2016高中生物二轮复习选修1.1.ppt

选修选修1 1第一部分第一部分微生物的利用微生物的利用考点一考点一 培养基及无菌技术培养基及无菌技术1.1.培养基：培养基：(1)(1)类型：类型：(2)(2)培养基成分：培养基成分：一般都含有一般都含有水、碳源、氮源、无机盐、生长因水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等子等，此外还要满足微生物生长对，此外还要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质以及氧气、特殊营养物质以及氧气的要求。的要求。2.2.无菌技术：无菌技术：(1)(1)灭菌的目的：灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。(2)(2)灭菌原因：灭菌原因：为了使所利用的微生物不被其他微生物污染。为了使所利用的微生物不被其他微生物污染。3.3.实验操作过程中，应从以下几个方面注意避免外来杂菌的实验操作过程中，应从以下几个方面注意避免外来杂菌的污染：污染：对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁、消毒。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁、消毒。将用于微生物培养的将用于微生物培养的器皿器皿、接种用具接种用具和和培养基培养基等器具进行等器具进行灭菌。灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火酒精灯火焰附近焰附近进行。进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。相接触。(4)(4)三种常用灭菌方法的比较：三种常用灭菌方法的比较：(5)(5)消毒和灭菌：消毒和灭菌：【思维拓展】【思维拓展】消毒和消毒和灭灭菌的原理及注意事菌的原理及注意事项项(1)(1)高温加高温加热灭热灭菌，菌，其原理是使其原理是使细细菌体内的蛋白菌体内的蛋白质变质变性，从而达性，从而达到到杀灭细杀灭细菌的作用。菌的作用。(2)(2)化学化学药剂药剂的消毒方法，的消毒方法，其作用原理是使其作用原理是使细细菌体内的蛋白菌体内的蛋白质变质变性，但是化学物性，但是化学物质质很很难难透透过孢过孢子或芽子或芽孢孢的的坚坚硬外硬外层进层进入入细细胞内，胞内，因此化学方法因此化学方法难难以消以消灭孢灭孢子和芽子和芽孢孢。(3)(3)体体积积分数分数为为70%70%的酒精的酒精杀杀菌效果最菌效果最强强。浓浓度度过过低，低，杀杀菌力弱；菌力弱；浓浓度度过过高，使菌体表面蛋白高，使菌体表面蛋白质质凝固形成一凝固形成一层层保保护护膜，乙醇分子不能渗入其膜，乙醇分子不能渗入其内，内，杀杀菌效果受影响。菌效果受影响。对刚对刚洗刷后未干的器皿，洗刷后未干的器皿，则则可可选择选择75%75%的酒精的酒精进进行消毒。行消毒。脱分化脱分化 愈伤组织愈伤组织 植物激素植物激素 划线分离法划线分离法 共价共价偶联法偶联法 酵母菌酵母菌 （醋化）醋杆菌（醋化）醋杆菌 假丝酵母、乳酸菌假丝酵母、乳酸菌 光电比色法光电比色法（1 1）结构：）结构：原核生物原核生物（2 2）繁殖方式：）繁殖方式：（3 3）变异类型：）变异类型：（5 5）应用：）应用：1大肠杆菌：大肠杆菌：基因突变、基因重组基因突变、基因重组基因工程、遗传实验材料基因工程、遗传实验材料（4 4）代谢类型：代谢类型：异养兼性厌氧型异养兼性厌氧型 革兰氏阴性革兰氏阴性(红色红色)(G-)(G-)(p.23）考点二考点二 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离1.1.培养和分离实验步骤：培养和分离实验步骤：保存菌种保存菌种(书书P.23)P.23)用用接种环接种环取出单个菌落，用取出单个菌落，用划线法划线法接种在接种在斜面培养基上，斜面培养基上，37 37 培养培养24 h24 h后，置于后，置于4 4 冰箱中保存冰箱中保存 2.2.纯化大肠杆菌的方法：纯化大肠杆菌的方法：常用的微生物接种方法有常用的微生物接种方法有划线分离法和划线分离法和涂布分离法涂布分离法。(1)(1)划线分离法：划线分离法：是通过接种环在琼脂是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(2)(2)涂布分离法：涂布分离法：是将菌液进行一系列是将菌液进行一系列的的梯度稀释梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。行培养。3.3.两种纯化细菌方法的比较：两种纯化细菌方法的比较：1 1.线条不重叠 2 2-3.从上次的末端开始，交叉23条线3 4 4.最后的划线不能与第一区相连。第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域【高考警示】划线分离法中接种环的使用【高考警示】划线分离法中接种环的使用(1)(1)划线分离操作中第一次划线前及划线结束后需灼烧接种环，其目划线分离操作中第一次划线前及划线结束后需灼烧接种环，其目的不同。的不同。(2)(2)平板划平板划线线操作的注意事操作的注意事项项。第一次划第一次划线线及每次划及每次划线线之前都需要灼之前都需要灼烧烧接种接种环环。灼灼烧烧接种接种环环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀杀死死菌种。菌种。划划线时线时最后一区不要与第一区相最后一区不要与第一区相连连。划划线线用力大小要适当，防止用力用力大小要适当，防止用力过过大将培养基划破。大将培养基划破。考点三考点三 分离以尿素为氮源的微生物分离以尿素为氮源的微生物1 1菌种特点菌种特点 含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2 2培养基培养基以以尿素尿素为唯一氮源的培养基培养，以为唯一氮源的培养基培养，以LBLB全营养全营养培养基为对照。培养基为对照。3.3.实验实验原理：原理：(1)(1)以以尿素尿素为为唯一氮源的培养基培养唯一氮源的培养基培养细细菌菌时时，只有含有，只有含有脲脲酶酶的的细细菌能菌能够够正常生正常生长长，据此可分离出以尿素，据此可分离出以尿素为为氮源的微生物。氮源的微生物。(2)(2)细细菌合成的菌合成的脲脲酶酶能将尿素分解成能将尿素分解成NHNH3 3，使，使pHpH升高，使升高，使酚酚红红指指示示剂变红剂变红。2.2.实验步骤：实验步骤：3.3.注意事注意事项项：(1)(1)平板倒置的原因：平板倒置的原因：平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。(2)(2)防止培养基外溅：防止培养基外溅：在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。之间的培养基上滋生。3.3.注意事注意事项项：(3)(3)涂布器的灭菌：涂布器的灭菌：玻璃刮刀用玻璃刮刀用70%70%酒精消毒酒精消毒，取出时，多余酒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精灯火焰上引精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精灯火焰上引燃。燃。(4)(4)设置对照：设置对照：可排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提可排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。高实验结果的可信度。【归纳比较】微生物筛选过程中必要的两种对照培养【归纳比较】微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用基及其作用【思维拓展】【思维拓展】选择选择培养基的培养基的选择选择方法方法(1)1)在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质。例如，加入青霉素可以分离例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌，加入高出酵母菌和霉菌，加入高浓浓度的食度的食盐盐可以得到金黄色葡萄球菌。可以得到金黄色葡萄球菌。这这里的化学物里的化学物质质是在主要是在主要营营养成分完整的基养成分完整的基础础上加入的。上加入的。(2)(2)改改变变培养基中的培养基中的营营养成分。养成分。例如，缺乏氮源例如，缺乏氮源时时可以分离出固可以分离出固氮微生物，石油作氮微生物，石油作为为唯一碳源唯一碳源时时，可以分离出能消除石油，可以分离出能消除石油污污染染的微生物。的微生物。(3)(3)改改变变微生物的培养条件。微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温例如，将培养基放在高温环环境下培境下培养，可以得到耐高温的微生物。养，可以得到耐高温的微生物。类型一类型一 培养基及无菌技培养基及无菌技术术【典例【典例1 1】(2015(2015绍兴绍兴模模拟拟)请请回答下列与大回答下列与大肠肠杆菌有关的杆菌有关的问题问题。(1)(1)从生从生态态系系统统的成分上看，的成分上看，大大肠肠杆菌属于杆菌属于。分解者分解者(2)(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。根据物理状根据物理状态态划分，划分，该该培养基属于培养基属于(固体、液体固体、液体)培养基。培养基。该该培养基中的碳源是培养基中的碳源是。(3)(3)在微生物培养操作在微生物培养操作过过程中，程中，为为防止防止杂杂菌菌污污染，需染，需对对培养基和培养培养基和培养皿皿进进行行(填填“消毒消毒”或或“灭灭菌菌”)；操作者的双手需要；操作者的双手需要进进行清行清洗和洗和。空气中的。空气中的细细菌可用紫外菌可用紫外线杀灭线杀灭，其原因是紫外，其原因是紫外线线能能使蛋白使蛋白质变质变性，性，还还能能 。(2)(2)固体乳糖、蔗糖、蛋白胨固体乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)(3)灭菌消毒损伤灭菌消毒损伤DNADNA的结构的结构(4)(4)将配制好的培养基分装到将配制好的培养基分装到试试管中，加棉塞后若干支管中，加棉塞后若干支试试管一捆，包管一捆，包上牛皮上牛皮纸纸并用皮筋勒并用皮筋勒紧紧放入放入中中灭灭菌，温菌，温度度为为，时间为时间为。灭灭菌完菌完毕毕拔掉拔掉电电源，待源，待锅锅内内压压力自然降到大气力自然降到大气压时压时，将，将试试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试试管管应应。(5)(5)使用高使用高压压蒸汽蒸汽灭灭菌菌锅时锅时注意，先向注意，先向锅锅内倒入内倒入。把。把锅锅内内水加水加热热煮沸并将其中原有冷空气煮沸并将其中原有冷空气彻彻底排出后，将底排出后，将锅锅密密闭闭。若在。若在灭灭菌前，菌前，没有排尽没有排尽锅锅内的冷空气会内的冷空气会导导致致 。(4)(4)高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅12112115 min15 min废弃废弃(5)(5)适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底(6)(6)从一支从一支试试管向另一支管向另一支试试管接种管接种时时注意，接种注意，接种环环要在酒精灯要在酒精灯(选选填填“内焰内焰”或或“外焰外焰”)灭灭菌，并且待接种菌，并且待接种环环后后蘸取菌种，蘸取菌种，试试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试试管在适宜温管在适宜温度下培养，度下培养，长长成菌落后放入成菌落后放入冰箱中保存。冰箱中保存。(6)(6)外焰冷却外焰冷却44【解析】【解析】(1)(1)大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆菌属于分解者。菌属于分解者。(2)(2)表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)(3)微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能损伤损伤DNADNA的结构。的结构。(4)(4)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为1 kg/cm1 kg/cm2 2、温度为、温度为121121条件下，灭菌条件下，灭菌15 min15 min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应废弃。应废弃。(5)(5)使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还有可能损坏设备。有可能损坏设备。(6)(6)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，否则会杀死菌种造成实验失败。否则会杀死菌种造成实验失败。【互【互动动探究】探究】(1)(1)培养大培养大肠肠杆菌除用杆菌除用题题中所中所给给培养基外，培养基外，还还可用何种培养基？可用何种培养基？提示：提示：LBLB液体培养基。液体培养基。(2)(2)表中的培养基在配制表中的培养基在配制时应时应如何操作？如何操作？提示：提示：表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引起琼脂糊底而使烧杯炸裂。起琼脂糊底而使烧杯炸裂。【加固【加固训练训练】(2015(2015嘉嘉兴兴模模拟拟)下面是肺炎双球菌离体下面是肺炎双球菌离体转转化化实验实验的主的主要步要步骤骤：(1)(1)实验实验用的器皿必用的器皿必须须是无菌的，常用是无菌的，常用法法灭灭菌。用此法菌。用此法对对培培养基养基灭灭菌菌时时，常将培养基装在，常将培养基装在(器皿器皿)中中进进行。行。(2)(2)实验实验操作需在超操作需在超净净工作台上工作台上进进行。工作台上，行。工作台上，实验实验前一段前一段时间时间需需打开，而打开，而实验实验中需关中需关闭闭的是的是。A.A.酒精灯酒精灯 B.B.照明灯照明灯C.C.过滤风过滤风 D.D.紫外灯紫外灯(3)(3)平面培养基与平面培养基与悬悬浮培养所用的培养基相比，浮培养所用的培养基相比，应应增加的成分是增加的成分是。答案：答案：(1)(1)高压蒸汽灭菌三角瓶高压蒸汽灭菌三角瓶(2)D(2)D(3)(3)琼脂琼脂(4)(4)常用涂布法常用涂布法给给平面培养基接种。下列叙述平面培养基接种。下列叙述错误错误的是的是()A.A.接种的目的是使接种的目的是使细细菌相互分离菌相互分离B.B.接种需接种需过滤过滤除去除去杂杂菌后菌后进进行行C.C.接种工具需灼接种工具需灼烧烧后使用后使用D.D.接种需在酒精灯火焰旁接种需在酒精灯火焰旁进进行行(5)(5)在在3737恒温箱中培养恒温箱中培养时时，培养皿需，培养皿需，主要目的是避免水，主要目的是避免水滴影响滴影响的形成。的形成。(6)(6)培养后，如果培养后，如果观观察到菌落重叠，察到菌落重叠，则则在涂布法接种之前需在涂布法接种之前需进进行行操作。操作。B B(5)(5)倒置单菌落倒置单菌落(6)(6)稀释菌液稀释菌液【解析】【解析】(1)(1)微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。法进行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。(2)(2)在超净工在超净工作台上操作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。作台上操作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。(3)(3)平面平面培养基因含有琼脂而呈固体或半固体状态。培养基因含有琼脂而呈固体或半固体状态。(4)(4)接种的目的是为接种的目的是为了得到所需要的细菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌了得到所需要的细菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌大小差不多，所以用过滤的方法是不能除去杂菌的。大小差不多，所以用过滤的方法是不能除去杂菌的。(5)(5)培养皿培养皿在培养箱中应倒置，防止水滴滴落污染培养基，影响单菌落的在培养箱中应倒置，防止水滴滴落污染培养基，影响单菌落的形成。形成。(6)(6)如果菌落重叠，说明菌液浓度过高，需要稀释。如果菌落重叠，说明菌液浓度过高，需要稀释。类类型二型二 大大肠肠杆菌的培养和分离杆菌的培养和分离【典例【典例2 2】大大肠肠杆菌是生存在人体杆菌是生存在人体肠肠道中的正常菌群，每克道中的正常菌群，每克粪粪便便中含有中含有10109 9个，且能个，且能够够与致病菌混与致病菌混杂杂生生长长。如果食品和。如果食品和饮饮用水中用水中出出现现大大肠肠杆菌，就意味着食物可能被杆菌，就意味着食物可能被粪粪便便污污染而染而带带上致病菌，上致病菌，因而常将大因而常将大肠肠杆菌的数量作杆菌的数量作为为食品食品卫卫生的生的检测检测指指标标之一。之一。请请据据此回答下列此回答下列问题问题：(1)(1)测测定街定街边边出售的奶茶中大出售的奶茶中大肠肠杆菌的数目，常用涂布分离法杆菌的数目，常用涂布分离法进进行行测测定。定。该该方法首先配制方法首先配制LBLB培养基，培养基，进进行高行高压压蒸汽蒸汽灭灭菌后冷却至菌后冷却至6060，在，在旁倒在培养皿中形成平板；旁倒在培养皿中形成平板；对对奶茶奶茶样样品品进进行一行一定倍数的稀定倍数的稀释释，取，取0.1 mL0.1 mL奶茶稀奶茶稀释释液，加在培养皿的固体培养基上，液，加在培养皿的固体培养基上，用用涂布在培养基平面上，然后涂布在培养基平面上，然后进进行培养；行培养；观观察察统计统计培养皿中培养皿中数目；数目；该该数据比数据比实际实际数数值值要要 (填填“高高”或或“低低”)，原因是原因是 。实验实验完成后需要完成后需要对对培养基培养基进进行行处处理，然后理，然后才能倒掉。才能倒掉。(1)(1)固体酒精灯火焰玻璃刮刀固体酒精灯火焰玻璃刮刀(涂布棒涂布棒)菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落灭菌个菌落灭菌(2)(2)若要若要对对上述培养基中的菌种上述培养基中的菌种进进行行扩扩大培养，大培养，则则需配制需配制LBLB 培养基，培养基，灭灭菌后，将菌后，将在酒精灯火焰上在酒精灯火焰上烧红烧红后冷却，然后冷却，然后蘸取后蘸取单单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环环境中培境中培养养h h即可。即可。(2)(2)液体接种环液体接种环12 12【解析】【解析】(1)(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。(2)(2)对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种取带菌的培养物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种培养培养12 h12 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。，每毫升培养基中就有几亿个细菌。【加固【加固训练训练】(2015(2015杭州模杭州模拟拟)大大肠肠杆菌是生活在人和高等杆菌是生活在人和高等动动物体物体内的一种常内的一种常见细见细菌，在菌，在饮饮用水的用水的检测检测中常用它作中常用它作为为水源是否受到水源是否受到污污染的指示菌，在染的指示菌，在遗传遗传学上常作学上常作为实验为实验材料，在基因工程中常用它作材料，在基因工程中常用它作为为受体受体细细胞，胞，为为人人类类的健康和科学技的健康和科学技术术的的发发展作出了展作出了许许多多贡贡献。献。请请回答下列有关大回答下列有关大肠肠杆菌的杆菌的问题问题：(1)(1)在大在大肠肠杆菌培养杆菌培养过过程中，除考程中，除考虑营虑营养条件外，养条件外，还还要考要考虑虑、和渗透和渗透压压等条件。由于等条件。由于该细该细菌具有体菌具有体积积小、小、结结构构简单简单、易、易培养、培养、等等优优点，因此常作点，因此常作为遗传为遗传学研究的学研究的实验实验材料。材料。(2)(2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是分离大肠杆菌时常用的接种方法是法和法和法。前者操作简单，后者法。前者操作简单，后者更易分开，更易分开，但操作复杂些。但操作复杂些。(3)(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察宜的温度下放置适当的时间，观察。(4)(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是()A.A.严格操作、多次重复严格操作、多次重复B.B.保证待测样品稀释的浓度比较合适保证待测样品稀释的浓度比较合适C.C.倒平板培养倒平板培养D.D.计数所有菌落，取其平均值计数所有菌落，取其平均值(5)(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等等对细菌进行初步的鉴定对细菌进行初步的鉴定(或分类或分类)。【解题指南】【解题指南】解答本题的关键有两个方面：解答本题的关键有两个方面：(1)(1)在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。(2)(2)菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不能用单个的细菌进行菌种鉴定。能用单个的细菌进行菌种鉴定。【解析】【解析】(1)(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜的温度、酸碱度的温度、酸碱度(pH)(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。(2)(2)分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方法简单；后者单菌落更易分开，但操作复杂些。法简单；后者单菌落更易分开，但操作复杂些。(3)(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根据菌落数量的多少判断污染程度。据菌落数量的多少判断污染程度。(4)(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；保证待测样品稀释的浓度比较合适。保证待测样品稀释的浓度比较合适。(5)(5)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。进行初步的鉴定。答案：答案：(1)(1)温度酸碱度温度酸碱度(pH)(pH)生活周期短生活周期短(或繁殖快或繁殖快)(2)(2)划线分离涂布分离单菌落划线分离涂布分离单菌落(3)(3)培养基上是否有菌落产生培养基上是否有菌落产生(4)D(4)D(5)(5)菌落特征菌落特征类类型三型三 分离以尿素分离以尿素为为氮源的微生物氮源的微生物【典例【典例3 3】(2012(2012浙江高考浙江高考)幽幽门门螺杆菌螺杆菌(Hp)(Hp)感染是急慢性胃炎和消感染是急慢性胃炎和消化性化性溃疡溃疡的主要致病因素。在患者体内采集的主要致病因素。在患者体内采集样样本并制成菌液后，本并制成菌液后，进进行行分离培养。分离培养。实验实验基本步基本步骤骤如下：如下：请请回答：回答：(1)(1)在配制培养基在配制培养基时时，要加入尿素和酚，要加入尿素和酚红红指示指示剂剂，这这是因是因为为HpHp含含有有，它能以尿素作，它能以尿素作为为氮源；若有氮源；若有HpHp，则则菌落周菌落周围围会出会出现现 色色环带环带。(2)(2)下列下列对对尿素溶液尿素溶液进进行行灭灭菌的最适方法是菌的最适方法是灭灭菌。菌。A.A.高高压压蒸汽蒸汽 B.B.紫外灯照射紫外灯照射C.70%C.70%酒精浸泡酒精浸泡 D.D.过滤过滤脲酶脲酶红红D D(3)(3)步步骤骤X X表示表示。在无菌条件下操作。在无菌条件下操作时时，先将菌液稀，先将菌液稀释释，然后将菌液，然后将菌液到培养基平面上。菌液稀到培养基平面上。菌液稀释释的目的是的目的是为为了了获获得得菌落。菌落。(4)(4)在培养在培养时时，需将培养皿倒置并放在，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置中。若不倒置培养，将培养，将导导致致 。(5)(5)临临床上用床上用1414C C呼气呼气实验检测实验检测人体是否感染人体是否感染HpHp，其基本原理是，其基本原理是HpHp能将能将1414C C标记标记的的分解分解为为NHNH3 3和和1414COCO2 2。接种接种涂布涂布单单恒温培养箱恒温培养箱无法形成单菌落无法形成单菌落尿素尿素【解析】【解析】(1)(1)幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为NHNH3 3和和COCO2 2，故，故尿素为氮源。尿素为氮源。NHNH3 3为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色环带。环带。(2)(2)尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。(3)(3)由细菌和真菌培养操作步骤可知，由细菌和真菌培养操作步骤可知，X X为接种。接种时，应将菌种均为接种。接种时，应将菌种均匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。(4)(4)为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。(5)(5)用用1414C C标记尿素，分解后标记物全部在标记尿素，分解后标记物全部在COCO2 2中。中。【加固【加固训练训练】尿素是一种重要的尿素是一种重要的农业农业肥料，但若不肥料，但若不经细经细菌的分解，就菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类类和数量繁多，下和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素列是从土壤中分离分解尿素细细菌的有关菌的有关问题问题，请请分析回答：分析回答：(1)(1)上上图图是利用是利用 法法进进行微生物接种，把聚集的菌种逐步行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。分散到培养基的表面。(2)(2)如果要如果要对对培养的菌落培养的菌落进进行行纯纯化，在培养基上划化，在培养基上划线线操作中，操操作中，操作的第一步及每次划作的第一步及每次划线线之前都要灼之前都要灼烧烧接种接种环环，目的是，目的是对对接种接种环进环进行行 。划线划线稀释稀释灭菌灭菌(3)(3)下表是一种培养基配方：下表是一种培养基配方：制制备备培养基的操作步培养基的操作步骤骤是是()a.a.倒平板倒平板b.b.计计算算c.c.溶化溶化d.d.称量称量e.e.灭灭菌菌A.abcdeA.abcdeB.ebdcaB.ebdcaC.bdcaeC.bdcaeD.bdceaD.bdceaD D该该培养基属于培养基属于培养基培养基(多多选选)()A.A.液体液体B.B.固体固体C.C.鉴鉴定定D.D.选择选择E.E.天然天然使用使用该该培养基的目的是培养基的目的是 。在培养基中加入在培养基中加入指示指示剂剂，可初步，可初步鉴鉴定出定出该该种种细细菌能分解尿菌能分解尿素。素。(4)(4)在在进进行分离分解尿素的行分离分解尿素的细细菌菌实验时实验时，A A同学从培养基上同学从培养基上筛选筛选出大出大约约150150个菌落，而其他同学只个菌落，而其他同学只选择选择出大出大约约5050个菌落。个菌落。A A同学的同学的实验结实验结果果产产生的原因可能有生的原因可能有(多多选选)()A.A.由于土由于土样样不同不同B.B.由于培养基由于培养基污污染染C.C.由于操作失由于操作失误误D.D.没有没有设设置置对对照照B B、D D筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌A A、B B、C C 酚红酚红【解析】【解析】(1)(1)图中的接种方法是划线法，该方法随着划线次数的增多，图中的接种方法是划线法，该方法随着划线次数的增多，线上的细菌密度逐渐减小，最后成为单个分布的细菌。线上的细菌密度逐渐减小，最后成为单个分布的细菌。(2)(2)接种前要对接种环进行灼烧灭菌，杀死接种环上存留的杂菌。接种前要对接种环进行灼烧灭菌，杀死接种环上存留的杂菌。(3)(3)制备培养基的基本步骤是计算制备培养基的基本步骤是计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板。从倒平板。从成分上看，该培养基中尿素是唯一的氮源，所以属于选择培养基，目成分上看，该培养基中尿素是唯一的氮源，所以属于选择培养基，目的是筛选能分解尿素的细菌。因为含有琼脂糖，所以该培养基又属于的是筛选能分解尿素的细菌。因为含有琼脂糖，所以该培养基又属于固体培养基。固体培养基。(4)A(4)A同学的培养基中菌落的数目明显多于其他同学，可能的原因是培同学的培养基中菌落的数目明显多于其他同学，可能的原因是培养基被污染、采用的土样中细菌较多或者操作有误养基被污染、采用的土样中细菌较多或者操作有误(如接种时没有将如接种时没有将菌液摇匀等菌液摇匀等)。