课题3　血红蛋白的提取和分离 (13)(精品).ppt

课题课题3 血红蛋白血红蛋白的提取和分离的提取和分离一、课题的目标：通过尝试对血液中血红蛋白的一、课题的目标：通过尝试对血液中血红蛋白的 提取和分离，提取和分离，理解色谱法、电泳法理解色谱法、电泳法二、二、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法课题重点：凝胶色谱法的原理和方法三、课题难点：样品的预处理、色谱柱填料的处理三、课题难点：样品的预处理、色谱柱填料的处理 和色谱柱的装填和色谱柱的装填思考：思考：“课题课题1-DNA1-DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”实验理想的材实验理想的材料是什么？料是什么？“课题课题3-3-血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么？原因是？这实验理想的材料又是什么？原因是？答：鸡的红细胞具有细胞核，答：鸡的红细胞具有细胞核，含有含有DNADNA，便便于进行于进行DNADNA的提取，哺乳类动物成熟的红细胞的提取，哺乳类动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单无细胞核，结构简单，血红蛋白，血红蛋白含量丰富含量丰富便便于提取血红蛋白。于提取血红蛋白。一、基础知识一、基础知识：（一）（一）蛋白质分离原理蛋白质分离原理（二）二）蛋白质分离蛋白质分离的方法的方法 1）凝胶色谱法：又称分配色谱法）凝胶色谱法：又称分配色谱法 2）电泳法）电泳法（三）缓冲液的作用三）缓冲液的作用蛋白质提取与分离的依据蛋白质提取与分离的依据 蛋白质的物理化学性质差异：蛋白质的物理化学性质差异：1.1.分子的形状、大小分子的形状、大小 2.2.电荷性质和多少电荷性质和多少 3.3.溶解度溶解度 4.4.吸附性质吸附性质 5.5.对其他分子亲和力对其他分子亲和力 1.1.凝胶色谱法凝胶色谱法 一些微小一些微小多孔的球体多孔的球体（内含许多贯穿的（内含许多贯穿的通道通道，具多孔的凝胶就叫，具多孔的凝胶就叫分子筛分子筛）根据根据相对分子质量的大小相对分子质量的大小分离蛋白质的方法分离蛋白质的方法（2）概念：）概念：（1）凝胶）凝胶3 3、原理、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（当不同的蛋白质通过凝胶时，（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（程（），移动速度（），移动速度（），而），而（）的蛋白质无法进入）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（凝胶内部的通道，只能在（）移）移动，路程（动，路程（），移动速度（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。分离。相对分子质量较小相对分子质量较小较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快总结：大分子经过路程短，流动快；总结：大分子经过路程短，流动快；小分子经过路程长，流动慢。小分子经过路程长，流动慢。洗脱：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。混合物混合物上上 柱柱洗洗脱脱大分子流动快大分子流动快小分子流动慢小分子流动慢收收 集集大分子大分子收收 集集小分子小分子 4、具体过程、具体过程 3、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制 通常由（通常由（）种缓冲剂溶解于水）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（中配制而成。调节缓冲剂的（）就可以制得（就可以制得（）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。12使用比例使用比例在不同在不同PH范围内范围内 思考：说出人体血液中缓冲液。思考：说出人体血液中缓冲液。NaH2PO4 /Na2HPO4H2CO3 /NaHCO3由由弱酸弱酸和相应的和相应的强碱盐强碱盐溶解于溶解于水水中。中。如如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等等缓冲溶液洗脱剂缓冲溶液洗脱剂 （1）作用：）作用：（2）配制：）配制：抵制外界酸碱对溶液抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而的干扰而保持保持 pH稳定。稳定。（3 3）在血红蛋白的提取和分离实验中用的缓冲液的原因？）在血红蛋白的提取和分离实验中用的缓冲液的原因？目的是利用缓冲液目的是利用缓冲液模拟细胞内的模拟细胞内的PH环境环境，保证血红蛋白的保证血红蛋白的正常结构正常结构和和功能功能。电泳：电泳：1 1、概念：指带电粒子在电场作用下发、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。生迁移的过程。2 2、原理：、原理：电泳检测结果电泳检测结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳使使用用SDS聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳测测定定蛋蛋白白质质的的分分子子量量时时，可可选选用用一一组组已已知知分分子子量量的的标标准准蛋蛋白白同同时时进进行行电电泳泳，根根据据已已知知分分子子量量的的标标准准蛋蛋白白的的电电泳泳区区带带位位置置，用用电电泳泳迁迁移移率率和和分分子子量量的的对对数数作作标标准准曲曲线，可以测定未知蛋白质的分子量。线，可以测定未知蛋白质的分子量。3.3.分类：分类：琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳和和聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定（测定（）通常用通常用 SDSSDS聚丙稀酰胺凝胶电泳聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量蛋白质相对分子质量2凝胶电泳法：凝胶电泳法：1）原理：）原理：不同蛋白质的不同蛋白质的带电性质带电性质（正电荷或负电荷）（正电荷或负电荷）、电量、电量、分子形状和大小分子形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。向和运动速度不同。2）影响蛋白质分子运动速度的因素影响蛋白质分子运动速度的因素电泳：电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程3）常用电泳方法）常用电泳方法 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳聚丙酰胺凝胶电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 在测定蛋白质分子量时通常用SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳，使用时可选用一组已知分子量的标准蛋白同使用时可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳做对照，根据两者的电泳区带位置，利时进行电泳做对照，根据两者的电泳区带位置，利用相关计算公式算出相对分子量用相关计算公式算出相对分子量 SDS SDS 带负电荷多的带负电荷多的 ，因而掩盖了不同种蛋白质，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷的差别，间的电荷的差别，使蛋白质使蛋白质迁移速率仅取决于分子迁移速率仅取决于分子大小大小。影响蛋白质分子运动速度的因素影响蛋白质分子运动速度的因素决定决定运动方向运动方向决定决定运动速率运动速率电荷性质电荷性质电荷量电荷量分子形状分子形状分子大小分子大小1.1.样品处理样品处理血血液液血浆血浆水分水分固体物质固体物质血浆蛋白血浆蛋白无机盐无机盐磷脂磷脂葡萄糖等葡萄糖等血细胞血细胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多最多）血红血红蛋白蛋白（）90血液组成成分血液组成成分阅读思考：阅读思考：1.血液由血液由_和和_两部分组成。两部分组成。2.血细胞中血细胞中_细胞数量最多，细胞的含量细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是最高的化合物是_。3.该化合物是由该化合物是由 _和和_构构成的，其中每个亚基中都含有一个能与成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和和CO2结合的结合的_基团。基团。血浆血浆血细胞血细胞红细胞红细胞血红蛋白血红蛋白2条条-肽链肽链2条条-肽链肽链 亚铁血红素亚铁血红素血红蛋白血红蛋白1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞阅读思考：洗涤的阅读思考：洗涤的目的目的是什么？是什么？洗涤的洗涤的方法方法是什么？是什么？洗涤干净洗涤干净的标志是什么？的标志是什么？血液血液100mL3g柠檬酸钠柠檬酸钠低速短时低速短时间离心间离心红细胞红细胞血浆血浆吸出血浆吸出血浆红细胞红细胞5倍体积生理盐水倍体积生理盐水搅拌搅拌10min重复洗涤重复洗涤3次，次，直至上清液没有黄色直至上清液没有黄色红细胞的洗涤红细胞的洗涤2.释放血红蛋白释放血红蛋白阅读思考：阅读思考：释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质，有什么用？哪些物质，有什么用？目的分析：目的分析：1.蒸馏水蒸馏水的作用是的作用是_。2.加入加入甲苯甲苯的作用是的作用是_。3.充分搅拌的目的是充分搅拌的目的是_。使红细胞大量吸水胀裂使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的细胞膜溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂加速红细胞的破裂滤纸滤纸过滤过滤脂类物质脂类物质3.3.分离血红蛋白分离血红蛋白分离过程分离过程红细胞红细胞混合液混合液高速离心高速离心10min 离心离心管管烧杯烧杯有机溶剂有机溶剂血红蛋白血红蛋白分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液有机溶剂有机溶剂 （无色透明的（无色透明的甲苯甲苯层）层）脂类物质脂类物质 （白色白色脂溶脂溶性物质沉淀层）性物质沉淀层）血血红蛋红蛋白溶液白溶液 （红色透明液体）（红色透明液体）红细胞红细胞破碎破碎物沉（暗红色沉淀物）物沉（暗红色沉淀物）20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液4.透析血红蛋白透析血红蛋白透析的目的是什么？透析的目的是什么？1mL1mL1mL去除血红蛋白中的小分子杂质去除血红蛋白中的小分子杂质利用透析袋透析2.2.透析透析(粗分离粗分离)a a过程：过程：b b目的：目的：c c原理：原理：除去样品中分子量较小的杂质除去样品中分子量较小的杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。子保留在袋内。（4 4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经纯化，最后经SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。进行纯度鉴定。样品纯化的目的是样品纯化的目的是_。血红蛋白有什么特点？血红蛋白有什么特点？_。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去 血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；这使血红蛋察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。2 2、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制3.3.为什么在本实验中实用缓冲溶液为什么在本实验中实用缓冲溶液 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是是磷酸缓冲液磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细，目的是利用缓冲液模拟细胞内的胞内的PHPH环境，保证血红蛋白的正常结构环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（和功能，便于观察（红色红色）和材料的科学）和材料的科学研究（研究（活性活性）纯化纯化凝胶色谱法凝胶色谱法1.凝胶色谱柱的制作：凝胶色谱柱的制作：2.凝胶色谱柱的装填：凝胶色谱柱的装填：教材图教材图5193.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱1.凝胶色谱柱的制作凝胶色谱柱的制作打孔打孔挖穴挖穴安管安管覆网覆网纱包纱包插管插管凝胶色谱柱取长为凝胶色谱柱取长为40 cm40 cm，内径为，内径为1 16 cm6 cm，有关说法中，正确的是，有关说法中，正确的是 (ABD )(ABD )多多A A一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果的效果B B凝胶色谱柱过高超过凝胶色谱柱过高超过1 m1 m，不影响分离，不影响分离的效果的效果C C凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度度D D凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大样品的稀释度过大注意：注意：（1 1）凝胶颗粒蒸馏水凝胶颗粒蒸馏水充分溶胀；充分溶胀；凝胶装填时凝胶装填时尽量尽量紧密紧密；装填时；装填时不能有气泡存在：不能有气泡存在：因为气泡会因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。（2 2）装完后，立即用缓冲液洗涤，使凝胶）装完后，立即用缓冲液洗涤，使凝胶装填紧密装填紧密（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填 凝胶的选择：凝胶的选择：凝胶的选择：凝胶的选择：A A、材料：、材料：B B、代表意义、代表意义：“G G”表示表示 。7575表示表示 凝胶的前处理：凝胶的前处理：凝胶的前处理：凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：配置凝胶悬浮液：计算并称计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。配成凝胶悬浮液。凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法：A A、固定：、固定：将色谱柱将色谱柱装置固定在支架上。装置固定在支架上。B B、装填：、装填：将凝胶悬浮液一次性将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶的装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。填装均匀。注意：注意：1 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。凝胶颗粒之间的空隙。2 2、装填凝胶柱时不得有气泡、装填凝胶柱时不得有气泡存在：存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。降低分离效果。洗涤平衡洗涤平衡 装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在()()高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲磷酸缓冲液（液（pHpH为为7.07.0）充分（）充分（）1212小时。小时。洗涤平衡洗涤平衡50cm50cm3.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱1.调液面调液面 2.加样加样 3.再调液面再调液面 4.洗脱洗脱 5.收集收集缓冲液缓冲液凝胶凝胶3.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱1.调液面调液面 2.加样加样 3.再调液面再调液面 4.洗脱洗脱 5.收集收集缓冲液缓冲液凝胶凝胶3.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱1.调液面调液面 2.加样加样 4.洗脱洗脱 5.收集收集缓冲液缓冲液凝胶凝胶注意：洗脱过程不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，注意：洗脱过程不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。否则重新填装。3.再调液面再调液面1.调液面调液面 2.加样加样3.再调液面再调液面 4.洗脱洗脱、5.收集收集（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱注意：注意：注意：注意：正确的加样操作是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。、贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。开始进行层析收集得到的纯化后的蛋白注意事项注意事项1.红细胞的洗涤：红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。洗涤次数不能过少；低速、短时离心。2.凝胶的预处理凝胶的预处理：沸水浴法，还能除去微生物和气泡沸水浴法，还能除去微生物和气泡3.色谱柱的装填：色谱柱的装填：装填尽量紧密；无气泡；洗脱液不能断流装填尽量紧密；无气泡；洗脱液不能断流。4.色谱柱成功标志：色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动红色区带均匀一致地移动。血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。离过程非常直观，大大简化了实验操作。思考思考血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即（）；然后通过凝胶色谱法）；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品的（的（）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行（行（）。）。思考思考样品的粗分离样品的粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定观察你处理的血液样品离心后是否分层观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），如果分层不明显，），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。蛋白的提取纯度。三三 实验结果分析与评价实验结果分析与评价注意：注意：凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。的洗脱次序，降低分离效果。洗涤平衡洗涤平衡注意液面不要低于凝胶表面，否注意液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。否则重新填装。由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，观察色带移动或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。以消除气泡，消除不了时要重新装柱。如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。注意事项注意事项1.红细胞的洗涤：红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。洗涤次数不能过少；低速、短时离心。2.凝胶的预处理：凝胶的预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡3.色谱柱的装填：色谱柱的装填：装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。4.色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。知识总结知识总结血血红红蛋蛋白白的的提提取取和和分分离离蛋白质分子的差异性蛋白质分子的差异性凝胶色谱法凝胶色谱法原原 理理分离过程分离过程凝胶电泳法凝胶电泳法缓冲溶液缓冲溶液组组 成成作作 用用蛋白质的蛋白质的提取分离提取分离样品处理样品处理粗粗 分分 离离 纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定1、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是白质的叙述，正确的是A、相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对 分子质量较大的蛋白质分子质量较大的蛋白质B、相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对 分子质量较大的蛋白质分子质量较大的蛋白质C、相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对 分子质量较大的蛋白质分子质量较大的蛋白质D、二者根本无法比较二者根本无法比较练习巩固练习巩固2.2.相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个的进行过程可表示为图中哪一个B3.3.3.3.凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是的共同点是的共同点是的共同点是()()()()A.A.A.A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径改变蛋白质分子通过凝胶时的路径改变蛋白质分子通过凝胶时的路径改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B.B.B.B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C.C.C.C.将酶或细胞固定在凝胶中将酶或细胞固定在凝胶中将酶或细胞固定在凝胶中将酶或细胞固定在凝胶中 D.D.D.D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度4.4.4.4.在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，其作用主要是其作用主要是其作用主要是其作用主要是()()()()A.A.A.A.使酶的活性最高使酶的活性最高使酶的活性最高使酶的活性最高 B.B.B.B.使蛋白质的活性最高使蛋白质的活性最高使蛋白质的活性最高使蛋白质的活性最高 C.C.C.C.维持蛋白质所带的电荷维持蛋白质所带的电荷维持蛋白质所带的电荷维持蛋白质所带的电荷 D.D.D.D.使蛋白质带上电荷使蛋白质带上电荷使蛋白质带上电荷使蛋白质带上电荷A AC C5、使用、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A 电荷的多少电荷的多少 B 分子的大小分子的大小C 肽链的多少肽链的多少 D 分子形状的差异分子形状的差异6.6.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（其中正确的是（）A A可采集猪血作为实验材料可采集猪血作为实验材料 B B用蒸馏水重复洗涤红细胞用蒸馏水重复洗涤红细胞C C血红蛋白释放后应低速短时间离心血红蛋白释放后应低速短时间离心 D D洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液A8.8.在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是因是A A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱 次序，降低分离效果次序，降低分离效果B B、气泡阻碍蛋白质的运动、气泡阻碍蛋白质的运动C C、气泡与蛋白质发生化学反应、气泡与蛋白质发生化学反应D D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密9.9.样品的加入和洗脱的操作不正确的是样品的加入和洗脱的操作不正确的是A A、加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝、加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B B、加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内、加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C C、等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口、等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D D、用吸管小心的将、用吸管小心的将1ml1ml透析后的样品加到色谱柱的透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面顶端，不要破坏凝胶面