典型教学视频案例简介.pdf

华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 1 典型教学视频案例简介 目录 溶解氧的测定-碘量法实验简介.2 绿藻门实验简介.6 鱼病的检查与诊断实验简介.13 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 2 溶解氧的测定溶解氧的测定-碘量法实验简介碘量法实验简介 一、实验目的 了解养殖水体溶氧垂直分布特点；不同水体溶氧含量特点；掌握溶氧量测定的方法。二、实验原理 在水样中加入过量的 Mn2+和碱性 KI 溶液，Mn2+与碱作用生成白色 Mn(OH)2沉淀，在有溶解氧存在时 Mn(OH)2立即被氧化形成三价或四价锰的棕色沉淀，这一过程称为溶解氧的固定。高价锰化合物沉淀在酸性介质中，被 I-还原并溶解，同时析出和溶氧相当量的游离I2（需要有 KI 过量才能溶解），再用 Na2S2O3标准溶液滴定析出的游离 I2，以淀粉指示剂指示滴定终点,根据 Na2S2O3的用量可以计算水中的溶氧含量。测定过程（固定、酸化、滴定）的主要反应如下：固定：Mn2+2OH-=Mn(OH)2(白色)2Mn(OH)2+O2 =2MnO(OH)2（棕色）酸化：MnO(OH)2+2I-+4H+=Mn2+I2+3H2O 滴定：I2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6 这种测定方法又称 Winkler 法,是测定水中溶氧的经典标准方法。但是在有氧化性干扰物（如 NO2-、Fe3+）共存时,氧化物也可氧化 I-成I2,使测定结果偏高；有还原性干扰物共存时，干扰物会使 I2 还原变成I-,使测定结果偏低。当水样中 NO2-N 的含量大于 50 g/L，但 Fe2+不大于 1 mg/L 时，可采用修正的叠氮化钠碘量法；水样中 Fe2+过多时应使用高锰酸钾碘量法（参考水和废水监测分析方法或环境检测分析方法等资料）。三、主要仪器及试材 1、仪器 碱式滴定管、溶氧水样瓶（或磨口试剂瓶）、碘量瓶（或具塞锥形瓶）、移液管、吸量管等。2、试剂 2.1 锰盐溶液：溶液如有沉淀可静置后使用上清液。华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 3 2.2 碱性 KI 溶液：装入棕色聚乙烯塑料瓶中备用。2.3 H2SO4溶液（1+1）。2.4 H2SO4溶液（1 mol/L)。2.5 淀粉指示剂（5 g/L）2。2.6 Na2S2O3标准溶液(0.01 mol/L)3：称取 Na2S2O35H2O（AR）约 2.5 g，溶解于刚煮沸放冷的纯水中，再加 0.4 g NaOH，稀释到 1000 mL，可再加 1 滴二硫化碳作保存剂，摇匀后贮于棕色试剂瓶中。待 2周后标定准确浓度。2.7 碘酸钾标准溶液(0.01000 mol/L,16KIO3）。2.8 Na2S2O3溶液的标定：在锥形瓶中用 100150 mL 纯水溶解 0.5 g 固体 KI,再加入 H2SO4溶液（1 mol/L）5 mL，混合均匀后加碘酸钾标准溶液(0.01000 mol/L,16KIO3）20.00 mL，用纯水稀释至约 200 mL，立即用 Na2S2O3溶液滴定释放出的 I2。滴定到淡黄色时加 5 g/L 淀粉指示剂 1 mL，继续滴定到蓝色消失，并在半分钟内不再出现蓝色为止，记录滴定消耗体积2 23Na S OV。按下式计算 Na2S2O3溶液的浓度2 23Na S Oc：1133662 232 23KIOKIONa S ONa S OVccV 或 2 232 23Na S Omol/LNa S OmL0.01000 20.00cV 四、实验方法与步骤 1、水样的采集：用采水器把水样采上来后，立即把采水器的胶管插入水样瓶（125 mL 左右）底部，放出少量水，润洗 23 次，然后将胶管再插入瓶底，令水样缓慢注入瓶内，并溢出约 23 瓶体积的水。在不停止注水的情况下，提出导管，盖好瓶塞。瓶中不得有气泡。2、固定：立即向水样瓶中加入 MnSO4和碱性 KI 各 0.5 mL。加试剂时刻度吸管尖端应插入水面下 23 mm，让试剂自行流出，沉降到瓶底。然后立即盖好瓶塞反复倒转 20 次左右，使溶氧被完全固定。静置，待沉淀降到瓶的中部后可以进行酸化。固定后的水样在避光条件下可保存 24h。固定操作要迅速，水样瓶中不得有气泡。华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 4 3、酸化：打开瓶塞，用刻度吸管沿瓶口内壁加入（1+1）H2SO4 1.0 mL，盖上瓶塞，反复倒转摇匀，使沉淀完全溶解。酸化后的水样需要尽快滴定。4、滴定：将酸化后的水样摇匀，用移液管吸取 50.00 mL 水样于锥形瓶中（V样），立即用 Na2S2O3标准溶液（2 23Na S Oc）滴定。当滴定至淡黄色时加入淀粉指示剂约 1 mL，用 Na2S2O3继续滴定至蓝色刚刚退去并在 20 秒内不返回，记录滴定消耗体积（2 23Na S OV）。要求两次滴定的偏差不超过 0.05 mL。五、实验注意事项 1、藻类多时，酸化后大量碘将被藻吸附形成棕色沉淀，好象是亚锰酸没有溶解完全，这时要注意将水样充分摇匀后连同沉淀一起取出滴定。2、NO2-对测定有干扰。滴定到终点后蓝色立即返回的现象就可能是有 NO2-存在所造成。3、没有可溶性淀粉时可以自己用土豆提制。六、实验结果处理 溶氧含量DO常用 mg/L、mL/L 两种单位表示，可通过以下公式计算：1、用 mg/L 表示时,计算公式为:2 232 231Na S Omol/LNa S OmL3DOmg LmL8 10cVfV 样 式中：8 为 1 mol Na2S2O3相当于 8 g 氧；mLmL1.0VVfVVV瓶瓶瓶固剂瓶,V瓶为水样瓶容积；V固剂为固定溶氧加入试剂的总体积。2、把溶解氧含量换算为标准状态下的体积表示:11DODOmL Lmg L22.432.0 七、思考题 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 5 1.碘量法测定溶解氧的原理是什么？2.固定后的水样中有气泡存在对测定结果产生什么影响？3.如用浓硫酸代替硫酸（1+1）进行酸化该怎样处理？4.滴定速度很慢，时间太长对测定结果有无影响？5.亚硝酸根怎样干扰滴定？如何消除其干扰？6*.固定溶氧时，如果在 125 mL 的水样瓶中混入了 1 个空气泡（假设体积为 0.5 mL）。试估算气泡将使溶氧测定结果偏高多少？华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 6 绿藻门实验简介绿藻门实验简介 一、实验目的和要求 通过观察绿藻门常见种类，掌握该两类浮游植物的主要形态特征，识别其常见种类。二、观察材料 鲜活标本及固定保存标本。三、实验器材及药品 同实验一。四、采集方法 同实验一。五、绿藻门（Chlorophyta）主要特征和常见种类：1、主要特征：藻体鲜绿色，形状多样，分布广。绿藻的色素以叶绿素为主，运动的藻体细胞顶生二条或四条等长的鞭毛。细胞壁内层纤维质，外层果胶质；同化产物为淀粉，其蛋白核均有淀粉鞘。浮游性绿藻主要是属于绿藻门中的团藻目、四胞藻目、绿球藻目和接合藻纲中的鼓藻目的种类，这几类植物的主要特征如下：（A）团藻目 植物体为单细胞或群体。有鞭毛的种类除休眠期外，始终具有鞭毛，能游泳。（B）四胞藻目 单细胞球形，以 2-4 个为一组分散在群体胶 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 7 被四周。每个细胞具有 2-4 条鞭毛，但因鞭毛全部埋在胶被中，不能运动故称假鞭毛。（C）绿球藻目 植物体为单细胞、群体、集结体或由集结体组成的群体。无细胞分裂，常见的生殖方式为似亲孢子，不具鞭毛。（D）鼓藻目 植物体为单细胞或群体，群体球状或丝状。绝大多数种类的细胞均分为两个半细胞，半细胞内各具一个（罕为数个同形的）色素体，主要繁殖方式是接合生殖。2、常见种类：（1）衣藻属 Chlamydomonas（图 1-115）：藻体为单细胞，呈卵形或圆形。细胞内有 1 个厚底杯状的叶绿体，顶生两根等长的鞭毛，鞭毛的基部有 2 个伸缩泡，在其侧面有 1 感光作用的红色眼点。核一个，位于叶绿体上方的杯中。（2）团藻属 Volvox（图 1-122）：由数百个至数千个衣藻型细胞构成球状的群体。单个细胞排列于球体表面，细胞与细胞之间有细胞丝相连，少数细胞特化成大形繁殖孢称子群体。（3）空球藻属 Euclorlna（图 1-121）：由 16、32 或 64 个排列疏松的衣藻细胞构成球状或椭圆形群体。由于藻体中空，故称空球藻；外具一胶被，细胞间和群体间充满胶质。（4）实球藻属 pandorina（图 1-120）：藻体球形或椭圆形。群体由 8、16、32 或 64 个排列紧密的衣藻细胞构成的，具胶被群体。细胞宽端向外，窄端向内，并且每个细胞具有等长，顶生鞭毛伸出胶囊外。华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 8 （5）盘藻属 Gonlum（图 1-119）：藻体由 4、16 或 32 个衣藻型细胞排列成扁平胶被状群体。（6）卡德藻属（四鞭藻属）Carteria（图 1-116）：藻体为绿色的单细胞。细胞球形、椭圆形或卵形，顶生四条等长的鞭毛，色素体杯状星形或 H 形，眼点明显 （7）四胞藻属 Tetraspore（图 1-124）：藻体细胞球形或椭圆形，常 2 个或多数四个细胞成群组成胶质群体。早春出现时为淡绿色胶质块，浮在水体表面，手摸有粘滑感。（8）小球藻属 Chlorella（图 1-131）：藻体为小型单细胞或聚集成不规则团块。细胞球形或椭圆形，1 个周生杯状或片状色素体，无造粉核，可人工培养大量繁殖，自然状态下，多分布在肥沃的小水体中，以似亲孢子进行繁殖。（9）绿球藻属 Chlorococctan（图 1-129）：藻体单细胞或组成群体，单个细胞较小、群体藻大。细胞壁较厚而不均匀，叶绿体杯状。自然状态下，多为陆生，尤以潮湿土壤上多，少数种类生活于水体中，以动孢子进行无性繁殖。（10）卵囊藻属 Docystis（图 1-136）：藻体为卵圆形的单细胞，也可四个或多个组成群体。细胞两端中央增厚形成小结，群体外具透明的胶囊。（11）四角藻属 Tetraedrom（图 1-132）：藻体单细胞，呈三角形、四角形或多角形，细胞角顶突出，角分枝或不分枝。（12）纤维藻属（针联藻属）Anklstroclesmus（图 1-135）：藻体 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 9 细胞细长，纤维形、直或弯曲，两端尖锐。藻丝单细胞或互相交错成束。（13）聚镰藻属（月牙藻属）Selenastrum（图 1-134）：藻体的细胞为新月形。由 4、8 或 16 个细胞以凸面相贴成群体，其外无胶质被。（14）蹄形藻属 Kirchneriella（图 1-133）：细胞蹄形或镰刀形，两端尖锐或钝园。每 4 个或 8 个细胞以凸面相对成为一组，但数量不如聚镰藻多，群体外具胶质被。（15）十字藻属 Crucigenia（图 1-143）：常由 4 个、16 个或更多的细胞结合成方形或长方形群体，单个细胞三角形、椭圆形或四角形。其中每四个细胞间常有十字形的空隙。（16）网球藻属 Dictyosphaeriam（图 1-138）：单个细胞球形，卵形或肾形，每四个细胞着生于母细胞残余的十字形分枝的顶端。群体外具胶被。（17）水网藻属 Hgclrouictyon：藻体为大型种类。肉眼可见网片状或网袋形绿藻，单个细胞长筒形，每一网目由 4-6 个细胞组成。幼时细胞内含有一个片状色素体，一个造粉核和细胞核，老成之后，色素体呈网状，甚至分成多数的小块。（18）栅藻属 Soenclesmus（图 1-142）：细胞长圆形或纺锤形等，常 4 或 8 个细胞组成栅状捧列的群体。通常作单列排列，壁光滑或具棘刺。具 1 个造粉核和 1 个细胞核。（19）盘星藻属 Pediastrum（图 1-141）：由 2、4、8、16、32、64 或 128 个细胞排列成单层盘状或星状细胞的定形群体，其细胞有 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 10 作同心环排列的趋势，幼年细胞有一侧生的色素体，一个造粉核。老细胞色素体扩散，造粉核多个。（20）腔星藻属（空星藻）Coelastrum（图 1-145）：藻体由 4、16、32 以至 128 个细胞排列成真性定形空心群体。细胞球形、卵形，细胞与细胞靠得很紧或彼此间以细胞壁突起相互连接，幼年细胞色素体杯状，老细胞色素体扩散充满整个细胞。（21）丝藻属 Ulothrix 为不分枝的丝状体。细胞短园筒形。色素体带状，环绕原生质体，占细胞的 2/3 以上，其上有数个造粉核。（22）鞘藻属 Oedogonium（图 1-148）：植体为不分枝的丝状体。除明显的基细胞外，细胞都具分裂产生帽状环纹（帽鞘）的特性每一细胞含有一个核和网状色素体及多数造粉核。（23）水绵属 Spirogyra（图 1-163）：藻体为不分枝的丝状体，细胞圆柱形，内有 1-16 条带状色素体呈螺旋状盘绕，色素体上具一列造粉核。细胞外层具多量果胶质，故很滑腻。（24）双星藻属 Zygnema（图 1-164-a）：藻体为不分枝的丝状体，细胞园筒形，细胞内具 2 个星状轴生叶绿体，细胞核位于细胞中央，两个色素体中央各具造粉核一个。（25）转板藻属 Mougeotia（图 1-164-b）：藻体为不分枝的丝状体。细胞含有一个大型板状的色素体其中含有一列造粉核。色素体能随光照强度而转动。（26）新月鼓藻属 Closterium（图 1-159）：藻体单细胞，新月形，两端逐渐变细，细胞核位于细胞中央，核的两边各有一块色素体，蛋 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 11 白核沿中轴排列，在细胞两端各有 1 个液泡，其中有石膏结晶体。（27）鼓藻属 Cosmarium（图 1-160）：藻体单细胞，呈扁园形，共中部收缩成隘部。半细胞园形，半园形或近三角形等，细胞核居藻腰部，色素体有 1 到多个造粉核。（28）四棘鼓藻属 Arthroeesmus（图 1-165）：藻体单细胞，凹隘深，每个半细胞顶角 1 个（少数 2-3 条）粗刺，每个半细胞具 1 个轴生色素体，1-2 个蛋白核。（29）多棘鼓藻属 Xanthiclium：藻体单细胞，凹隘很深，每个半细胞具四条或多数的粗刺，色素体两个，轴生、片状或 4 个近于侧生、每一色素体含一造粉核。（30）微星鼓藻属（小星藻）Micrasterias（图 1-165）：藻体单细胞。细胞广椭圆形，多角形，极扁平成板状，细胞中部收缩成深的隘部。半细胞分裂为三片深裂的分叶，叶上突起可分叉，故半细胞深裂为星状。（31）叉星鼓藻属（角星鼓藻）Staurastrum（图 1-161）：藻体的细胞中央收缩为深的隘。各个半细胞常具由顶角延长成臂状突起，其上有小刺。色素体轴生，有放射状的突起伸向各突起。（32）顶接鼓藻属 Spondylosium：藻体细胞大小变化很大。细胞中部隘部较深，半细胞顶端相连成不分枝的丝状体。（33）葡萄藻属 Botryococcus（图 1-137）：细胞椭圆形，常两个一组彼此靠近，老成时以放射状粘质柄连接，形成葡萄状桔黄色群体。（34）无隔藻属 Vaucheria（图 1-157）：藻体为不规则分枝的丝 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 12 状体，丝状体上无细胞间隔，细胞核多个。有性生殖时，在成熟的植物体可见到卷曲管状透明的藏精器及球形的藏卵器 六、实验报告 1、绘图：（1）衣藻 （2）栅藻 （3）水绵 2、叙述所观察种类的主要特征 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 13 鱼病的检查与诊断实验简介鱼病的检查与诊断实验简介 一、实验目的 掌握鱼病检查的步骤和方法，了解诊断鱼病的程序。二、实验用具与材料 1显微镜，解剖镜，解剖用具，包括解剖盘、解剖刀、解剖针、大小手术剪、大小镊子等，培养皿、载玻片、盖玻片、纱布、滴管等。2蒸馏水、鱼用生理盐水（0.65%的氯化钠），70%的乙醇、福尔马林等。3鲜活的鱼。三、实验内容（一）鱼病的检查 1.鱼病检查的方法（1）肉眼检查法(目检法)目检法是一种简便而有效的检查方法。某些疾病具有特征性的肉眼可见的病理变化，一些大型的寄生原生动物、甲壳动物等肉眼即可辨别。但是，一些微小的病原或隐藏在寄主器官组织内的病原和症状，肉眼很难观察到。因此，需要进行镜检，以保证检查结果的完整、可靠和正确。（2）光学显微镜检查法(镜检法)镜检法是在光学显微镜或解剖镜下观察病症或病原体的方法，包括玻片压展法和载玻片压展法两种方法。玻片压展法适用于解剖镜或低倍显微镜检查。用二片厚约 34毫米，大小约 6 12 厘米的普通玻片，先将要检查的幼苗，或器官组织的一部分，或从体表刮下的粘液、肠管里取出的内含物等，放在其中的一片玻片上，滴加适量的蒸馏水或生理盐水(体外器官组织或粘液用蒸馏水，体内器官组织或内含物用生理盐水)，用另一片玻片将其压成透明的薄层，即可放在解剖镜或低倍显微镜下检查，如发现病原体或某些可疑的病症，仔细用镊子或解剖针、吸管，将其从薄层中 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 14 取出，放在盛有蒸馏水或生理盐水的培养皿里，进一步观察和处理。载玻片压展法适用于低倍或高倍显微镜检查。用小剪刀或镊子取出一小块组织或一小滴内含物置于载玻片上，滴加一小滴蒸馏水或生理盐水，盖上盖玻片，轻轻地压平后，先在低倍镜头下检查，发现寄生虫或可疑病变，再换用高倍镜头仔细检查。2.鱼病检查的步骤 检查病鱼需要按一定的顺序进行，以防忙乱和遗漏。其顺序是先体外，后体内。各器官也应按一定先后进行，通常的顺序是粘液、鳍、鼻腔、血液、鳃、口腔、脂肪组织、消化道（包括胃肠和盲囊）、肝、脾、胆囊、心脏、肾、膀胱、性腺、眼、脑、脊髓、肌肉。由于常见的主要鱼病大都发生在体表、鳃和肠道三个部位，故一般在实际诊断时，常常只着重检查这三个部位。（1）体表的检查 将鱼放在解剖盘里，首先观察其体色及肥满度等有关情况。再按顺序观察头部、背部、腹部和尾部，注意异常变化和寄生虫，例如皮肤是否擦伤或腐烂，是否长了水霉，有无发炎、充血或出血的症状，鳍条是否蛀烂，有没有锚头鳋、鲺等大型寄生虫，有没有白色小点状的小瓜虫囊泡，有没有白色的粘孢子虫胞囊等。在鱼类体表除肉眼可能见到的病症和病原体外，往往还有许多肉眼看不到的寄生虫，如口丝虫、隐鞭虫、车轮虫、三代虫等，这些病原必须经镜检才能观察清楚。检查方法是用解剖刀或弯头镊子刮取体表粘液，置于载玻片上，加上一小滴清水，盖上盖玻片后在显微镜下观察。再剪取小段鳍条，放在载玻片上，滴加适量蒸馏水，盖上盖玻片后在显微镜下观察。（2）鳃部的检查 首先肉眼观察鳃的色泽，粘液的多少，有无充血、发白或肿胀；有无污泥，是否腐烂，鳃盖是否 开天窗，有无肉眼可见的白色胞囊及大型的寄生虫等。然后用进行镜检。鳃是特别容易被病原体寄生的器官，细菌、水霉、鳃霉、各类原生动物、单殖吸虫、复殖吸虫的囊蚴、软体动物的幼虫、甲壳类等，在鳃上都可以找到。检查时，每边鳃至少要检查两片鳃片。鲢、鳙还要检查鳃耙。取鳃丝检查时，最好从每边鳃的第一片鳃片接近两端的位置剪取一小块，因为这个地方的病理变化较常见，寄生虫也较密集。检查完病理变化和小型寄生虫后，可把整个鳃放在培养皿里，加入蒸馏水，将鳃片置于载玻片，放在解剖镜下观察，观察时，用两根解剖针，把鳃丝逐条拨开，仔细检 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 15 查。（3）肠道的检查 剖开鱼体一侧的体壁，使所有内部器官显露出来。检查肠道时，先把肠外壁脂肪组织除干净，然后将肠管拉直。先肉眼观察肠管的粗细，有无充气、充血、穿孔等现象，肠外壁有无小白点等。再分别在肠道的前、中、后段各剪开一个小口，用小镊子从小口取出一些内含物放载玻片上，加一小滴生理盐水，盖上盖玻片，在显微镜下检查，每段肠道同时检查两片。最后再用剪刀小心地把整条肠道剪开，剪的时候将一枝剪尖插入肠腔，由后向前剪开肠壁，注意勿把肠内的大型寄生虫剪断，如果发现有大的寄生虫，先把它取出放于生理盐水中，再看看肠内壁有无小白点、有无溃烂、发红发紫或白色的瘤状物。最好把肠的内含物都刮下来，放在培养皿中，加入生理盐水稀释并搅匀，在解剖镜下检查。还可把肠按前、中、后三段剪断（小鱼的肠不必剪断），再用玻片压展法检查。（二）鱼病的诊断 通过观察、检查、调查、分析，对病鱼所患疾病做出正确的诊断后，才能对症下药或采取相应的综合措施，使疾病造成的损失降到最低限度。诊断鱼病的大致程序如下。1.了解发病鱼池的各种情况，包括水温、溶氧、pH 值等水质情况，以住鱼病流行的情况，饲养管理的情况（包括清塘、放养密度、投喂情况、防病措施），发病前后的池鱼活动、摄食等有关变化，池塘周围的环境情况，如水鸟、螺类的有无及多少，有无工厂、农田（污水的排放和农药的使用都可能毒害鱼类）和居民区等。2.在了解情况的同时，捞取鱼池中的病鱼进行鱼病检查。如出现的症状比较复杂，应尽可能找出主要原因。如果病鱼所出现的病症不明显，或单凭肉眼无法确定时，应进行镜检，然后依据病鱼所呈现的病理变化，结合病原的检查作出判断。在镜检过程中，要注意各种病原体的数量，分析其数量可否引起生病或造成死亡，这是很重要的步骤之一。3.认真分析检查与调查的结果，确定疾病发生的原因，并对症下药。4.进行治疗后的检查，如果出现了疗效，即死亡率下降、病情好转，则证明诊断和所采取的措施是正确的，此时诊断鱼病的过程才真正告一段落。如果没有出现疗效，还需要进一步的了解情况、检查和 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 16 分析，重新采取新的措施，直至解决问题。四、实验注意事项 1.供作检查用的鱼，必须是活的或刚死不久的。因为鱼死过久，病原体会离开鱼体或死亡，死去的病原体往往变形，或完全崩解腐烂，无法鉴别。同时有许多症状，在活的或刚死不久的鱼体上很明显，而在死亡过久的鱼体上无法辨认。2.供作检查用的鱼应放在盛水（原池水）的水桶内，在路途较远或没有水桶与其它容器的情况下，样品鱼可用湿布或湿纸包裹，以防干燥。3.检查病鱼过程中要保持体表的湿润。因为体表干燥后，病原体会很快死亡并分解，有些症状也会因干燥而变得不明显，甚至根本无法辨认。4.解剖用具要随时冲洗干净，以避免病原体从一条鱼带到另一条鱼，或从一种器官带到另一种器官，造成病原体寄生部位的混乱。5.检查病鱼时，应按照一定的程序进行，并按要求写明标签，否则会发生混乱或遗漏。不能肯定的病变标本或病原体，应将标本固定，以备日后进一步研究。五、思考题 1.准确分离各组织器官在鱼病检查中有何意义？2.鱼类有哪些免疫器官？其功能如何？附附 1：病原体的计数标准：病原体的计数标准 发病轻重程度与病原体的数量有直接关系，因此除了肯定病原体外，还应弄清病原体大致的数量。大型病原体的计数比较方便。但对于小型的病原体，如原生动物，在计数方面就有很大的困难，因为在显微镜下不可能将病原体逐个计算清楚，所以只能采用估计的方法处理。依据所定方法，采用同一标准进行计数，虽然不一定十分准确，但可相对说明鱼病危害的程度，为正确诊断和采取相应的防治措施提供依据。1.表示病原体数量的符号 病原体数量用+表示。+表示有；+表示多；+表示很多。在一般情况下，打+就开始少量死鱼，这时在生产上就必须采取治疗措施，否则可能引起病情加重。所以划+表示的方 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 17 法，在生产上可起到预报的作用，当然+出现死鱼也不是绝对不变的，如果鱼体比较瘦弱，有时+也可能死鱼，如果鱼体特别健壮，有时+也不一定死鱼，不过，都应采取相应治疗措施。2.各种病原体的计数 传染性鱼病，如草鱼出血病、细菌性烂鳃病、白皮病、赤皮病等按症状的严重程度分别用+表示轻微，+表示较重，+表示严重，并用文字描述相应症状。原生动物个体小，并且不同种类个体大小差异又很大。纤毛虫、毛管虫在低倍视野下有 1-20 个虫体记+；21-50 个虫体记+；50 个虫体以上记+。小瓜虫除按上面标准记数外，还要计算囊泡并用文字说明。鞭毛虫、变形虫、孢子虫则以显微镜的高倍视野为单位，具体标准同上。胞囊的计数，用文字说明。单殖吸虫、线虫、绦虫、棘头虫、甲壳动物、软体动物的幼虫，在 50 个以下均以数字说明，50 个以上，则说明估计数字或者计数部分器官的虫体数，例如，一片鳃上或一段肠内的虫体数。（低倍视野为 10 8；高倍视野为 10 40。病原体的数量，用载玻片镜检时，都是以同一玻片观察 3 个视野的平均数为准）。附附 2：各种器官的检查方法以及常见的寄生虫：各种器官的检查方法以及常见的寄生虫 1.鳍 在鱼的各种鳍上，往往有不少病原体寄生。检查时先仔细目检各鳍，在光亮的地方把鳍拉开，观察有无异样，有无大型的寄生虫，如甲壳动物、蛭类、单殖吸虫、线虫、软体动物的幼虫、小瓜虫的囊泡、粘孢子虫的胞囊等。在春季，鱼的尾鳍，有时在背鳍和臀鳍，会看到许多呈线状的红色虫体，这就是嗜子宫线虫。鳍条的粘液，要刮下来放在载玻片上镜检，可看到小瓜虫、车轮虫、斜管虫、鱼波豆虫、杯体虫等。2.鼻腔 先用肉眼仔细观察，有无大的寄生虫或症状，然后用小镊子或微吸管从鼻孔里取少许内含物镜检，可能发现粘孢子虫、车轮虫等原生动物，随后用吸管吸取少量清水注入鼻孔，再将液体吸出，放在培养皿里（要多吸几次）镜检，可能发现指环虫等。3.血液 检查血液时，可用如下方法取血。从鳃动脉取血 先用剪刀将一边鳃盖剪去，左手用镊子将鳃瓣掀起，右手用微吸管插入鳃动脉或腹动脉吸取血液。如果是小鱼，所用微吸管要比较尖细，吸取的血液不多，可直接放在载玻片上，盖上盖 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 18 玻片，进行镜检。如果是比较大的鱼，血液较多，可先把血液吸出放在玻璃器皿里，然后吸取一滴检查。血液较多的大鱼，应尽量把血液吸出，以免残余的大量血液流出，沾染鳃瓣。同时要注意，当用吸管取血时，必须避免吸管与鳃瓣接触，否则就会将寄生在鳃上的病原体带到血液里，造成病原体寄生部位的混乱。从心脏直接取血 从鱼的外表可以确定心脏的位置，即在鱼体腹面两鳃盖之间的最狭处。将这个部位的鳞片除去，用尖的微吸管插入心脏，即可吸取血液。还可用医用注射器插入抽血，但用的针头越粗越好，如果针头太细，血液容易凝固而抽不出来。镜检血液，可能发现锥体虫、隐鞭虫等原生动物。这些原生动物，身体都很小，一般要用高倍镜才容易辨认。原生动物检查完毕，将全部血液（如血液很多，可分开几次检查）放在培养皿里，用生理盐水稀释，进行镜检，可发现线虫或血居吸虫等比较大的寄生虫。4.鳃 同检查步骤（2）。5.口腔 先用肉眼仔细观察上下颚，可能发现吸虫的大胞囊、锚头鳋、鲺等。目检后，再用镊子刮取上下颚一些粘液镜检，有可能发现车轮虫。6.体腔：剖开鱼腹，解剖的方法，是左手将鱼握住（如果是比较小的鱼，可用大镊子把鱼夹住进行解剖），使腹面向上，右手用剪刀的一枝插入肛门，先向腹面中线偏向准备剪开的一边腹壁，向横侧剪开少许，从这里将剪刀插入，沿腹部中线一直剪至口的后缘。剪的时候，要将插入里面的剪尖稍向上翘起，然后将剪刀移至肛门，沿侧线向前一直剪至鳃盖的后缘，再向下将整个体壁剪下，体腔里的器官即可显露出来，这时候不要急于把内脏取出。首先要仔细观察露出来的器官，有无可疑的症状；同时注意肠壁上的脂肪组织、肝、胆囊、脾、鳔等有无肉眼可见的病原体。如果发现有白点，可能是粘孢子虫或微孢子虫。还可能发现线虫、绦虫、棘头虫等。目检完毕后，直接把腹腔液（如果是患重病的鱼，体腔内还往往有许多脓状的液体，叫作腹水）用吸管吸出，置于培养皿里进行检查。腹腔检查完后，用剪刀小心地从肛门和咽喉两处，把整条肠的两端剪断，轻轻地把内脏取出来，放在解剖盘上，逐个地把各器官分开，依次进行检查。7.脂肪组织 在胃肠的外壁有许多脂肪组织，先目检，可能发现线虫（往往盘成红色的瘤）、绦虫、棘头虫等。如果发现白点，肉眼 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 19 无法判断时，可用镊子取出，放在载玻片上，盖上盖玻片，轻轻地把它压破，进行镜检，可能是粘孢子或微孢子虫；同时还可以用压展法把脂肪组织压成薄片，进行镜检。8.胃肠 同检查步骤（3）。9.肝脏 先用肉眼观察外表，注意它的颜色，有无溃烂、病变、白点和肿瘤等。在肝的表面，有时可发现复殖吸虫的胞囊和虫体。如果有白点，可能是粘孢子虫或者微孢子虫、艾美虫之类。外表观察完毕，用镊子从肝上取少许组织放在载玻片上，盖上盖玻片，轻轻压平，进行镜检，可以发现粘孢子虫，微孢子虫的孢子或胞囊，还可能发现吸虫的囊蚴。肝的每一叶，要检查两片。10.脾 同肝脏检查方法，可能发现粘孢子虫的孢子或胞囊，有时也可发现吸虫的囊蚴。11.胆囊 取出胆囊时要特别小心，不要把它弄破，否则胆汁溢出，既沾染其他器官、造成病原寄生部位的混乱，同时又使胆汁中的病原体随胆汁溢出，造成漏检。取出胆囊后，放在培养皿里，先观察它的外表，注意它的颜色有无变化，有无其它可疑的症状等，然后剪开，放出胆汁，取一部分胆壁放在载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检。胆汁另行检查。在胆囊里，可发现鞭毛虫、粘孢子虫、微孢子虫、复殖吸虫和绦虫幼虫等寄生虫。胆囊壁和胆汁，除用载片进行镜检外，都要同时用玻片压展法进行镜检。12.心脏 用小剪刀剪开围心腔，剪下心脏，最好能把心脏和大的血管一起取下，放在盛有生理盐水的培养皿里。检查了外表以后，把心脏剪开，可能发现血居吸虫和线虫。用小镊子取一滴内含物，进行镜检，可能发现锥体虫、隐鞭虫和粘孢子虫。同时也要用玻片压展法进行检查。沉淀物也要检查。13.鳔 取鳔时，不要把它弄破，先观察它的外表，再把它剪开，可发现复殖吸虫、线虫。用镊子剥取鳔的内壁和外壁的薄膜，平摊在载玻片上，滴加少许生理盐水，进行镜检，可发现粘孢子虫和胞囊，同时用玻片压展法检查整个鳔。14.肾 肾脏紧贴在脊柱下面，取出肾时，要尽量把整个肾完整的取出，检查方法同肝脏。如果肾脏很大，镜检时，要前、中、后三部分各检查两片。在肾脏可发现粘孢子虫、艾美虫、微孢子虫、有时还可发现锥体虫、隐鞭虫，复殖吸虫、线虫等的幼虫也往往可被发现。15.膀胱 取出膀胱时要特别小心，因为膀胱不大明显，不容易 华中农业大学水产养殖实验教学中心典型教学视频案例简介 20 找到。有些鱼类，如鲤，一般没有明显的膀胱。要完整的取出膀胱，首先要把接近膀胱附近的一部分肌肉剪下来，放在玻片上，仔细找出膀胱的两根输尿管，将它们从附带的肌肉上分离出来。没有膀胱的鱼，则检查输尿管。取出膀胱和输尿管后，用小剪刀把它剪开，进行镜检，要分别检查它们的内含物和腔壁，可发现六鞭毛虫、粘孢子虫、复殖吸虫，有时还可发现车轮虫和藻类。16.性腺 性腺有左右两个，也像检查其他器官一样，把左右两个性腺小心的取出来，先目检它的外表，如果有很小的白点，往往是微孢子虫的胞囊，还可以发现粘孢子虫、艾美虫、复殖吸虫幼虫、绦虫和线虫的幼虫等寄生虫。17.眼 用弯头镊子或小剪刀从眼窝里挖出眼球，放在培养皿或玻片上，剖开巩膜，放出玻璃体和水晶体，在低倍显微镜或解剖镜下检查可发现寄生在眼睛各部分的吸虫幼虫。这种寄生虫严重感染时，水晶体变白色，混浊不透明，使眼睛变瞎。用载玻片压展法进行镜检，在眼的结缔组织，有时还可以发现粘孢子虫。18.脑 用尖锐的解剖刀或剪刀，按水平方向从后向前，在后脑和眼睛之间剪开头盖骨上壁，即见到充满着淡灰色泡沫状油脂物质，用吸管把它吸出，放在培养皿里，以备检查。吸净油脂物质后，灰白色的脑即显露出来，用剪刀把它完整地取出来，按检查肝的方法检查，可发现粘孢子虫的胞囊和复殖吸虫的尾蚴。19.脊髓 从头部与躯干交接处把脊椎骨剪断，再把身体的尾部与躯干交接处的脊椎也剪断，用镊子从前端的断口插入脊髓腔，把脊髓夹住，慢慢的把脊髓整条拉出来，分前、中、后三部分检查，可发现粘孢子虫和复殖吸虫的幼虫。20.肌肉 首先要用锐利的解剖刀，从身体的一侧剖开部分皮肤，再用镊子把皮肤剥去，或有一根小棍棒(玻璃棒或竹棒)象卷纸筒一样，慢慢把皮肤剥去。剥去皮肤后，肌肉即显露出来，先目检，然后在前、中、后部分别取一小片肌肉进行镜检，最后用玻片压展法检查。可发现粘孢子虫，复殖吸虫、绦虫、线虫等寄生虫的幼虫，还可发现引起赤皮病和疖疮病的细菌。