl质量浓质量浓度约为度约为0.14 mol/L)0.14 mol/L)17HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number(5)(5)过滤过滤：用：用多多层纱层纱布布过滤过滤，含，含DNADNA的黏稠物被留在的黏稠物被留在纱纱布上布上(6)DNA(6)DNA的的黏黏稠稠物物再再溶溶解解：将将其其溶溶解解在在质质量量浓浓度度为为2 2 mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液中溶液中(7)(7)过滤过滤：用：用两两层纱层纱布布滤滤得含得含DNADNA的的滤滤液液(8)(8)对对DNADNA进进一一步步提提纯纯：向向滤滤液液中中加加入入与与滤滤液液体体积积相相等等的的、冷冷却却的的体体积积分分数数为为95%95%的的酒酒精精，静静置置2 23 3 minmin，溶溶液液中中会会出出现现白白色色丝丝状状物物，即粗提取的即粗提取的DNADNA18HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number(9)DNA(9)DNA的的鉴鉴定定比比较较加入物加入物质质结结果果图图示示实验实验组组均加入：均加入：4 mL4 mL二苯胺二苯胺试剂试剂质质量量浓浓度度为为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液溶液5 mL5 mL丝丝状物状物(DNA)(DNA)溶液溶液逐逐渐渐变蓝变蓝对对照照组组不不变变蓝蓝19HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number共共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：讨论：两次蒸馏水两次蒸馏水第一次：第一次：细胞吸水胀破细胞吸水胀破 第二次：使第二次：使 DNADNA黏稠物析出黏稠物析出此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？一步？三次过滤三次过滤第一次：第一次：DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第一步第一步第二次：第二次：DNADNA被留在纱布上被留在纱布上 第四步第四步第三次：第三次：DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第六步第六步过过滤滤时时使使用用的的纱纱布布层层数数与与需需用用滤滤液液或或黏黏稠稠物物有有关关，第第二二次次要要用用其其滤滤出出的的黏黏稠稠物物有有关关，所所以以要要使使用用多多层层纱纱布布，第第一一次次和和第第三三次次均均要要用用其其滤滤液液，使使用用的的纱布为纱布为1 12 2层层20HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液含杂质多溶液含杂质多第三步第三步第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精的酒精第七步第七步六次搅拌：第一、二、三、五、七步六次搅拌：第一、二、三、五、七步其中除第八步外，其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌其余均要朝一个方向搅拌，在第，在第三、五步搅动还要轻三、五步搅动还要轻缓缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNADNA21HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？1.1.材料未充分研磨成糊状材料未充分研磨成糊状2.2.加入酒精后振动或搅拌时过猛，加入酒精后振动或搅拌时过猛，DNADNA被破坏被破坏3.3.二苯胺配制时间过长，最好现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色二苯胺配制时间过长，最好现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色4.4.析出含析出含DNADNA的黏稠物中，蒸馏水不能一次快速倒入，否则会影响结的黏稠物中，蒸馏水不能一次快速倒入，否则会影响结果果5.5.实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌，不同步骤中用法不同，做实实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌，不同步骤中用法不同，做实验时如果不注意，会影响实验结果验时如果不注意，会影响实验结果22HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number特特别提醒提醒(1)(1)做做该实验时该实验时，不能用猪血代替，不能用猪血代替鸡鸡血，因血，因为为哺乳哺乳动动物成熟物成熟的的红细红细胞中没有胞中没有细细胞核，不能提取胞核，不能提取DNADNA。(2)(2)制制备鸡备鸡血血细细胞液胞液时时，要注意向，要注意向鸡鸡血中加血中加柠柠檬酸檬酸钠钠，防止，防止血液凝固血液凝固,静置后上静置后上层是血是血浆，下，下层为所需要的血所需要的血细胞。胞。(3)(3)涨涨破破细细胞的方法：向血胞的方法：向血细细胞中加入蒸胞中加入蒸馏馏水，血水，血细细胞溶液胞溶液的的浓浓度大于蒸度大于蒸馏馏水的水的浓浓度，从而使血度，从而使血细细胞大量吸水而胞大量吸水而涨涨破。破。不能用生理不能用生理盐盐水，因水，因为为血血细细胞溶液的胞溶液的浓浓度与生理度与生理盐盐水的水的浓浓度度相当，所以血相当，所以血细细胞在生理胞在生理盐盐水中不能吸收水分。水中不能吸收水分。(4)(4)两次加入蒸两次加入蒸馏馏水，第一次是水，第一次是为为了使血了使血细细胞吸水胞吸水涨涨破破,释放放出核内的出核内的DNADNA；第二次是；第二次是为为了降低了降低氯氯化化钠钠的的浓浓度，有利于度，有利于DNADNA的析出。的析出。(5)(5)两次析出两次析出DNADNA的方法：的方法：第一次是加入蒸第一次是加入蒸馏馏水，降低水，降低氯氯化化钠钠的的浓浓度，促使度，促使DNADNA析出；析出；第二次是加入冷酒精，因第二次是加入冷酒精，因为为DNADNA不溶于酒精溶液。不溶于酒精溶液。23HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number(6 6)在在DNADNA粗提取中三次过滤时，粗提取中三次过滤时，DNADNA存在的部分及所用的纱布层数不同：存在的部分及所用的纱布层数不同：第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含DNADNA的滤液，使的滤液，使用的纱布为用的纱布为1 12 2层。层。第二次过滤含有黏稠物的第二次过滤含有黏稠物的NaClNaCl溶液，是为了得到从低浓度的溶液，是为了得到从低浓度的NaClNaCl溶液中溶液中析出的附着在纱布上的含析出的附着在纱布上的含DNADNA的黏稠物，所用的纱布为多层。的黏稠物，所用的纱布为多层。第三次过滤溶解有第三次过滤溶解有DNADNA的的NaClNaCl溶液，目的是为了使溶液，目的是为了使DNADNA再溶解，所以只要再溶解，所以只要用两层纱布即可。用两层纱布即可。24HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number1.(20121.(2012江苏江苏)下列关于下列关于“DNADNA粗提取与鉴定实验粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是的叙述，正确的是 ()()A.A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度B.B.将将DNADNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C.C.常温下菜花匀浆中有些酶类会影响常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNADNA的提取的提取D.D.用玻棒缓慢搅拌滤液会导致用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNADNA获得量减少获得量减少2 2.(2011(2011江苏江苏)在利用鸡血进行在利用鸡血进行“DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”的实验中，下的实验中，下列相关叙述正确的是列相关叙述正确的是 ()A A.用蒸馏水将用蒸馏水将NaClNaCl溶液质量浓度调至溶液质量浓度调至0.14 mol/L0.14 mol/L，滤去析出物，滤去析出物B B.调节调节NaClNaCl溶液质量浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质溶液质量浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C C.将丝状物溶解在质量浓度为将丝状物溶解在质量浓度为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色即呈蓝色D D.用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同C C课堂巩固课堂巩固B B25HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number3.3.下图为下图为“DNADNA粗提取和鉴定粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是实验的相关操作。这些操作目的正确的是()A A.是洗是洗涤红细涤红细胞，去除血胞，去除血细细胞表面的胞表面的杂质杂质B B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的，去除不溶于酒精的杂质杂质C C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于质质量量浓浓度度为为2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的溶液的杂质杂质D D.是稀是稀释释NaClNaCl溶液，去除不溶于低溶液，去除不溶于低浓浓度度NaClNaCl溶液的溶液的杂质杂质C C26HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number4.4.下下图为图为“DNADNA的粗提取与的粗提取与鉴鉴定定”的的实验实验装置，装置，请请回答下回答下列相关的列相关的问题问题。(1)(1)实实验验材材料料选选用用鸡鸡血血细细胞胞液液，而而不不用用鸡鸡全全血血，主主要要原原因因是是鸡鸡血血细细胞胞液液中中有有较较高高含量的含量的_。(2)(2)在在图图A A所所示示的的实实验验步步骤骤中中加加蒸蒸馏馏水水的的目目的的是是_，通通过过图图B B所所示示的的步步骤骤取取得得 滤滤 液液，再再 在在 溶溶 液液 中中 加加 入入 质质 量量 浓浓 度度 为为 2 2 mol/Lmol/L的的 NaClNaCl溶溶 液液 的的 目目 的的 是是_(3)(3)图图C C所示所示实验实验步步骤骤中加蒸中加蒸馏馏水的目的是水的目的是_。DNA使血细胞破裂使血细胞破裂使滤液中的使滤液中的DNA溶于浓溶于浓NaCl溶液溶液使使DNA析出析出27HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number5.5.下图表示以鸡血为实验材料进行下图表示以鸡血为实验材料进行DNADNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答下列问题：析回答下列问题：（1 1）步骤一中，向鸡血细胞液中加入）步骤一中，向鸡血细胞液中加入并搅拌，可使鸡血细并搅拌，可使鸡血细胞破裂。胞破裂。（2）步骤二中，过滤后收集含有）步骤二中，过滤后收集含有DNA的的。蒸馏水蒸馏水滤液滤液28HONEYWELL-CONFIDENTIALFile Number（3 3）步骤三、四的操作原理是）步骤三、四的操作原理是_；步骤四中，通过向溶液中加入步骤四中，通过向溶液中加入调节调节NaClNaCl溶液的物质的量浓溶液的物质的量浓度至度至 mol/Lmol/L时，时，DNADNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。将会析出，过滤去除溶液中的杂质。（4 4）步骤七：向步骤六过滤后的）步骤七：向步骤六过滤后的中加入等体积的冷却的中加入等体积的冷却的，静置，静置2 23 min3 min，溶液中会出现，溶液中会出现色丝状物，这就是粗提取的色丝状物，这就是粗提取的DNADNA。（5 5）步骤七：）步骤七：DNADNA遇遇试剂，沸水浴试剂，沸水浴5 min5 min，冷却后，溶液，冷却后，溶液呈呈色。色。DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，通过控制溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质溶液的浓度去除杂质蒸馏水蒸馏水0.14滤液滤液酒精酒精白白二苯胺二苯胺蓝蓝