第七章抗原抗体反应精选文档.ppt

第七章抗原抗体反应1本讲稿第一页，共四十四页 ppt课件制作及讲课课件制作及讲课 n原则原则 自愿自愿 有兴趣有兴趣n组织方式组织方式 分组讲分组讲 选出最好在班上讲选出最好在班上讲n内容内容 自选自选n数量数量 15张张n分别折算分别折算 1 2 3次作业次作业2本讲稿第二页，共四十四页上章小结：上章小结：一一基本概念基本概念 主要组织相容性复合物等主要组织相容性复合物等二二MHCMHC抗原的结构和功能抗原的结构和功能 MHC-I MHC-IIMHC-I MHC-II结构、功能及两者与肽结合的区别结构、功能及两者与肽结合的区别三三MHCMHC抗原基因多态性及结构抗原基因多态性及结构四四MHCMHC的检测原理的检测原理和应用和应用3本讲稿第三页，共四十四页第七章第七章 抗原抗体反应及应用抗原抗体反应及应用一节一节 抗体的制备抗体的制备二二节节抗原抗体反应抗原抗体反应三三节节 抗原抗体反应的应用抗原抗体反应的应用4本讲稿第四页，共四十四页一节一节抗体的制备抗体的制备一一抗血清的制备及抗体纯化抗血清的制备及抗体纯化二二单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备三三 抗体工程抗体工程四四 催化性抗体催化性抗体五五 抗体在抗肿瘤治疗中的应用抗体在抗肿瘤治疗中的应用继续继续5本讲稿第五页，共四十四页 一一抗血清的制备及抗体纯化抗血清的制备及抗体纯化 1 1、抗血清的制备、抗血清的制备 抗血清：抗血清：含有能与相应抗原结合的抗体分子的免疫动物血清。含有能与相应抗原结合的抗体分子的免疫动物血清。抗血清的纯化抗血清的纯化 见下图见下图免疫动物免疫动物 抗原抗原(半抗原需经转化半抗原需经转化)佐剂乳化佐剂乳化 免疫动物免疫动物抗血清的制备抗血清的制备 抗血清的效价测定抗血清的效价测定采血采血 获得抗血清获得抗血清6本讲稿第六页，共四十四页抗血清抗血清+3+3倍体积倍体积0ddH0ddH2 2O,O,调调pHpH到到7.77.7加加50%-2050%-20酒精酒精至最后质量分数为至最后质量分数为20%(20%(保持保持-5)-5)上清上清沉淀沉淀(含含IgG/IgA/IgM/IgG/IgA/IgM/杂蛋白杂蛋白)悬浮于悬浮于0.015-0.02mol/L0.015-0.02mol/L冷冷NaCl,NaCl,用用0.05mol/L0.05mol/L醋酸调醋酸调pHpH至至5(0)5(0)上清液上清液沉淀沉淀(含含IgA/IgM/IgA/IgM/杂蛋白杂蛋白)用用0.5mol/LNaH0.5mol/LNaH2 2POPO4 4调调至至pH7.4,pH7.4,-20-20至至-3095%-3095%酒酒精精至至最最后后质质量量分分数数为为25%25%，维持在，维持在-6-6 上清上清沉沉淀淀(IgG)(IgG)悬悬浮浮于于ddHddH2 2O,O,用用0.05mol/L0.05mol/L醋醋酸酸调至调至pH5.1pH5.1上清液上清液沉淀沉淀调调pHpH至至5.5,5.5,离离子子强强度度为为0.010.010.0075,0.0075,加加50%50%冷冷酒酒精至最后质量分数为精至最后质量分数为10%(-3)10%(-3)沉淀沉淀(IgA/IgM)(IgA/IgM)上清上清通过分子筛将二者分开通过分子筛将二者分开2 2、抗体、抗体初步纯化初步纯化7本讲稿第七页，共四十四页 抗血清的初步纯化只是多数抗体抗血清的初步纯化只是多数抗体类别类别的纯化。的纯化。上上述述冷冷酒酒精精沉沉淀淀法法是是19461946年年CohnCohn创创立立的的较较好好方方法法。该该法法得得到到的只是较粗的只是较粗IgIg。硫硫酸酸铵铵盐盐析析法法：比比较较简简便便，蛋蛋白白质质变变性性小小，33%33%饱饱和和硫硫盐盐沉沉淀淀各各类类IgIg，分分离离纯纯度度较较差差。浓浓盐盐使使IgAIgA形形成成二二聚聚体体，不不宜宜采用。采用。离子交换层析法：离子交换层析法：通过层析法，才能获得高纯度某一类通过层析法，才能获得高纯度某一类IgIg。8本讲稿第八页，共四十四页3 3、抗体进一步纯化、抗体进一步纯化 IgG IgG在血清中含量最高，占在血清中含量最高，占757580%80%，纯化的方法常用，纯化的方法常用33-50%33-50%硫铵盐析和硫铵盐析和DEAE-DEAE-纤维素纤维素柱层析法。柱层析法。IgG IgG在在pH7.5pH7.5溶液中带正电荷，其它血清蛋白都带负电荷，因此溶液中带正电荷，其它血清蛋白都带负电荷，因此可用阴离子交换剂可用阴离子交换剂DEAE-DEAE-纤维素一次将纤维素一次将IgGIgG提纯到很高的纯度。提纯到很高的纯度。分离纯化分离纯化IgMIgM常用常用18%18%硫铵沉淀，再硫铵沉淀，再DEAE-DEAE-纤维素柱层析，收集洗纤维素柱层析，收集洗脱液，再用分子筛分离，获纯化的脱液，再用分子筛分离，获纯化的IgMIgM。获得的纯化获得的纯化IgIg，在，在44保存，长期保存需在保存，长期保存需在-20-20以下。以下。9本讲稿第九页，共四十四页 问题：问题：血清中的抗体是由多个抗原决定簇血清中的抗体是由多个抗原决定簇刺激刺激B B细胞克隆而产生的抗体，是多克隆抗体细胞克隆而产生的抗体，是多克隆抗体(PAb)(PAb)，通过分离的方法不可能获得真正的单一，通过分离的方法不可能获得真正的单一抗体。抗体。如何获得大量的一种抗体？如何获得大量的一种抗体？由单一由单一B B细胞克隆而产生的抗体，称单克隆细胞克隆而产生的抗体，称单克隆抗体抗体(MAb)(MAb)。二二单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备10本讲稿第十页，共四十四页 1 1 、制备、制备MAbMAb(monoclonal Ab,mAb)的原理的原理 利利用用B B细细胞胞能能分分泌泌抗抗体体而而肿肿瘤瘤细细胞胞能能在在体体外外长长期期培培养养并并可可低低温温保保存存的的优优点点，通通过过细细胞胞杂杂交交，融融合合二二类类细细胞胞，从从而而筛筛选选得得到到既既有有抗抗体体分分泌泌性性又又有有不不断断分分裂裂性性的的杂杂交交瘤瘤细胞，将其细胞单克隆化。细胞，将其细胞单克隆化。用用单单克克隆隆化化的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞进进行行单单克克隆隆抗抗体体的的生生产产，称称为为杂交瘤技术杂交瘤技术。该技术是该技术是19751975年由年由G.KG.Khler&Milsteinhler&Milstein创立的。创立的。11本讲稿第十一页，共四十四页2 2、制备、制备MAbMAb的基本过程的基本过程免疫小鼠免疫小鼠品种、加强品种、加强3d3d脾脏脾脏单细胞悬浮单细胞悬浮洗掉血清洗掉血清骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞营营养养缺陷型缺陷型PEGPEGHATHAT培养基培养基37375%CO5%CO2 2选抗体选抗体分泌株分泌株克克隆隆阳阳性性细细胞胞,1,1细胞细胞/孔孔增殖阳性增殖阳性克隆克隆-70-70或液氮或液氮冻存冻存细胞细胞腹水制备腹水制备扩大培养扩大培养中空纤维反应器中空纤维反应器继续继续12本讲稿第十二页，共四十四页返返 Procedures for Producing Hybridomas and Monoclonal Antibodies13本讲稿第十三页，共四十四页q用于制备用于制备B B细胞的小鼠常用细胞的小鼠常用Balb/cBalb/c品系，为品系，为H-2dH-2d单元单元(倍倍)型。型。qB B细胞从小鼠的脾脏制取。细胞从小鼠的脾脏制取。为为保保证证B B细细胞胞有有旺旺盛盛的的分分泌泌抗抗体体活活性性，分分离离前前3 3天天一一次次静静脉脉加加强强免免疫疫。B B细细胞胞要要悬悬浮浮于于没没有血清的培养液。有血清的培养液。骨髓瘤细胞有多种细胞株，骨髓瘤细胞有多种细胞株，营养缺陷型营养缺陷型是一种。是一种。缺陷是细胞缺少次黄嘌呤、鸟嘌呤核苷酸缺陷是细胞缺少次黄嘌呤、鸟嘌呤核苷酸转移酶转移酶(HGPRT)(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶和胸腺嘧啶激酶(TK)(TK)，另一条核酸合成必须酶。当合成核酸的正常途径被阻断后另一条核酸合成必须酶。当合成核酸的正常途径被阻断后（培养基中加入氨基喋呤），（培养基中加入氨基喋呤），虽然培养虽然培养基中有这二种底物基中有这二种底物(次黄嘌呤、胸腺嘧啶次黄嘌呤、胸腺嘧啶)，但缺陷细胞仍不能合成核酸而死亡。，但缺陷细胞仍不能合成核酸而死亡。如果骨髓瘤细胞与如果骨髓瘤细胞与B B细胞发生了融合，因细胞发生了融合，因B B细胞有正常的细胞有正常的2 2套核酸合成酶系，套核酸合成酶系，正常途径受阻后，能利用培养基中的次黄嘌呤正常途径受阻后，能利用培养基中的次黄嘌呤(H)(H)、胸腺嘧啶、胸腺嘧啶(T)(T)来合成核酸，来合成核酸，因此融合后的杂交瘤细胞能在选择培养基中正常分裂生长。因此融合后的杂交瘤细胞能在选择培养基中正常分裂生长。骨髓瘤细胞还应该具有不能合成抗体或合成了也不能分泌的特性骨髓瘤细胞还应该具有不能合成抗体或合成了也不能分泌的特性q融合时，骨髓瘤细胞应处于对数生长期，融合时，骨髓瘤细胞应处于对数生长期，B B细胞有旺盛的分泌抗体活性。细胞有旺盛的分泌抗体活性。融合细胞按融合细胞按B B细胞：骨髓瘤细胞细胞：骨髓瘤细胞5 51010：1 1，总细胞数在，总细胞数在10107 7-10-108 8水平。水平。加入融合剂：加入融合剂：50%50%的聚乙二醇的聚乙二醇(PEG)(PEG)，3737下融合下融合1 12min2min。然后用培养液然后用培养液RMPI1640RMPI1640进行洗涤稀释，去除进行洗涤稀释，去除PEGPEG后，于后，于HATHAT培养基上培养培养基上培养.14本讲稿第十四页，共四十四页 筛选抗体分泌株：筛选抗体分泌株：是将对是将对HATHAT上形成的杂交瘤细胞集落进行抗体活性上形成的杂交瘤细胞集落进行抗体活性检测。检测。单克隆化：单克隆化：将多种细胞混合生长的细胞团分离为单克隆，将多种细胞混合生长的细胞团分离为单克隆，HAT:HAT:即含有次黄嘌呤即含有次黄嘌呤(H)(H)、氨基喋呤、氨基喋呤(A)(A)和胸腺嘧啶和胸腺嘧啶(T)(T)的选择培养的选择培养基，简称基，简称HATHAT。这种培养基能使杂交瘤细胞生长，而营养缺陷型的骨髓瘤细胞不能这种培养基能使杂交瘤细胞生长，而营养缺陷型的骨髓瘤细胞不能生长，生长，B B细胞因本身在培养基中不能生存。这样就能容易地将已经发生细胞因本身在培养基中不能生存。这样就能容易地将已经发生了融合的杂交瘤细胞筛选出来，其它细胞自然被淘汰。了融合的杂交瘤细胞筛选出来，其它细胞自然被淘汰。返返1215本讲稿第十五页，共四十四页三三 抗体工程抗体工程四四 催化性抗体催化性抗体五五 抗体在抗肿瘤治疗中的应用抗体在抗肿瘤治疗中的应用16本讲稿第十六页，共四十四页二节二节抗原抗体反应抗原抗体反应 一、抗原抗体反应的特点一、抗原抗体反应的特点 抗原与抗体的抗原与抗体的特异性特异性结合结合,既可以发生在体内既可以发生在体内,也可发生在体也可发生在体外。外。发生在体外是许多免疫检测方法的基础。发生在体外是许多免疫检测方法的基础。抗原与抗体相互作用是抗原与抗体相互作用是非共价的、可逆的非共价的、可逆的,其特性符合许其特性符合许多化学反应的基本原理多化学反应的基本原理.17本讲稿第十七页，共四十四页 特异性特异性 抗抗原原与与抗抗体体相相互互结结合合没没有有共共价价键键形形成成，只只能能通通过过次次级级键键相相互互作作用用，在在极极短短的的距距离离内内才才有有效效，因因此此抗抗原原决决定定簇簇和和抗抗体体结结合合位位点点在在空空间间上上必必须须处处于于紧紧密密接接触触的的状状态态，才能产生足够的结合力才能产生足够的结合力(亲和力亲和力)。这这种种分分子子间间的的互互补补结结构构决决定定了了抗抗原原抗抗体体结结合合的的专专一性。一性。18本讲稿第十八页，共四十四页盐 键盐 键氢 键疏水相互作用疏水相互作用范德华力范德华力次级键有次级键有:氢键氢键 范德华力范德华力 疏水相互作用疏水相互作用 盐键等盐键等19本讲稿第十九页，共四十四页 抗原抗体结合的可逆性抗原抗体结合的可逆性AgAbAgAbK1K2抗原或半抗原与抗体之间的结合强弱称为抗原或半抗原与抗体之间的结合强弱称为亲和力亲和力.抗原抗体结合松散，易于解离，亲和力低，反之亲和力高。抗原抗体结合松散，易于解离，亲和力低，反之亲和力高。20本讲稿第二十页，共四十四页Ag或或AbAg-Ab21本讲稿第二十一页，共四十四页 二二 抗体与单价抗原的作用抗体与单价抗原的作用 三三 抗体与大分子多价抗原反应抗体与大分子多价抗原反应 大分子多价抗原大分子多价抗原 具有多个抗原决定簇，能与多个抗体结合的大分子物质。具有多个抗原决定簇，能与多个抗体结合的大分子物质。抗原抗体的亲和力和亲合力抗原抗体的亲和力和亲合力 单价抗原与抗体的结合力，称亲和力。单价抗原与抗体的结合力，称亲和力。多价抗原与抗体的总结合强度，称亲合力。多价抗原与抗体的总结合强度，称亲合力。亲合力大大强于每一位点的亲和力，其强度的增加不仅仅是亲亲合力大大强于每一位点的亲和力，其强度的增加不仅仅是亲和力的简单相加，是呈几何级数上升的。和力的简单相加，是呈几何级数上升的。22本讲稿第二十二页，共四十四页 抗原抗体反应的表现抗原抗体反应的表现形成沉淀形成沉淀 与与抗抗原原抗抗体体比比例例密密切切相相关关，一一定定浓浓度度的的抗抗体体与与一一定定浓浓度度的的抗原才能形成沉淀抗原才能形成沉淀.抗原或抗体过剩都不能形成沉淀或很少。抗原或抗体过剩都不能形成沉淀或很少。抗体过量抗体过量抗原抗体适量抗原抗体适量抗原过量抗原过量网络学说网络学说:认为抗原抗体的结合包括许多抗原抗体相互连接形成网络。认为抗原抗体的结合包括许多抗原抗体相互连接形成网络。多价的抗体与多价的抗原反应时，一个抗体可以结合二个或以上相同多价的抗体与多价的抗原反应时，一个抗体可以结合二个或以上相同抗原的决定簇，一个抗原也能与多个抗体结合，从而形成相互交联的抗原的决定簇，一个抗原也能与多个抗体结合，从而形成相互交联的网络，当这些聚合达到一定大小时就会从溶液中沉淀出来。网络，当这些聚合达到一定大小时就会从溶液中沉淀出来。23本讲稿第二十三页，共四十四页 交叉反应交叉反应 有有几几个个决决定定簇簇的的两两个个抗抗原原，如如果果其其中中有有一一个个决决定定簇簇相相同同，那那么么免免疫疫获获得得的的抗抗体体中中就就有有能能与与两两种种抗抗原原上上相相同同决决定定簇簇都都能能结合的一种抗体，即有交叉反应现象。如结合的一种抗体，即有交叉反应现象。如M M抗原和抗原和N N抗原抗原MACDBNFHJB24本讲稿第二十四页，共四十四页三三抗原抗体反应的应用抗原抗体反应的应用11免疫沉淀免疫沉淀22免疫标记免疫标记33免疫定位分析免疫定位分析25本讲稿第二十五页，共四十四页 11免疫沉淀免疫沉淀 由由于于抗抗体体与与相相应应的的抗抗原原两两者者之之间间有有特特异异性性结结合合，在在体外当两者浓度比例适当时，会发生免疫沉淀反应。体外当两者浓度比例适当时，会发生免疫沉淀反应。原理：原理：抗原抗体结合形成网络而沉淀。抗原抗体结合形成网络而沉淀。应用：应用：抗原或抗体的定性及定量分析。抗原或抗体的定性及定量分析。方法：方法：溶液中的沉淀反应溶液中的沉淀反应 凝胶扩散沉淀凝胶扩散沉淀 免疫电泳免疫电泳返返26本讲稿第二十六页，共四十四页 溶液中的沉淀反应：溶液中的沉淀反应：液相中的沉淀线不易观察，利用抗原抗体溶液相中的沉淀线不易观察，利用抗原抗体溶液之间的界面形成的沉淀线即环状沉淀试验。在几支试管中加入液之间的界面形成的沉淀线即环状沉淀试验。在几支试管中加入等量的抗原，再加入递减量的抗体，中性、等量的抗原，再加入递减量的抗体，中性、3737保温保温1 12hr2hr，可，可见见环状环状沉淀。沉淀。返返27本讲稿第二十七页，共四十四页 凝胶扩散沉淀凝胶扩散沉淀 原理：原理：抗原抗体在半透明的半固相介质中自由扩散形成浓度梯度，两抗原抗体在半透明的半固相介质中自由扩散形成浓度梯度，两者在比例合适的一定扩散部位相遇形成沉淀线。者在比例合适的一定扩散部位相遇形成沉淀线。用途：用途：测定抗原和抗体的相对浓度，比较不同抗原的特异性测定抗原和抗体的相对浓度，比较不同抗原的特异性纯度和纯度和相互关系。相互关系。方法：方法：单向单向扩散法和扩散法和双向双向扩散法扩散法返返琼脂凝胶中混有Ab小孔中加有Ag沉淀环单向单向28本讲稿第二十八页，共四十四页左右二孔抗原浓度相同，沉淀线融合右孔抗原浓度较低，沉淀线细并靠近抗原孔右孔抗原甚微，近抗原孔处只有一弯眉双向：双向：不同抗原浓度对沉淀线特征的影响不同抗原浓度对沉淀线特征的影响继续29本讲稿第二十九页，共四十四页在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征(一一)在在抗抗原原孔孔内内有有三三种种抗抗原原成成分分，分分别别与与相相应应抗抗体体形形成成3 3条条沉沉淀淀线线。由由于于反反应应的的特特异异性性，线线互互不不干干扰扰，线线的的顺顺序序位位置置决定于抗原的性质决定于抗原的性质二二孔孔内内抗抗原原成成分分性性质质完完全全不不同同，出出现现沉淀线交叉现象沉淀线交叉现象左左孔孔内内含含二二种种抗抗原原成成分分，其其中中一一种种与与右右孔孔内内相相同同，出出现现一条融合线一条融合线继续30本讲稿第三十页，共四十四页左左右右二二孔孔抗抗原原性性质质相相同同，但但右右孔孔浓浓度度过过大大，产产生生抗抗原原抗抗体体复复合合物物逐逐渐渐溶溶解解的的“假刺假刺”现象现象在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征(二二)左左右右二二孔孔抗抗原原性性质质大大部部分分相相同同，沉沉淀淀线融合较多线融合较多左左右右二二孔孔抗抗原原性性质质部部分分相相同同，出出现现部部分融合现象分融合现象返返31本讲稿第三十一页，共四十四页抗血清抗血清电泳后在胶中间沿电泳方向开一条槽电泳后在胶中间沿电泳方向开一条槽 免疫电泳：免疫电泳：是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离开来的特性与免疫扩散结合一起进行分析的方法。开来的特性与免疫扩散结合一起进行分析的方法。继续继续32本讲稿第三十二页，共四十四页火箭电泳：单相免疫扩散与电泳结合的一种方法。火箭电泳：单相免疫扩散与电泳结合的一种方法。继续继续33本讲稿第三十三页，共四十四页双向免疫电泳双向免疫电泳返返34本讲稿第三十四页，共四十四页 22免疫标记免疫标记 放射免疫分析放射免疫分析 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）发光与荧光免疫分析发光与荧光免疫分析 亲和标记免疫分析亲和标记免疫分析返返35本讲稿第三十五页，共四十四页 放射免疫分析放射免疫分析 是是用用放放射射核核素素标标记记抗抗原原/抗抗体体，通通过过放放射射自自显显影影(固固相相体体系系)或或液液相相闪闪烁仪烁仪(液相反应体系液相反应体系)来定量抗原来定量抗原/抗体。有：抗体。有：直直接接法法：是是用用标标记记的的抗抗原原或或抗抗体体与与抗抗体体或或抗抗原原直直接接反反应应形形成成复复合合物物而进行测定。而进行测定。竞竞争争法法：是是利利用用放放射射标标记记的的抗抗原原与与未未标标记记的的抗抗原原竞竞争争与与抗抗体体反反应应，再以放射强度定量再以放射强度定量返返36本讲稿第三十六页，共四十四页 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）162 162页页 是是一一种种免免疫疫酶酶技技术术，特特点点是是利利用用聚聚苯苯乙乙烯烯微微量量反反应应板板(或或球球)吸吸附附抗抗原原/抗抗体体，使使之之固固相相化化，免免疫疫反应和酶促反应在此进行。反应和酶促反应在此进行。方法有：方法有：直接法、间接法、夹心法直接法、间接法、夹心法继续继续37本讲稿第三十七页，共四十四页酶酶联联免免疫疫吸吸附试验原理附试验原理返返38本讲稿第三十八页，共四十四页 发光与荧光免疫分析发光与荧光免疫分析 是是利利用用化化学学发发光光物物质质如如鲁鲁米米诺诺、呷呷啶啶酯酯等等的的氧氧化化反反应应引引起起瞬瞬间间发发光光来来测测定定。增增强强发发光光酶酶免免疫疫分分析析是是在在酶酶促促氧氧化化反反应应中中加加入入增增强强剂剂，如如荧荧光光素素、对对-碘碘酚酚、黄黄嘌嘌呤呤氧氧化化酶酶等等，这这不不仅仅可可增增强强发发光光信信号号，且保持长时间的稳定发光。且保持长时间的稳定发光。返返39本讲稿第三十九页，共四十四页 亲和标记免疫分析亲和标记免疫分析 IgGIgG类类抗抗体体有有一一重重要要特特性性就就是是能能和和葡葡萄萄球球菌菌A A蛋蛋白白特特异异结结合合，而而且且亲亲和和力力很很高高，利利用用这这一一特特点点来来对对IgGIgG抗抗体体标标记记，或或用用前前述述的的酶酶、同同位位素素、荧荧光光素素等等标标记记A A蛋蛋白白，再再使使其其与与IgGIgG结结合合，这这类类IgGIgG就就带带有有标标记记，可可进进行行前前述述的各种分析。的各种分析。这里这里A A蛋白就相当于抗蛋白就相当于抗IgGIgG的抗体。的抗体。返返40本讲稿第四十页，共四十四页 33免疫定位分析免疫定位分析 这这种种分分析析技技术术的的基基本本原原理理与与前前述述的的ELISAELISA、荧荧光光免免疫疫分分析析等等相相同同，不不同同在在于于其其分分析析的的主主要要目目的的是是定定位位而而非非定定量量，即即可可将将细细胞胞或或分分子子在在组组织织或或细细胞胞内内进进行行定定位位。同同样样有有荧荧光光定定位位和和酶酶标标定定位位等等方方法，这里着重介绍一下蛋白印迹。法，这里着重介绍一下蛋白印迹。41本讲稿第四十一页，共四十四页Western blotting assayPolymer sheet即高分子膜,如常用的硝酸纤维膜42本讲稿第四十二页，共四十四页43本讲稿第四十三页，共四十四页作业：作业：1.1.简述单克隆抗体的制备过程。简述单克隆抗体的制备过程。2.2.名词解释名词解释:免疫电泳免疫电泳 免疫沉淀免疫沉淀 ELISA ELISA 44本讲稿第四十四页，共四十四页