冻精及人工授精讲座.ppt

羊的人工授精技术讲座郑州牧业工程高等专科学校畜牧工程系主讲人：张长兴人工授精的意义l提高优秀种公羊的配种效能l防止传染病l避免公母羊体重悬殊造成的配种困难l能够有效地进行同期发情集中配种l加速品种改良本交与人工授精比较项目人工授精本交一次射精配种母羊数30-501公母比1:10001:40受胎率(估计)%鲜精75、冻精30-4080左右如何在羊场开展人工授精l配备人工授精设备l人工授精人员培训l选好种公羊l建立一个人工授精实验室羊人工授精设备清单（一）采精用品l1、假阴道部件：假阴道外壳、内胎（每个外壳三条）、集精杯（每个外壳备用两个）、橡胶塞、医用气伐、固定皮圈、保护套l2、安装假阴道用品：瓷盘、温度计、石蜡油（或凡士林）、毛巾、75%乙醇棉球、漏斗、玻璃棒、镊子l3、羊采精架（二）稀释液配制用品l1、主要用品：三角锥瓶（250毫升、4个）、定性滤纸、玻璃漏斗、玻璃棒、量筒（100毫升）、试管架、漏斗架、精液稀释粉（100毫升）l2、辅助用品：电炉（500瓦）、注射器（一次性、10毫升）、蒸馏水（500毫升，3瓶）、洗瓶（1个）、石棉网、消毒柜（五）输精用品l输精器（10只）、胶头（10个）、酒精棉球、开膣器或羊用内窥镜、输精架或采精架（四）精液品质检查用品l显微镜（100-400倍）、显微镜保温板、载玻片、盖玻片、0.5%龙胆紫、计数板、吸管或微量移液器（五）输精用品l输精器（10只）、胶头或一次性注射器（10个）、高锰酸钾、开膣器或羊用内窥镜、输精架或采精架、纸巾羊的人工授精操作技术（一）稀释液配用品的清洗与消毒：l所有玻璃用品应用洗涤剂洗净后，用清水反复冲洗，避免有洗涤剂残留。用蒸馏水冲洗三次后，涳干水分后，放入消毒柜中干燥。自然放凉后使用。1、基础液配制：l（1）先将稀释粉（100毫升用）三角锥瓶中，加入100毫升水中，用玻璃棒搅拌，充分溶解l（2）将定性滤纸对折两次，折成锥形，放入漏斗中，并将其放置在三角锥瓶上，将溶解后的稀释液沿玻璃棒倒入漏斗中过滤l（3）将石棉网放在电炉上，然后将锥形瓶放在石棉网上，将稀释液加热至沸腾，立即取下（4）稀释液放冷后，加入双抗（青霉素、链霉素），充分溶解，并静置20分钟以上2、稀释液配制：l（1）用吸管从中层吸取基础液，冲洗刻度试管并弃去，重复三次。之后从中层取基础液加入刻度试管至8毫升处。l（2）将新鲜鸡蛋擦干净，用75%的酒精消毒表面，待干燥后，打开鸡蛋分离出蛋清，将卵黄置于消毒纸巾上，倾斜纸巾使其滚动，将卵黄表面的蛋清吸干，用吸管轻轻挑破卵黄膜，吸取卵黄液加入刻度试管中，使总液体容量为10毫升。用吸管反复吸吐使卵黄液与基础液混匀，贴上标签备用。l3、剩余的基础液贴上标签备用：用于冲洗假阴道和输精器械（二）安装假阴道：l1、将假阴道各部件充分洗涤干净，用蒸馏水冲洗后，放在有余热的消毒柜中干燥，内胎应用夹子夹好县挂在消毒柜内，安装前将瓷盘用酒精消毒。逐件检查各部件是否有破损、漏水、针眼。l2、将内胎光面向里，向外翻到外壳上，并使其周正l3、用医用75%乙醇棉球消毒内胎内壁、翻边及集精杯l4、待乙醇干燥后，将集精杯安装在假阴道上，用纱布套和固定皮圈固定l5、在内胎与夹壁间注入50-55热水，约占其体积1/2，并左右平行摇动l6、用基础液冲洗内胎内壁及集精杯l7、用消毒的玻璃棒醮取少量凡士林或石蜡油，从外口向内均匀涂布，涂布深度为假阴道长度的1/2l8、加塞、气伐，充气至压力适当（假阴道外口的内胎呈Y型，温度插入时感到有一定阻力）l9、用温度计测量假阴道内的温度2分钟。合适的温度为38-40，如不合适，再注入适当温度的热水l10、用毛巾将安装好的假阴道包好，以使保温备用（三）采精l1、安装好假阴道并使其内部温度适当l2、将发情旺盛的母羊保定在采精架内l3、一切准备就绪后，再将公羊赶至采精场并避免公羊靠近母羊，等待约1分钟左右l4、采精员手持假阴道蹲在右侧一旁l5、当公羊跳爬母羊臀部后，立即用左手掌扶住包皮导引公羊阴茎，右手将假阴道固定在母羊臀部右侧，使公羊阴茎伸入假阴道内，公羊向上一冲，说明已经射精。待公羊跳下，立即放掉假阴道内空气，并垂直放置。l6、取出集精杯，使假阴道内的精液全部进入集精杯中（四）精液稀释l1、用吸管将精液移入用基础液冲洗过的刻度试管中，与放稀释液的刻度试管一起放在500毫升33水浴中（500毫升烧杯）预温5分钟l2、计算稀释后精液容量：一般稀释比例为1:3，如0.7毫升的原精液稀释后体积为0.74=2.8毫升l3、用吸管将稀释液沿试管壁，缓慢加入精液中，轻轻摇动混匀后，加塞密封（五）精液保存l1、将盛放稀释后精液的刻度试管放在500毫升33的水浴中，然后再放入2-5冰箱中，约40分钟降温至2-5后。继续在冰箱中的水浴中保存直到使用。精液保存时间可达72小时。在使用中，保存时间超过24小时，应对精子活力进行检查，以便确定精液处理过程是否有问题和精液能否继续使用l2、如果供电不正常或冰箱控温不可靠，可将装稀释过的精液的试管用4层纱布包裹，装入自制的小塑料袋中，然后放入加有碎冰块的广口保温杯中保存。经常检查保温杯中的冰块，及时将溶化的冰水倒掉，添加新的冰块。母羊的发情鉴定判断母羊的最佳配种时机母羊的生殖生理项目绵羊山羊初情期（月）6-84-7性成熟（月）8-106-8初配年龄10-168-10发情周期(天)16-1720-21发情期(小时)24-3640排卵时间发情结束时发情结束时发情季节秋春秋妊娠期（天）150150产羔数因品种不同因品种不同产后发情下一个发情季节分娩后35天（六）输精l1、每天用试情公羊检查母羊群两次，上下午各一次，公羊用试情布兜住腹部，避免发生自然交配l2、如果母羊接受公羊跳爬，证明已经发情，应在发现发情后6-12小时内第一次配种，12-18小时后第二次配种。经产羊应于发现发情后6-12小时第一次配种，间隔12-16小时后第二次配种。初配羊应于发现发情后12小时第一次配种，间隔12小时第二次配种。l3、将母羊保定在采精架或专用保定架内，外阴部及肛门用0.3%的高锰酸钾冲洗后，用灭菌纸巾擦干l4、将开膣器或内窥镜内外用酒精擦拭；用酒精消毒输精器外部，并用稀释液冲洗内管备用l5、待酒精完全挥发后，在内窥镜或开膣器外部涂上石蜡油；用输精器吸取稀释后的精液0.05-0.15毫升l6、由两位助手抓住母羊后腿，使其离地。操作人员左手分开母羊阴门，将内窥镜插入至阴道底部，打开光源；右手持输精器，找到子宫颈管外口（子宫外口颜色较暗），将输精器前端伸入子宫颈管内1-2厘米，将精液输入，记录输精情况羊的输精羊的输精山羊冷冻精液技术山羊冷冻精液技术山羊冷冻精液的意义l精液保存时间可达几十年l最大限度利用种公羊，有利于以较低的成本对本地山羊进行杂交改良l有足够的时间进行后裔鉴定l种公羊的产值更高山羊冷冻精液稀释液配方 葡-乳-柠-甘液葡-乳-甘液果-乳-甘液解冻液葡萄糖3.002.00-3.00果糖-1.50-乳糖3.189.0010.50-柠檬酸钠2.00-1.4双蒸水100100100100青链霉素各10万单位各10万单位各10万单位各10万单位毫摩尔浓度526361375356第一液基础液808080卵黄202020第二液第一液454545甘油555稀释液配制用品清单序号用品名用量序号用品名用量1250ml烧杯4个13硫酸纸10cm10张2250ml三角瓶4个14天平(感量0.01g)1台3500ml输液瓶5个15电炉及石棉网1套4100或250ml量筒2个16纯水2000毫升5胶头滴管5支17葡萄糖1瓶6玻璃棒(30cm)4支18柠檬酸钠1瓶7玻璃漏斗4个19果糖1瓶8刻度试管10支20乳糖1瓶95ml一次性注射器10支21甘油1瓶10试管架1个22青链霉素各1瓶11温度计2支23标签纸1张(30份)12定性滤纸1盒24圆珠笔1支采精及精液品质检查用品清单序号名称数量序号名称数量1假阴道外壳10温度计2内胎11500ml烧杯3集精杯12漏斗4气伐13显微镜及保温板5保温棉或毛巾14载玻片及盖玻片各20张675%酒精棉球795%酒精棉球8医用凡士林9镊子(25cm)精液冷冻用品清单序号名称数量序号名称数量1液氮罐及液氮10250ml烧杯2泡沫塑料盒11温度计3铝饭盒12解冻液4氟板13标签5镊子6滴管7细管8微量移液器9纱布袋或塑料筒稀释液的配制l基础液的配制：秤量-放入烧杯-加入100毫升蒸馏水-溶解-过滤-加热-放冷l第一液配制：用基础液80毫升，加入卵黄液20毫升。（附卵黄的取法）l第二液配制：第一液45毫升，用一次性注射器取甘油5毫升，加入混合均匀。l解冻液的配制：2.9%的柠檬酸钠液冷冻精液的程序1、精液的采集：山羊采精可采用一次采精两个射精量的方法（间隔时间15分钟）2、品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求（密度为密以上，活力0.7以上）。3、稀释前处理：如果用条件可将山羊精液进行清洗，有利于提高解冻后的活力及受胎率。4、稀释：最常使用的是二次稀释法：即第一次在30下，用不含甘油的稀释液稀释，降温至2-5时，用含甘油的稀释液进行稀释，并平衡2小时。冷冻精液的程序l稀释第一次稀释：在30温度下，根据计算的稀释倍数进行第一次稀释，一般为1:0.5稀释,放在500毫升的烧杯中与第二液一起缓慢降温至2-5。第二次稀释：在2-5 下进行,一般为1:1稀释5、平衡：是精液与防冻剂（甘油）相互的时间。一般2小时。6、分装：山羊冷冻精液最常用的剂型是细管(0.25ml)和颗粒(0.1ml)两种。冷冻精液的程序7、冷冻：冷源：干冰（-79）、最常用液氮（-196）冷冻用品：l冷冻面：铜网、氟板（聚四氟乙烯）、铝板l冷冻槽：广口液氮罐、液氮槽l钢匙、镊子、低温温度计冷冻方法：l干冰埋藏法l液氮熏蒸法不同剂型冷冻方法：l颗粒冻精l细管冻精8、活力检查：解冻后活力应在0.3以上颗粒冻精制作方法l在泡沫塑料盒中注入液氮，并使液氮面距冷冻面1厘米左右l将铝饭盒和氟板浸入液氮中片刻l将铝饭盒固定在液氮面上2厘米左右高处l在氟板的凹槽中，各滴入平衡后的精液0.1毫升（约两滴），全部滴完后，加盖l将铝饭盒浸入液氮中片刻，将颗粒冻精倒入浸在液氮中的铝盒内l分装到纱布袋中或塑料筒中细管冻精制作l细管冻精的分装l平衡及上架l将冷冻架放入距液氮面10厘米的广口液氮罐中约5分钟l将其收集后浸入液氮中保存山羊冷冻精液制作应注意的事项l所有接触平衡后的精液的用品都必须处于2-5l冷冻板必须在预冷（约-110）后才能滴冻精液l滴冻过程应保证以下几个要求：规格的一致（每个颗粒约0.1ml）或每毫升10个颗粒形状一致 呈球形或大半球形无气泡 浸入液氮后应沉入底部相互不连结一定要有熏蒸过程l所有接触冻精的用品必须经过液氮预冷l分装过程中应避免冻精在空气中暴露时间过长（3秒以内）冻精的解冻l解冻温度：有冰水解冻，30-40 解冻，高温（50-75）解冻，一般认为山羊冻精的解冻以高温解冻效果最好。l解冻方法：湿解冻法：在试管中加入0.5-1ml解冻液，升温到30-40，投入一粒冻精，摇动并取出干解冻法：先将试管预热至30-40，投入冻精颗粒后，至融化一半时，取出加入20-30 的解冻液细管冻精解冻：将细管从液氮罐或液氮槽中取出，投入30-40 的水中至融化一半时取出用手搓至完全融化或用体温解冻l解冻后温度：5-8l解冻后保存：在2-5下或冰瓶中可保存12小时以上。冷冻精液的保存l冻精（颗粒）应进行标记：公畜名（号）、采精日期、容量l保持液氮罐中液氮面高度l接触冷冻精液的用品都要进行预冷l在冻精进行转移时，应尽可能减少在空气中暴露的时间。如果是颗粒冻精应先移入液氮槽中再解冻。l液氮罐应放在凉爽通风处，避免放在高温或通风不畅的地方l液氮罐在运输中应防止暴晒和碰撞。山羊冷冻精液制作牛冷冻精液制作八、妊娠诊断l1、根据输精情况记录，于配种后第19-22天观察母羊是否返情，如果返情应安排补配。如未返情可基本确定为妊娠l2、用妊娠诊断仪于配种后20天后检测以确定母羊是否受孕八、配种情况分析l1、检查母羊受孕情况，评估配种技术水平，总结经验l2、根据记录查找未受配母羊，并分析未配原因，及时处理