多糖提取实验设计流程.doc

多糖提取实验设计流程食用菌多糖的提取方法有水提法、碱提法和酶提法等，其中酶提法是利用酶对细胞结构的破坏作用,使存在于细胞内部的多糖释放出来，从而提高了多糖的得率.本次实验采用纤维素酶和果胶酶对紫蘑菇进行水解，研究香菇多糖的最佳提取工艺，并探讨蘑菇粒度、蘑菇溶解方法以及酶法提取中多糖提取效果的评价方法。可以同步做三组对比试验：采用水提，不加酶;采用酶法提取;采用酶空白（只加酶，不加蘑菇粉）。由于酶中也含有少量的糖类成分，其存在将会对蘑菇多糖的提取产生影响。因此，在计算酶法提取多糖的效果时,要减去酶本身所引入的糖。在确定最佳酶浓度时更要考虑。一、实验流程：蘑菇干燥粉碎过筛加水浸泡0。5h调PH加入纤维素酶提取离心过滤测多糖提取率 式中: n一提取液稀释倍数； C一提取液中多糖的浓度(mg/mL）;V一提取液体积(mL）;m一蘑菇的质量（mg） 。测定时取三个平行样，结果数据为平行样的平均数值。二、具体实验步骤：1、多糖标准曲线的绘制精密称取105干燥恒重的葡萄糖标准品100mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度,摇匀.精密吸取0。4、0。8、1。2、1.6、2。0、2。4、2.8 mL分别置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取上述各种溶液2.0 mL,分别加入5苯酚溶液1.0 mL,摇匀，迅速加入5。0 mL浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15 min,然后置冷水浴中冷却30 min，随行空白,在490 nm波长处测定吸光度.以标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，并计算其标准曲线回归方程。（1）精密度试验：精密吸取1。0 ml供试液按“标准曲线的制备”项下操作，分别测定吸光度,求得RSD。（2）重现性及多糖含量测定：精密称取巴西蘑菇多糖0。1000g，按“供试液的配制"和“标准曲线的制备”项下操作，分别测定吸光度，求得多糖的平均含量，及RSD值。2、单因素实验(1)水提法称取蘑菇粉末2g，加入适量水（最佳固液比为1：20)，在50水中浸泡1h。升温至100，提取2.5h。将混合物离心、浓缩、乙醇沉淀，计算多糖提取率和纯度。单因素选择范围提取温度（）固液比（W/V)提取时间（h）701:161h801：181。5h901:202h1001：222.5h1:243h（2）酶法提取称取蘑菇粉末2g，加入适量水(最佳固液比为1:20)，在50水中浸泡1h。升温至90，提取0。5h。冷却至40,加入酶浓度1，提取液总体积为100ml，PH值5。0，酶解提取1h。然后升温至90提取1h灭酶。将混合物离心、浓缩、乙醇沉淀，计算多糖提取率和纯度。单因素选择范围酶浓度酶解温度PH值酶解时间h0.25303.50.50。5354。010。75404.521.0455.031.25505.541。5556.0实验所需药品：纤维素酶,果胶酶,葡萄糖，苯酚，浓硫酸，乙醇器材：100ml容量瓶，50ml容量瓶