【教学课件】第二章抗原抗体反应.ppt

第二章第二章 抗原抗体反应抗原抗体反应 第一节第一节 抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的原理一、抗原抗体结合力一、抗原抗体结合力二、抗原抗体的亲和性和亲和力二、抗原抗体的亲和性和亲和力三、亲水胶体转化为疏水胶体三、亲水胶体转化为疏水胶体第二节第二节 抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点 一、特异性一、特异性 二、可逆性二、可逆性 三、比例性三、比例性 四、阶段性四、阶段性第三节第三节 影响抗原抗体反应的因素影响抗原抗体反应的因素 一、反应物自身因素一、反应物自身因素 二、环境因素二、环境因素第四节第四节 免疫学检测技术的类型免疫学检测技术的类型思考题思考题小结小结第一节第一节 抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。的特异性结合反应。物质基础物质基础:抗原表位与抗体高变区间的互补结合抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体亲水胶体转化为疏水胶体静电引力静电引力（electrostatic forces）范德华引力范德华引力:作用最小作用最小（van der Waals interactions）氢键氢键:最具特异性最具特异性（hydrogen bond）疏水作用力疏水作用力:作用最大作用最大（hydrophobic interactions）抗原抗体结合力示意图抗原抗体结合力示意图一、抗原抗体结合力一、抗原抗体结合力抗体分子上一个抗抗体分子上一个抗原结合点与对应的原结合点与对应的抗原决定簇之间相抗原决定簇之间相适应而存在着的引适应而存在着的引力，是抗原抗体间力，是抗原抗体间固有的结合力固有的结合力亲和力亲和力(affinity)抗原抗体亲和力示意图抗原抗体亲和力示意图二、抗原抗体的亲和力和亲合力二、抗原抗体的亲和力和亲合力抗体结合部位抗体结合部位与抗原表位之与抗原表位之间结合的强度间结合的强度亲合力亲合力(avidity)抗原抗体亲合力示意图抗原抗体亲合力示意图 可见反应可见反应抗原抗体复合物抗原抗体复合物 (疏水胶体疏水胶体)电解质电解质 抗原抗原(亲水胶体亲水胶体)抗体抗体(亲水胶体亲水胶体)+三、三、亲水胶体转化为疏水胶体亲水胶体转化为疏水胶体第二节第二节 抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点特异性特异性 可逆性可逆性比例性比例性 阶段性阶段性特异性：特异性：抗原与抗抗原与抗体结合反应的专一体结合反应的专一性性抗原抗体反应特异性示意图抗原抗体反应特异性示意图分子基础分子基础:抗原表位与抗体分抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互子高变区之间空间构型的互补性补性一、特异性一、特异性两种不同的抗原两种不同的抗原分子具有部分相分子具有部分相同或类似结构的同或类似结构的抗原表位，可与抗原表位，可与彼此相应的抗血彼此相应的抗血清发生反应清发生反应交叉反应交叉反应（cross reactions）抗原抗体交叉反应示意图抗原抗体交叉反应示意图二、可逆性二、可逆性可逆性：可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素：影响因素：抗体对相应抗原的亲合力抗体对相应抗原的亲合力亲合力越高，结亲合力越高，结合越牢固，越不易解离合越牢固，越不易解离 环境因素对复合物的影响环境因素对复合物的影响pHpH、离子强度、离子强度 前带前带(prezone)：抗体过量：抗体过量后带后带(postzone)：抗原过量：抗原过量等价带等价带(equivalence zone)(equivalence zone)：抗原抗体比例合适抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图抗原抗体反应比例性示意图比例性：比例性：抗原与抗体发生抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量可见反应需遵循一定的量比关系比关系三、比例性三、比例性第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象沉淀和细胞溶解等现象 四、阶段性四、阶段性第三节第三节 影响抗原抗体反应的因素影响抗原抗体反应的因素抗原、抗体反应物的自身因素抗原、抗体反应物的自身因素环境因素环境因素一、反应物自身因素一、反应物自身因素抗原抗原:理化性状、表位种类和数目理化性状、表位种类和数目抗体抗体:来源、特异性、亲和性、效价来源、特异性、亲和性、效价电解质电解质:生理盐水或缓冲液生理盐水或缓冲液酸碱度酸碱度:pH6pH9温温 度度:1540，37最适最适二、环境因素二、环境因素反应类型反应类型实验技术实验技术结果判断结果判断凝集反应凝集反应 直接凝集试验直接凝集试验观察凝集现象观察凝集现象间接凝集试验间接凝集试验同上同上抗球蛋白试验抗球蛋白试验同上同上沉淀反应沉淀反应 液相沉淀试验液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧观察扫描沉淀峰、沉淀弧补体参与补体参与的反应的反应补体溶血试验补体溶血试验观察测定溶血现象观察测定溶血现象补体结合试验补体结合试验同上同上第四节第四节 免疫学检测技术的类型免疫学检测技术的类型反应类型反应类型实验技术实验技术结果判断结果判断中和反应中和反应病毒中和试验病毒中和试验检测病毒感染性检测病毒感染性毒素中和试验毒素中和试验检测外毒素毒性检测外毒素毒性标记免疫反应标记免疫反应荧光免疫技术荧光免疫技术检测荧光现象检测荧光现象放射免疫技术放射免疫技术检测放射性强度检测放射性强度酶免疫技术酶免疫技术检测酶底物显色检测酶底物显色发光免疫技术发光免疫技术检测发光强度检测发光强度金免疫技术金免疫技术检测金颗粒沉淀检测金颗粒沉淀按实际用途分为按实际用途分为:免疫组织化学技术免疫组织化学技术(immunohistochemistry technique,IHCT)免疫测定免疫测定(immunoassay)按检测现象分为按检测现象分为:放射免疫技术放射免疫技术 荧光免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术酶免疫技术 化学发光免疫技术化学发光免疫技术金免疫技术金免疫技术按测定反应体系的物理状态分为按测定反应体系的物理状态分为:均相免疫测定均相免疫测定(homogenous immunoassay）非均相免疫测定非均相免疫测定(heterogenous immunoassay)标记免疫技术：标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析1 1什么是抗原抗体反应？什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？抗原抗体反应的原理是什么？2 2抗原抗体的结合力有哪些？抗原抗体的结合力有哪些？3 3抗原抗体反应有哪些特点？抗原抗体反应有哪些特点？4 4如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？5 5什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？6 6如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？7 7抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？8 8抗原抗体反应有哪些影响因素？抗原抗体反应有哪些影响因素？9 9基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？1010什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？思考题思考题小结小结 抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。的特异性结合反应。抗原抗体之间的结合力涉及静电引力、范德华抗原抗体之间的结合力涉及静电引力、范德华引力、氢键和疏水作用力。引力、氢键和疏水作用力。抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例性和阶段性。性和阶段性。影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和环境因素。素和环境因素。免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。中和反应和标记免疫反应五种类型。