单克隆抗体的制备课件.pptx

单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备缺点缺点：产量低，纯度低，特异性差。：产量低，纯度低，特异性差。获得抗体的传统方法获得抗体的传统方法把某种抗原反复注射到动物体内，然后把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物从动物血清血清中分离出所需的中分离出所需的抗体抗体。温故知新温故知新1 1、抗体是如何产生的？由哪种细胞产生？、抗体是如何产生的？由哪种细胞产生？2 2、该细胞能不能无限增殖？、该细胞能不能无限增殖？3 3、我们学过的什么细胞有无限增殖的能力、我们学过的什么细胞有无限增殖的能力？4、用什么方法可以让、用什么方法可以让B B淋巴细胞也淋巴细胞也 具备无限增殖的能力？具备无限增殖的能力？抗原抗原BB淋巴细胞淋巴细胞增殖分化成浆细胞增殖分化成浆细胞抗体抗体不能不能癌细胞癌细胞细胞融合细胞融合1 1、阅读、阅读5353页内容页内容,归纳归纳单克隆抗体单克隆抗体的概念：的概念：关键词关键词关键词关键词：每一个每一个每一个每一个B B细细细细胞只分泌一种特异性抗体胞只分泌一种特异性抗体胞只分泌一种特异性抗体胞只分泌一种特异性抗体 获获获获得得得得单单单单一抗体一抗体一抗体一抗体，必必必必须须须须克隆克隆克隆克隆单单单单一的一的一的一的B B淋巴淋巴淋巴淋巴细细细细胞胞胞胞用单个用单个B B淋巴细胞进行（无性繁殖）克淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。这种抗体就叫做单克隆抗体。一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，但不能增殖体，但不能增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖，骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖，但不能产生抗体但不能产生抗体杂交细胞杂交细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术2 2、实验原理：、实验原理：动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量繁殖体，又能大量繁殖细胞工程 3 3、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程注射注射注射注射抗原抗原抗原抗原B B淋巴淋巴淋巴淋巴细细细细胞胞胞胞骨髓瘤骨髓瘤骨髓瘤骨髓瘤细细细细胞胞胞胞筛选筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群细胞融合细胞融合单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体 体外培养体外培养体外培养体外培养注射到注射到注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔小鼠腹腔小鼠腹腔13.幻灯片 材料：磁扣材料：磁扣模模拟拟操作操作1：细细胞融合胞融合过过程程不同颜色的磁扣代表不同颜色的磁扣代表哪种类型的细胞？哪种类型的细胞？是否一定成功融合？是否一定成功融合？体系中有几种类型的体系中有几种类型的细胞？细胞？哪种细胞是我们所需哪种细胞是我们所需要的？要的？模模拟拟操作操作2：杂杂交瘤交瘤细细胞的胞的筛选筛选诱导融合后，在培养诱导融合后，在培养诱导融合后，在培养诱导融合后，在培养基中能增殖的细胞有基中能增殖的细胞有基中能增殖的细胞有基中能增殖的细胞有哪些类型？哪些类型？哪些类型？哪些类型？如何从中筛选出杂如何从中筛选出杂如何从中筛选出杂如何从中筛选出杂交瘤细胞？交瘤细胞？交瘤细胞？交瘤细胞？骨髓瘤细胞，两两骨髓瘤细胞，两两骨髓瘤细胞，两两骨髓瘤细胞，两两融合的骨髓瘤细胞融合的骨髓瘤细胞融合的骨髓瘤细胞融合的骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞和杂交瘤细胞和杂交瘤细胞和杂交瘤细胞如何筛选杂交瘤细胞？如何筛选杂交瘤细胞？请根据以下信息，设计方法（不考虑机械方法），从培养请根据以下信息，设计方法（不考虑机械方法），从培养请根据以下信息，设计方法（不考虑机械方法），从培养请根据以下信息，设计方法（不考虑机械方法），从培养液中筛选杂交瘤细胞。已知细胞合成液中筛选杂交瘤细胞。已知细胞合成液中筛选杂交瘤细胞。已知细胞合成液中筛选杂交瘤细胞。已知细胞合成DNADNADNADNA有有有有D D D D和和和和S S S S两条途径，两条途径，两条途径，两条途径，其中其中其中其中D D D D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNADNADNADNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有有有有S S S S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞加聚乙二醇促融，获得杂种细胞加聚乙二醇促融，获得杂种细胞加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。简述方法和原理。简述方法和原理。简述方法和原理。简述方法和原理。培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞加入氨基嘌呤后，使加入氨基嘌呤后，使加入氨基嘌呤后，使加入氨基嘌呤后，使D D D D合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有D D D D合成合成合成合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的胞可以利用淋巴细胞中的胞可以利用淋巴细胞中的胞可以利用淋巴细胞中的S S S S途径合成途径合成途径合成途径合成DNADNADNADNA而增殖而增殖而增殖而增殖模模拟拟操作操作3：产产生生专专一性抗体的一性抗体的杂杂交瘤交瘤细细胞的胞的筛选筛选把筛选得到的杂交瘤细胞转把筛选得到的杂交瘤细胞转把筛选得到的杂交瘤细胞转把筛选得到的杂交瘤细胞转移到多孔培养板中培养，每移到多孔培养板中培养，每移到多孔培养板中培养，每移到多孔培养板中培养，每个孔内放一个杂交瘤细胞。个孔内放一个杂交瘤细胞。个孔内放一个杂交瘤细胞。个孔内放一个杂交瘤细胞。如何筛选？如何筛选？用特定的抗原检测每个用特定的抗原检测每个用特定的抗原检测每个用特定的抗原检测每个培养孔内的产物培养孔内的产物培养孔内的产物培养孔内的产物，最终最终最终最终得到产生专一性抗体的得到产生专一性抗体的得到产生专一性抗体的得到产生专一性抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。7.幻灯7.幻灯片 7片 7多多孔孔细细胞胞培培养养板板筛选杂交筛选杂交筛选杂交筛选杂交瘤细胞瘤细胞瘤细胞瘤细胞筛选产生筛选产生筛选产生筛选产生专一性抗专一性抗专一性抗专一性抗体的杂交体的杂交体的杂交体的杂交瘤细胞瘤细胞瘤细胞瘤细胞科学家从某些能无限增殖的科学家从某些能无限增殖的细胞质细胞质中中分离出分离出无限增殖无限增殖的的调控基因调控基因(prG)(prG)，该，该基因能激发许多动物细胞分裂，这为基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。前景。合作探究合作探究-分组讨论分组讨论请利用所学请利用所学基因工程基因工程和和细胞工程细胞工程的相关技的相关技术，设计生产单克隆抗体的方法。术，设计生产单克隆抗体的方法。计时计时：3分分钟钟放飞思维放飞思维 能能否利用制备单克隆抗体否利用制备单克隆抗体的方法来生产单克隆干扰素的方法来生产单克隆干扰素？如果可以，请说明理由。？如果可以，请说明理由。4、单单克隆抗体的特点及克隆抗体的特点及应应用用（1 1）作为诊断试剂作为诊断试剂作为诊断试剂作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用最广泛应用最广泛应用 准确、高效、准确、高效、准确、高效、准确、高效、简简简简易、快速易、快速易、快速易、快速 同位素标记单克隆抗体，利用同位素标记单克隆抗体，利用同位素标记单克隆抗体，利用同位素标记单克隆抗体，利用抗体和抗原特抗体和抗原特抗体和抗原特抗体和抗原特异性结合的特点异性结合的特点异性结合的特点异性结合的特点可诊断肿瘤、心血管畸形等。可诊断肿瘤、心血管畸形等。可诊断肿瘤、心血管畸形等。可诊断肿瘤、心血管畸形等。特异性强，灵敏度高，并可大量制备特异性强，灵敏度高，并可大量制备（2 2 2 2）用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物生物生物生物生物导弹导弹导弹导弹=单单单单克隆抗体克隆抗体克隆抗体克隆抗体+药药药药物物物物 制成制成制成制成生物生物生物生物导弹导弹导弹导弹，将，将，将，将药药药药物定向物定向物定向物定向带带带带到癌到癌到癌到癌细细细细胞所在胞所在胞所在胞所在的位置，在原位的位置，在原位的位置，在原位的位置，在原位杀杀杀杀死癌死癌死癌死癌细细细细胞，胞，胞，胞，疗疗疗疗效高、副作用小。效高、副作用小。效高、副作用小。效高、副作用小。课堂小结课堂小结单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备技术技术技术技术：动动动动物物物物细细细细胞培养、胞培养、胞培养、胞培养、动动动动物物物物细细细细胞融合胞融合胞融合胞融合 原原原原理理理理：过程过程过程过程：特点特点特点特点：应用应用应用应用：特异性强，灵敏度高，并可大量制备特异性强，灵敏度高，并可大量制备特异性强，灵敏度高，并可大量制备特异性强，灵敏度高，并可大量制备作为体外诊断试剂作为体外诊断试剂作为体外诊断试剂作为体外诊断试剂治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物经过免疫的经过免疫的经过免疫的经过免疫的B B B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合融合融合筛选筛选筛选筛选杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞培养培养培养培养筛选筛选筛选筛选产生特定抗产生特定抗产生特定抗产生特定抗体的杂交瘤体的杂交瘤体的杂交瘤体的杂交瘤细胞细胞细胞细胞体内培养体内培养体内培养体内培养体外培养体外培养体外培养体外培养谢谢谢谢大家！大家！