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    食品的测定 实验八:食品中维生素C的含量测定.ppt

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    食品的测定 实验八:食品中维生素C的含量测定.ppt

    实验九:实验九:食品中维生素食品中维生素C的含量测定的含量测定n一、目的要求一、目的要求n理解2,4二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量的基本原理。学习其操作方法和了解影响测定准确性的因素。n二、实验原理二、实验原理n总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4二硝基苯肼作用生成红色脎,其呈色强度与总抗坏血酸含量呈正比,可进行比色定量。三、三、仪器与试剂n(一)试剂n1、4.5mol/L硫酸:量取250mL浓硫酸小心加入700mL水中,冷却后用水稀释至1000mL。n2、85%硫酸:小心加900mL浓硫酸于100mL水中。n3、2%2,4二硝基苯肼:溶解2,4二硝基苯肼2g于100mL 4.5mol/L硫酸中,过滤。不用时存于冰箱内,每次使用前必须过滤。n4、2%草酸溶液。n5、1%草酸溶液。n6、1%硫脲溶液:溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。n7、2%硫脲溶液:溶解2g硫脲于100mL1%草酸溶液中。n8、1mol/L盐酸:取100mL盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。n9、抗坏血酸标准溶液:称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL 2%草酸溶液中,此溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸。n10、活性炭:将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中,回流1h2h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110烘箱中烘干。n(二)仪器n1、恒温箱或电热恒温水浴锅。n2、可见光分光光度计。n3、捣碎机。四、实验步骤四、实验步骤1、样品处理(全部实验过程应避光)。n(1)鲜样的制备:称取100g鲜样即加入100mL 2%草酸溶液,倒入捣碎机中打成匀浆,称取10.0g40.0g匀浆(含1mg2mg抗坏血酸)倒入100mL容量瓶,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。过滤,滤液备用。n(2)干样制备:称取1g 4g干样(含1mg2mg抗坏血酸)放入乳钵内,加入等量的1%草酸溶液磨成匀浆,连固形物一起倒入100mL容量瓶内,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。过滤备用。2、样品还原型抗坏血酸的氧化处理n量取25.0mL上述滤液,加入2g活性炭,振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液。吸取10.0mL此氧化提取液,加入10.0mL 2%硫脲溶液,混匀,此试样为稀释液。3、呈色反应n(1)取3支试管,各加入4mL经氧化处理的样品稀释液。基中一支试管作为空白,向其余两试管加入1.0mL 2%2,4二硝基苯肼溶液,将所有试管放入370.5恒温箱或恒温水浴中,保温3h。n(2)3h后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温,然后加入2%2,4二硝基苯肼溶液1.0mL,在室温中放置10min15min,后放入冰水内。其余步骤同试样。4、85%硫酸处理n当试管放入冰水冷却后,向每一试管(连同空白管)中加入85%硫酸5mL,滴加时间至少需要1min,需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出,在室温放置30min后比色。5、样品比色测定n用1cm比色皿,以空白液调零点,于500nm波长测定吸光值。6、标准曲线绘制n(1)加2g活性炭于50mL标准溶液中,振动1min后过滤。吸取10.00mL滤液放入500mL容量瓶中加5.0g硫脲,用1%草酸溶液稀释至刻度。抗坏血酸浓度20g/mL。n吸取5,10,20,25,40,50,60mL稀释液,分别放放7个100mL容量瓶中,用1%硫脲溶液稀释至刻度,使最后稀释液中抗坏血酸的深度分别为1,2,4,5,8,10,12g/mL,为抗坏血酸标准使用液。n(2)分别吸取4mL各不同深度的抗坏血酸标准使用液,于7个试管中,吸取4mL水于试剂空白管,各加入1.0mL 2%2,4二硝基苯肼溶液,混匀,将全部试管放入375恒温箱或恒温水浴中,保温3h。n3h后将8个试管取出,全部放入冰水冷却后,向每一试管中加入5mL 85%硫酸,滴加时间至少需要1min,边加边摇,。将试管自冰水取出,在室温放置30min后,以试剂空白管调零,并比色测定。n以吸光值为纵坐标,抗坏血酸含量(mg)为横坐标绘制标准曲线或计算回归方程。五、结果计算n式中X样品中总抗坏血酸含量mg/100g;nc由标准曲线查得或由回归方程算得试样测定液总抗坏血酸含量(mg);nm测定时所取滤液相当于样品的用量(g)。n计算结果表示到小数点后两位。六、考思考题n1、试样制备过程为何要避光处理?n2、为何加入85%硫酸溶液时,速度要慢而且需在冰水浴条件下完成?解释若加酸速度过快使样品管中液体变黑的原因。n3、样品比色测定时,用样品空白管调零的目的何在?

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