临床微生物检验：厌氧菌课件.ppt

厌厌 氧氧 菌菌anaerobic bacteria广州医科大学金域检验学院临床微生物检验教研室广州医科大学金域检验学院临床微生物检验教研室掌握掌握厌氧菌的种类、标本要求、实验室检查厌氧菌的种类、标本要求、实验室检查掌握掌握常见厌氧芽孢梭菌的生物学特征常见厌氧芽孢梭菌的生物学特征重点重点在有氧环境中不能生长，无氧或低氧分压在有氧环境中不能生长，无氧或低氧分压环境中才能生长一类细菌。环境中才能生长一类细菌。（缺乏完善的酶系统，只能以无氧发酵进缺乏完善的酶系统，只能以无氧发酵进行能量代谢行能量代谢）概念概念 (1)(1)革兰阳性有芽胞杆菌革兰阳性有芽胞杆菌(梭状芽孢杆菌属梭状芽孢杆菌属）破伤风芽孢杆菌破伤风芽孢杆菌 产气荚膜梭状芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌 肉毒梭状芽孢杆菌肉毒梭状芽孢杆菌 艰难梭状芽孢杆菌艰难梭状芽孢杆菌种类种类1 1、生物学分类、生物学分类(2)(2)革兰阳性无芽胞杆菌（革兰阳性无芽胞杆菌（正常菌群正常菌群）乳酸杆菌、双歧杆菌、优杆菌属乳酸杆菌、双歧杆菌、优杆菌属、丙酸杆菌属、丙酸杆菌属(3)(3)革兰阴性无芽胞杆菌革兰阴性无芽胞杆菌 类杆菌属类杆菌属、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、梭杆、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、梭杆菌属菌属(4)(4)革兰阳性厌氧球菌革兰阳性厌氧球菌 消化球菌属、消化链球菌属消化球菌属、消化链球菌属(5)(5)革兰阴性厌氧球菌革兰阴性厌氧球菌 韦荣球菌属韦荣球菌属种种 类类1 1、生物学分类、生物学分类对氧极端敏感的厌氧菌：对氧极端敏感的厌氧菌：在在0.5%0.5%的氧分压或在的氧分压或在空气中暴露空气中暴露10mins10mins即死亡的细菌。即死亡的细菌。中度厌氧菌中度厌氧菌：能在能在2%-8%2%-8%的氧分压环境中或空气的氧分压环境中或空气暴露暴露60mins60mins90mins90mins或在脓液标本中或在脓液标本中72h72h还可以分还可以分离出来的细菌。离出来的细菌。耐氧厌氧菌耐氧厌氧菌：其耐氧程度刚好可以在刚配制出来其耐氧程度刚好可以在刚配制出来的固体厌氧培养基上生长，一旦生长出来，在空的固体厌氧培养基上生长，一旦生长出来，在空气中暴露数小时仍不死亡的细菌。气中暴露数小时仍不死亡的细菌。种种 类类2 2、对氧的耐受程度、对氧的耐受程度部位部位细菌菌总数数比率比率(CFU/mlormg)厌氧菌氧菌:需氧菌需氧菌UpperAirway鼻洗液鼻洗液103-1043-5:1口水口水108-1091:1牙牙齿表面表面1010-10111:1牙牙龈缝隙隙 1011-10121000:1GastrointestinalTract胃胃 102-1051:1小小肠102-1041:1回回肠104-1071:1结肠1011-10121000:1FemaleGenitalTract子子宫颈108-1093-5:1阴道阴道108-1093-5:1感染普遍，以混合感染为主。感染普遍，以混合感染为主。内源性外源性，内源性外源性，无芽胞厌氧菌芽胞厌氧菌无芽胞厌氧菌芽胞厌氧菌临床意义临床意义发生内源性感染危险因素（条件）发生内源性感染危险因素（条件）1.1.局部组织血液供给障碍：局部缺氧局部组织血液供给障碍：局部缺氧 2.2.机体局部屏障作用破坏：组织氧张力机体局部屏障作用破坏：组织氧张力 3.3.机体免疫功能机体免疫功能 4.4.菌群失调菌群失调 5.5.长期应用氨基糖苷类药物可诱发厌氧菌感染长期应用氨基糖苷类药物可诱发厌氧菌感染临床意义临床意义感染的临床及细菌学指征：感染的临床及细菌学指征：1.局部产生气体2.发生在黏膜附近的感染3.深部外伤感染4.常规血培养阴性的心内膜炎，并发脓毒症血栓静脉炎等5.有恶臭的分泌物6.胃肠和生殖道手术后感染、流产后发生的感染 7.其它：镜检有菌而培养阴性，或在液体及半固体培养基深部长的细菌等临床意义临床意义临床标本肉眼观察分离培养增菌培养及直接镜检厌氧培养2-7d确定厌养培养需氧培养需氧培养厌氧培养生长无生长生长兼性厌氧菌专性厌氧菌保存菌种分类鉴定药物敏感试验形态与染色菌落特性生化反应药敏性鉴定气液相色谱厌氧菌的检验厌氧菌的检验原则：原则：采集时注意采集时注意不被正常菌群污染不被正常菌群污染，尽量尽量 避免接避免接 触空气触空气下列易污染标本下列易污染标本不宜不宜厌氧培养厌氧培养齿龈、咽喉拭子，痰液或气管吸出物（呼吸道），胃和肠道内容物或肛拭子、粪便（消化道），阴道或宫颈拭子（生殖道），中段尿或导尿液（泌尿道），皮肤表面或伤口边缘等标本不同部位标本采集法不同部位标本采集法 针筒抽取、穿刺术等标本采集标本采集 1.1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行针筒运送法：各种液体标本，简便易行 2.2.无菌厌氧袋法：注射器、组织标本无菌厌氧袋法：注射器、组织标本3.3.已排气不含氧的管或瓶（内含厌氧指示剂）：已排气不含氧的管或瓶（内含厌氧指示剂）：厌氧标本运送厌氧标本运送即送即检，避免标本干燥、接触空气和低温保存即送即检，避免标本干燥、接触空气和低温保存3 3）培养方法培养方法 厌氧罐培养法厌氧罐培养法 厌氧气袋培养法厌氧气袋培养法 厌氧培养箱培养法厌氧培养箱培养法厌氧菌培养厌氧菌培养厌氧罐法厌氧罐法以物理或化学方法造成无氧环境以物理或化学方法造成无氧环境美蓝指示剂（有氧美蓝指示剂（有氧蓝色、蓝色、无氧无色无氧无色）刃天青指示剂（有氧刃天青指示剂（有氧红色、红色、无氧无色无氧无色）抽气换气法：抽气换气法：10%H10%H2 2、10%CO10%CO2 2、80%N80%N2 2、钯粒、钯粒 冷触冷触媒媒法法：钯粒钯粒硼氢化钾、碳酸氢钠、枸橼酸药片硼氢化钾、碳酸氢钠、枸橼酸药片 C C2 2O+HO+H2 2 H H2 2O O O O2 2厌氧菌培养厌氧菌培养 气袋法：气袋法：原理同上冷触媒法，简单方便。厌氧手套箱：厌氧手套箱：比较好的厌氧菌培养比较好的厌氧菌培养设备其他：其他：OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿可反复打开，Oxyrase酶系统能使培养基中O2去除，并产生CO2。1.1.初代培养：初代培养：1 1）培养基：新鲜、预还原）培养基：新鲜、预还原 非选择性培养基非选择性培养基：强化：强化BAP(BAP(血、维生素、氯化血、维生素、氯化血红素等血红素等 ),),几乎所有厌氧菌均可生长。几乎所有厌氧菌均可生长。选择培养基选择培养基 ：KVLBKVLB、BBEBBE、EYAEYA、CCFACCFA2 2）标本接种）标本接种固体和液体培养基同时接种固体和液体培养基同时接种检验方法检验方法检验方法检验方法2、结果观察、结果观察 1）次代培养和厌氧菌再确定）次代培养和厌氧菌再确定 ABC厌氧培养（初代培养）厌氧培养（初代培养）需氧培养需氧培养厌氧培养厌氧培养次代次代培养培养 采集运送采集运送 培养基培养基 厌氧环境厌氧环境 时间等因素时间等因素检验方法检验方法2、结果观察、结果观察 2）厌氧菌培养失误的原因）厌氧菌培养失误的原因形态与染色：形态与染色：用用24h内幼龄菌，多染色性，多形性内幼龄菌，多染色性，多形性菌落性状：菌落性状：色素、溶血、荧光等色素、溶血、荧光等生化试验：生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等试验、触酶试验等抗生素敏感鉴定抗生素敏感鉴定：灭滴灵（厌氧菌灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆）、卡那霉素（梭杆S）、万古）、万古霉素等霉素等鉴定试验鉴定试验气液相色谱技术（气液相色谱技术（GLC）厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），肪酸），过柱分析过柱分析，定性定量定性定量。厌氧菌快速发酵试验厌氧菌快速发酵试验：利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反应，应，4h内可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，内可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，只需浓厌氧菌液即可。只需浓厌氧菌液即可。鉴定试验鉴定试验药物敏感试验药物敏感试验考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况：明确厌氧菌引起的严重感染，已确证厌氧菌感染而经验用药无效，需长期用药的厌氧菌感染。方法方法培养基培养基接种浓度接种浓度孵育时间孵育时间优点优点琼脂稀释法琼脂稀释法布氏血琼脂布氏血琼脂105细胞点细胞点48H可同时测多个菌株可同时测多个菌株肉汤稀释法肉汤稀释法布氏心脑浸液布氏心脑浸液106CFUML48H经济，可商品化经济，可商品化 E试验试验布氏血琼脂布氏血琼脂0.5麦氏比浊度麦氏比浊度2448HMIC精确精确内酰胺酶内酰胺酶琼脂培养基琼脂培养基单个菌落单个菌落3050min经济快速检测对青经济快速检测对青霉素霉素G和和AMP的耐药的耐药耐药性：耐药性：耐药性：耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药厌氧菌中唯一有芽孢菌属厌氧菌中唯一有芽孢菌属厌氧的粗大革兰阳性杆菌厌氧的粗大革兰阳性杆菌是目前细菌中最大的一个菌属是目前细菌中最大的一个菌属广泛分布在自然界（以芽孢的形式）广泛分布在自然界（以芽孢的形式）梭状芽胞杆菌属梭状芽胞杆菌属引起人类疾病的各种常见引起人类疾病的各种常见厌氧芽胞梭菌厌氧芽胞梭菌细菌名称细菌名称所致疾病所致疾病破伤风梭菌破伤风梭菌破伤风破伤风产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌气性坏疽、毒血症、坏死性肠炎、气性坏疽、毒血症、坏死性肠炎、食物中毒等食物中毒等肉毒梭菌肉毒梭菌食物中毒、婴儿肉毒梭菌症、创伤食物中毒、婴儿肉毒梭菌症、创伤肉毒症肉毒症艰难梭菌艰难梭菌抗生素相关性腹泻、抗生素相关性抗生素相关性腹泻、抗生素相关性伪膜性肠炎伪膜性肠炎破伤风梭菌破伤风梭菌无侵袭力，仅在局部繁殖，不入血无侵袭力，仅在局部繁殖，不入血致病因素致病因素-痉挛毒素（外毒素）痉挛毒素（外毒素）临床症状临床症状-牙关紧闭，角弓反张等牙关紧闭，角弓反张等 临床意义临床意义1.对氧敏感的破伤风溶血毒素对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)2.质粒编码的质粒编码的破伤风痉挛毒素破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)属神经毒属神经毒(neurotoxin)，毒性极强，毒性极强(对人致死量对人致死量1g)蛋蛋白白质质（可可脱脱毒毒成成类类毒毒素素），不不耐耐热热：轻轻链链（A链链）-S-S-重链（重链（B链）链）B链：神经节苷脂结合的单位链：神经节苷脂结合的单位A链：毒性作用链：毒性作用致病因子致病因子下列情况易致破伤风梭菌感染下列情况易致破伤风梭菌感染伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血血有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口临床意义临床意义 1.1.形态染色形态染色:革兰革兰阳性，芽胞阳性，芽胞圆形，圆形，比菌体大比菌体大，位于，位于 菌体顶端呈菌体顶端呈鼓槌状鼓槌状，无荚膜，无荚膜，有鞭毛有鞭毛。生物学性状生物学性状专性厌氧专性厌氧，在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽毛状。，在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽毛状。庖肉培养基轻度变浊，肉渣部分消化，微变黑，庖肉培养基轻度变浊，肉渣部分消化，微变黑，恶恶臭臭，产少量气体。，产少量气体。培养特性培养特性 不发酵分解糖类不发酵分解糖类 硝酸盐硝酸盐 H2SH2S 明胶明胶生化反应生化反应芽胞耐热、耐干燥芽胞耐热、耐干燥对青霉素、红霉素、四环素等敏感对青霉素、红霉素、四环素等敏感氨基糖苷类耐药氨基糖苷类耐药。抵抗力抵抗力 症状典型者，症状典型者，一般不作细菌检查。一般不作细菌检查。怀疑感染：怀疑感染：直接涂片镜检直接涂片镜检 分离培养，鉴定鉴别分离培养，鉴定鉴别微生物学检查微生物学检查产气荚膜梭状芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌1.1.外毒素和侵袭性酶类外毒素和侵袭性酶类引起引起气性坏疽气性坏疽的临床表现的临床表现 （水肿、皮下捻发音水肿、皮下捻发音）毒素（卵磷脂毒素）毒素（卵磷脂毒素）产生量最大产生量最大引引起起血血管管通通透透性性增增加加伴伴大大量量溶溶血血、组组织织坏坏死死、肝脏、心功能受损肝脏、心功能受损在气性坏疽的形成中起主要作用在气性坏疽的形成中起主要作用、等其他毒素等其他毒素引起组织坏死、血管通透性增加、水肿、产气引起组织坏死、血管通透性增加、水肿、产气2.2.肠毒素肠毒素食物中毒（坏死性肠炎）。食物中毒（坏死性肠炎）。临床意义临床意义下列情况易导致产气荚膜梭菌感染：下列情况易导致产气荚膜梭菌感染：开放性骨折开放性骨折大块肌肉撕裂大块肌肉撕裂组织严重坏死组织严重坏死形态染色形态染色：革兰革兰阳性阳性粗短大杆菌粗短大杆菌，两端钝圆，两端钝圆，芽胞圆形位于菌体中央或次极端，芽胞圆形位于菌体中央或次极端，直径不大直径不大于菌体于菌体，但较少形成，但较少形成，有荚膜有荚膜，无鞭毛无鞭毛。生物学性状生物学性状 非严格厌氧，非严格厌氧，繁殖迅速繁殖迅速 血平板上双层溶血环血平板上双层溶血环 疱肉培养基中疱肉培养基中 “汹涌发酵汹涌发酵”。培养特性培养特性 H2SH2S，明胶，葡萄糖，乳糖，麦芽糖，明胶，葡萄糖，乳糖，麦芽糖，蔗糖，蔗糖，卵磷脂酶卵磷脂酶 生化反应生化反应卵磷脂酶阳性卵磷脂酶阳性 微生物学检查法微生物学检查法直接涂片镜检直接涂片镜检深部创口取材涂片深部创口取材涂片革兰阳性大杆菌革兰阳性大杆菌白细胞少且不典型白细胞少且不典型伴有其他杂菌伴有其他杂菌早期诊断可避免病人最终截肢或死亡早期诊断可避免病人最终截肢或死亡 微生物学检查法微生物学检查法分离培养及动物实验分离培养及动物实验接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定定动物实验动物实验如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于105CFU/克食品或克食品或106CFU/克粪便可确立诊断克粪便可确立诊断肉毒梭菌肉毒梭菌1.1.形态染色：形态染色：革兰革兰阳性阳性大杆菌大杆菌,芽胞芽胞椭圆形位于菌椭圆形位于菌体次极端体次极端,比菌体粗比菌体粗,呈呈网球拍状网球拍状。无荚膜无荚膜,有有鞭毛鞭毛。2.2.培养特性：普通培养基生长，血平板上培养特性：普通培养基生长，血平板上溶血环，溶血环，庖肉培养基肉渣消化，变黑，恶臭庖肉培养基肉渣消化，变黑，恶臭。3.3.生化反应：生化反应：H2SH2S,明胶明胶,葡萄糖葡萄糖,乳糖乳糖,麦麦芽糖芽糖,吲哚吲哚,卵磷脂卵磷脂酶酶 生物学性状生物学性状（二）临床意义二）临床意义肉毒毒素肉毒毒素-毒性最强毒性最强嗜神经性，使神经麻痹嗜神经性，使神经麻痹；食；食物中毒。物中毒。剧毒（对人致死量为剧毒（对人致死量为0.10.1g)g)（三）微生物学检查（三）微生物学检查直接涂片镜检直接涂片镜检 ，分离培养，鉴定鉴别，分离培养，鉴定鉴别艰难梭菌艰难梭菌（一）生物学性状：（一）生物学性状：1.1.形态染色：形态染色：革兰阳性革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形大杆菌，芽胞椭圆形或长方形，位于菌体次极端，或长方形，位于菌体次极端，无荚膜，有鞭无荚膜，有鞭毛毛。2.2.培养特性：培养特性：严格厌氧严格厌氧，血平板无溶血环，血平板无溶血环，CCFACCFA平板呈黄色菌落，在紫外灯下可见黄绿平板呈黄色菌落，在紫外灯下可见黄绿荧光荧光。3.3.生化反应：生化反应：H2SH2S,蔗糖蔗糖,葡萄糖葡萄糖,乳糖乳糖,麦芽糖麦芽糖,吲哚吲哚,脂酶脂酶 （二）临床意义（二）临床意义正常菌群正常菌群。医院感染的重要病原菌。医院感染的重要病原菌。产生产生A、B两两种毒素，即肠毒素和细胞毒素，种毒素，即肠毒素和细胞毒素，引起引起假膜性肠炎。假膜性肠炎。（三）微生物学检查（三）微生物学检查 直接涂片镜检直接涂片镜检 ，分离培养，鉴定鉴别，分离培养，鉴定鉴别艰难梭菌在艰难梭菌在CCFACCFA平板上菌落（培养平板上菌落（培养48h)48h)临床厌氧菌感染中最常见的病原菌临床厌氧菌感染中最常见的病原菌一、类杆菌属一、类杆菌属 BBEBBE平板上有黑色晕圈平板上有黑色晕圈二、普雷沃菌属二、普雷沃菌属 KVLBKVLB出现黑色菌落出现黑色菌落三三、卟啉单胞菌属卟啉单胞菌属四四、梭梭杆菌属杆菌属 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌有革兰阳性无芽胞厌氧杆菌有6 6个属，几十个菌种，个属，几十个菌种，临床常见的有临床常见的有丙酸杆菌、优杆菌、乳酸杆菌、双丙酸杆菌、优杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌歧杆菌、蛛网菌和放线菌。、蛛网菌和放线菌。它们多是人和动物皮肤、口腔、肠道等部位的重它们多是人和动物皮肤、口腔、肠道等部位的重要要生理菌群生理菌群，在体内起到调节和维持人体微生态在体内起到调节和维持人体微生态平衡的重要作用。平衡的重要作用。它们的菌落、生化反应、菌体形态等都很相似，它们的菌落、生化反应、菌体形态等都很相似，鉴定较难。应用气液相色谱法（鉴定较难。应用气液相色谱法（GLCGLC），根据其代），根据其代谢产物不同，可对菌属做出初步判定。谢产物不同，可对菌属做出初步判定。厌氧性球菌厌氧性球菌(Anaerobic cocciAnaerobic cocci)是临床厌氧感是临床厌氧感染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的2525主要包括主要包括革兰阳性革兰阳性:消化球菌属消化球菌属 消化链球菌属消化链球菌属 革兰阴性革兰阴性:韦荣球菌属韦荣球菌属 厌氧球菌厌氧球菌消化球菌属黑色消化球菌黑色消化球菌(Peptococcus nigerPeptococcus niger)是消化球菌是消化球菌属中唯一的菌种。属中唯一的菌种。革兰阳性球菌。直径革兰阳性球菌。直径0.30.31.3m1.3m，单个、成双、，单个、成双、短链或成堆排列。无芽胞，无荚膜。专性厌氧短链或成堆排列。无芽胞，无荚膜。专性厌氧菌，生长缓慢，厌氧培养菌，生长缓慢，厌氧培养2 24 4天形成天形成黑色不溶黑色不溶血的小菌落血的小菌落。标本黑色有臭味标本黑色有臭味是该细菌感染的重要特点。是该细菌感染的重要特点。消化链球菌属代表菌为厌氧消化链球菌代表菌为厌氧消化链球菌（P.anaerobiusP.anaerobius）革兰阳性球形或卵圆形，大革兰阳性球形或卵圆形，大小不等，菌体直径小不等，菌体直径0.30.31m1m，常，常成双或呈短链状排列成双或呈短链状排列。无鞭毛，无芽胞，无荚膜。无鞭毛，无芽胞，无荚膜。消化链球菌培养特性专性厌氧，营养要求较高，需羊血和血清培养基专性厌氧，营养要求较高，需羊血和血清培养基才能生长。在厌氧血平板上，菌落直径才能生长。在厌氧血平板上，菌落直径0.50.51mm1mm、灰白色、凸起、不透明、边缘整齐，一般不溶、灰白色、凸起、不透明、边缘整齐，一般不溶血，偶有血，偶有或或溶血。溶血。生化反应不活泼，在硫乙醇生化反应不活泼，在硫乙醇 酸钠液体培养基中，呈颗粒酸钠液体培养基中，呈颗粒 状沉淀生长。在其平板上生状沉淀生长。在其平板上生 化反应较为明显，吐温化反应较为明显，吐温-80-80可可 促进其生长。促进其生长。韦荣球菌属 韦荣球菌属细菌形态相似，为韦荣球菌属细菌形态相似，为革兰阴性球菌革兰阴性球菌。直径直径0.30.30.5m0.5m，多排列成对、，多排列成对、近似奈瑟球近似奈瑟球菌菌。无鞭毛、无芽胞。无鞭毛、无芽胞。专性厌氧，血琼脂平板上生长良好，培养专性厌氧，血琼脂平板上生长良好，培养48h 48h 后，形成直径后，形成直径1 12mm2mm圆形、凸起、灰白色或黄圆形、凸起、灰白色或黄色混浊、不溶血菌落；在硫乙醇酸盐肉汤中混色混浊、不溶血菌落；在硫乙醇酸盐肉汤中混浊生长，产生小气泡。浊生长，产生小气泡。新鲜培养物立即置紫外线下照射，菌落可显红新鲜培养物立即置紫外线下照射，菌落可显红色荧光，接触空气后荧光消失。色荧光，接触空气后荧光消失。生化反应不活泼，不分解糖类，还原硝酸盐。生化反应不活泼，不分解糖类，还原硝酸盐。革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正常这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正常菌群的重要组成成员，部分菌株可作为条件致菌群的重要组成成员，部分菌株可作为条件致病菌引起感染。病菌引起感染。常见菌属有常见菌属有：类杆菌属：类杆菌属 普雷沃菌属普雷沃菌属 卟啉（紫）单胞菌属卟啉（紫）单胞菌属 梭杆菌属梭杆菌属类杆菌属类杆菌属类杆菌属(BacteroidesBacteroides)是临床上是临床上最重要的革兰阴性无芽胞厌氧杆最重要的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，临床标本中以脆弱类杆菌菌，临床标本中以脆弱类杆菌（B.fragilisB.fragilis）最常见。）最常见。脆弱类杆菌为革兰阴性，大小为脆弱类杆菌为革兰阴性，大小为(0.8(0.81.3m)1.3m)(1.6(1.68m)8m)，着色不均，两端钝圆而浓染，中着色不均，两端钝圆而浓染，中间不着色染色较浅似空泡。在陈间不着色染色较浅似空泡。在陈旧培养物或含糖的液体培养基中旧培养物或含糖的液体培养基中呈明显多形性，无鞭毛、无芽胞，呈明显多形性，无鞭毛、无芽胞，多数有荚膜。多数有荚膜。普雷沃菌属普雷沃菌属普雷沃菌属(PrevotellaPrevotella)是从类杆菌属分出是从类杆菌属分出的一个新菌属，代表菌种是产黑色素普雷沃的一个新菌属，代表菌种是产黑色素普雷沃菌菌(P.melaninogenicaP.melaninogenica)。革兰阴性球杆状，大小约革兰阴性球杆状，大小约0.80.81.51.5 m m1.01.03.53.5 m m，排列成双或短链，两端钝圆，有，排列成双或短链，两端钝圆，有浓染和空泡。浓染和空泡。产黑色素普雷沃菌培养特性专性厌氧菌，在厌氧平板上专性厌氧菌，在厌氧平板上2 23 3天培养后，菌落直径为天培养后，菌落直径为0.50.53mm3mm，圆形、凸起、不，圆形、凸起、不透明，许多菌株呈透明，许多菌株呈-溶血。溶血。菌落在紫外光（波长菌落在紫外光（波长366nm366nm）照射下有砖红色荧光，逐渐照射下有砖红色荧光，逐渐转为褐黑色和棕色菌落，转为褐黑色和棕色菌落，5 57 7天转为黑色菌落，色素出现天转为黑色菌落，色素出现后荧光即消失。后荧光即消失。卟啉（紫）单胞菌属 紫单胞菌属紫单胞菌属(PorphyromonasPorphyromonas)又称卟啉单胞菌又称卟啉单胞菌属。代表菌种是不解糖紫单胞菌。属。代表菌种是不解糖紫单胞菌。革兰阴性杆菌或球杆菌，大小约革兰阴性杆菌或球杆菌，大小约1.51.53.53.5 m m0.80.81.51.5 m m，两端钝圆，着色不均匀。，两端钝圆，着色不均匀。35353737厌氧培养厌氧培养3 35d5d可形成可形成1 12mm2mm圆形、凸圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐、棕色或黑色菌落。起、表面光滑、边缘整齐、棕色或黑色菌落。维生素维生素K K1 1和氯化血红素可促进本菌生长及黑色素和氯化血红素可促进本菌生长及黑色素的产生。的产生。梭杆菌属 梭杆菌属（梭杆菌属（FusobacteriumFusobacterium）是临）是临 床常见的革兰阴性无芽胞厌氧杆床常见的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，形态细长，两端尖细如梭菌，形态细长，两端尖细如梭 。坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，常引起急性扁桃体炎，有时并发常引起急性扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童和青年单核细胞增多症，是儿童和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧菌。局部症状还包括颈间的厌氧菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒性血栓静脉隙感染和颈静脉脓毒性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增生性转移脓肿和菌血症。增生性转移脓肿和菌血症。坏死梭杆菌形态坏死梭杆菌形态习习 题题关于厌氧菌，错误的是关于厌氧菌，错误的是A采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气B产气荚膜梭在强化产气荚膜梭在强化血平板上出现双层溶血环血平板上出现双层溶血环C美蓝指示剂在有氧时变蓝色美蓝指示剂在有氧时变蓝色D齿龈、咽喉拭子、痰液或气管吸出物等标本不宜厌齿龈、咽喉拭子、痰液或气管吸出物等标本不宜厌氧培养氧培养E局部组织的氧化还原电势上升有利厌氧菌厌氧菌生长E鉴定试验鉴定试验形态与染色：形态与染色：用用24h内幼龄菌，多染色性，多形性内幼龄菌，多染色性，多形性菌落性状：菌落性状：色素、溶血、荧光等色素、溶血、荧光等生化试验：生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等抗生素敏感鉴定抗生素敏感鉴定：灭滴灵（厌氧菌灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆）、卡那霉素（梭杆S）、万古）、万古霉素等霉素等鉴定试验鉴定试验气液相色谱技术（气液相色谱技术（GLC）厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），过过柱分析柱分析，定性定量定性定量。厌氧菌快速发酵试验厌氧菌快速发酵试验：利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反应，利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反应，4h内内可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，只需浓厌氧菌液即可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，只需浓厌氧菌液即可。可。药物敏感试验考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况：明确厌氧菌引起的严重感染，已确证厌氧菌感染而经验用药无效，需长期用药的厌氧菌感染。方法方法培养基培养基接种浓度接种浓度孵育时间孵育时间优点优点琼脂稀释法琼脂稀释法布氏血琼脂布氏血琼脂105细胞点细胞点48H可同时测多个菌株可同时测多个菌株肉汤稀释法肉汤稀释法布氏心脑浸液布氏心脑浸液106CFUML48H经济，可商品化经济，可商品化E试验试验布氏血琼脂布氏血琼脂0.5麦氏比浊度麦氏比浊度2448HMIC精确精确内酰胺酶内酰胺酶琼脂培养基琼脂培养基单个菌落单个菌落3050min经济快速检测对青经济快速检测对青霉素霉素G和和AMP的耐药的耐药耐药性：耐药性：耐药性：耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药厌氧菌直接镜检初步鉴别厌氧菌直接镜检初步鉴别菌名菌名革兰染色革兰染色形态及其他特征形态及其他特征 破伤风杆菌破伤风杆菌 阳杆阳杆 细长、梭形或鼓状，细长、梭形或鼓状，有芽胞、周鞭毛有芽胞、周鞭毛 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌 阳杆阳杆 粗大杆菌，呈单或双排列，粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有芽胞，有荚膜有荚膜 产黑色素类杆菌产黑色素类杆菌 阴杆阴杆 多形性，长短不一，多形性，长短不一，标本有恶臭标本有恶臭，琥珀味，紫外线照射发红色荧光琥珀味，紫外线照射发红色荧光 韦荣球菌韦荣球菌 阴球阴球 极小的极小的革兰阴性球菌革兰阴性球菌 消化链球菌消化链球菌 阳球阳球 革兰阳性呈现革兰阳性呈现链状的小球菌链状的小球菌形态、大小、排列、染色性、形态、大小、排列、染色性、有无芽胞、色素、气味等特性有无芽胞、色素、气味等特性厌氧手套箱厌氧手套箱ABC厌氧培养（初代培养）厌氧培养（初代培养）需氧培养需氧培养厌氧培养厌氧培养次代次代培养培养