Shimadzu液相色谱基础幻灯片课件.ppt

Shimadzu液相色谱根底幻灯片PPT 本课件本课件PPT仅供大家学习使用仅供大家学习使用 学习完请自行删除，谢谢！学习完请自行删除，谢谢！本课件本课件PPT仅供大家学习使用仅供大家学习使用 学习完请自行删除，谢谢！学习完请自行删除，谢谢！本课件本课件PPT仅供大家学习使用仅供大家学习使用 学习完请自行删除，谢谢！学习完请自行删除，谢谢！本课件本课件PPT仅供大家学习使用仅供大家学习使用 学习完请自行删除，谢谢！学习完请自行删除，谢谢！色谱起源石油醚石油醚碳酸钙颗粒碳酸钙颗粒色素色素玻璃柱玻璃柱俄国植物学家茨维特Tswett在1906 年研究用碳酸钙别离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。岛津高效液相色谱仪LC-10Avp系列高效液相色谱分析过程 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、别离系统、检测系统、记录系统 等五大局部组成。分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子到达平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进展别离，别离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效上下的依据。色谱别离过程Temporal course流流动动相相高效液相色谱原理 色谱法：利用样品组分在两相间分配系数 不同而进展别离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的液体 固定相：静止不动的一相，化学键合型固 定相 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。HPLC 有以下特点：高压-压力可达1530MPa。高速-流速为0.00110.000 ml/min。高效。在一根柱中同时别离成份可达100 种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。荧光和电化学检测器可达0.1pg。高效液相色谱法的分类 按别离机制不同分为液固色谱法键合相液相色谱法 正相色谱法 反相色谱法离子交换色谱法离子对色谱法体积排阻色谱法液相维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器检测器色谱柱 流动相流动相选择本卷须知：纯度：采用“HPLC 级溶剂防止使用会引起柱效损失或保存特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配溶剂前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，防止堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：1柱流量不准 2检测器基线波动 脱气注意点：1每天脱气(无在线脱气器时 2混合溶剂脱气时间不能过长工作原理在线脱气机何时需要使用在线脱气机输液泵送液方式：恒流控制 恒压控制VP系列：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵Prominence：LC-20AD、LC-20AT、LC-20AB泵 D泵：并联微体积往复式泵 T泵：串联式往复泵 B泵：并联微体积往复式泵2组等度洗脱和梯度洗脱等度洗脱梯度洗脱梯度洗脱梯度洗脱就是在别离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，到达提高别离效果，缩短分析时间的目的。优点：可提高别离度、缩短分析时间、降低最小检测量和提高别离精度本卷须知：溶剂的纯度要高，否那么梯度洗脱的重现性差高压梯度泵系统四元低压梯度泵系统进样器自动进样器自动进样器 SIL-10HT SIL-10A SIL-20A/C SIL-10HT SIL-10A SIL-20A/C手动进样器手动进样器 Rheodyne 7725/7725i Rheodyne 7725/7725i 原理：六通阀原理：六通阀 注入方式：注入方式：1 1全量注入全量注入 2 2局部注入局部注入手动进样器使用须知全量进样：进样体积至少为定量环的3倍以上。半量进样：进样量应不大于定量环体积的50%。一定要使用合规格的进样器，规格为外径0.028英寸，长2英寸的平头针。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。装填状态样品注入六通阀柱温箱柱温控制的优点：分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性vv低价格，小体积低价格，小体积vv可安装手动进样器可安装手动进样器vv温度范围温度范围vv 室温室温-15C80C-15C80Cvv室温传感器室温传感器vv 保证分析在可靠的保证分析在可靠的温度范围内进展温度范围内进展vv可单独进展操作可单独进展操作vv容量大，可容纳容量大，可容纳vv 2 2个切换阀，手动进样个切换阀，手动进样器器vv 混合室，混合室，VPVP副控制器副控制器vv CDD/L-ECD CDD/L-ECD 检测池检测池vv温度范围温度范围vv 室温室温+10C 80C+10C 80CAvp)Avp)vv 室温室温-10C 80C-10C 80CACvp)ACvp)vv室温传感器室温传感器vv 保证分析在可靠的温保证分析在可靠的温度范围内进展度范围内进展vv可单独进展操作可单独进展操作CTO-10ASvp(半导体模块加热式CTO-10A(C)vp(空气循环式CTO-10A系列色谱柱反相色谱柱：C18、C8、氰基、氨基、苯基正相色谱柱：硅胶、氰基、氨基离子交换色谱柱：SCX、SAX凝胶色谱柱：凝胶手性色谱柱：牛血清蛋白、AGP、环糊精等检测器SPD-10Avp(190600nm)紫外检测器SPD-10AVvp(190-900nm)紫外检测器SPD-M10Avp(190800nm)二极管阵列检测器RF-10AXL 荧光检测器RID-10A 示差折光检测器CDD-10Avp 电导检测器L-ECD-6A 电化学检测器ELSD 蒸发光散射检测器紫外可见光检测器EinEoutA=eCl=-log(Eout/Ein)比尔定律检测池检测池C:浓度l优点：优点：1 1灵敏度高灵敏度高 2 2对温度和流速不敏感对温度和流速不敏感 3 3可用于梯度洗脱可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质原理：岛津VP系列紫外检测器功能设定时间程序切换检测波长等双波长检测比例色谱，初步判断峰的纯度停泵扫描，确定组分最大吸收波长时间程序双波长检测水溶维生素的双波长检测水溶维生素的双波长检测比例色谱停机扫描二极管阵列检测器色谱图光谱图吸光度波长时间荧光检测器优点：优点：1 1灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2 2选择性好选择性好 3 3对温度和流速不敏感，可用于梯度洗对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱脱缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等具有对称共轭体系酸、卟啉、儿茶酚氨等具有对称共轭体系示差折光检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器缺点：1对温度变化敏感 2对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3属于中等灵敏度的检测器电导检测器原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱缺点：对温度变化敏感每升高1度，电导率增加2%-2.5%)广泛应用于离子色谱。主要用于检测水溶性无机和有机离子电化学检测器原理：测量电活性分子在工作电极外表氧化或复原反响时所产生电流变化的检测优点：1灵敏度高 2选择性好，只检测电活性物质缺点：1不适用于梯度洗脱 2对温度、压力变化敏感蒸发光散射检测器原理：柱流出物雾化 流动相蒸发 溶质粒子散射光强度 检测优点：1、适用于没有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待测物2、可以应用有强紫外吸收的试剂，如氯仿、丙酮等3、适用于梯度洗脱4、通用型检测器，只要待测物挥发性低于溶剂，即可适用5、对环境影响不灵敏，室温下即可操作6、没有溶剂前缘峰，适用于保存时间短的物质的检测缺点：1、如果流动相不能挥发如含有钠盐、钾盐等)，不适用2、对有紫外特征吸收的物质，检测灵敏度不如紫外检测器HPLC 的图形结果色谱图色谱图:色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保存时间.液相色谱图相关术语1液相色谱图相关术语2液相色谱图相关术语3液相色谱图相关术语4