第十六章-抗生素类药物分析ppt课件.ppt

第十六章第十六章抗生素抗生素类药类药物分析物分析实用文档第一第一节节 概述概述实用文档一、抗生素的定一、抗生素的定义义及特点及特点低化学低化学纯纯度度同系物多、异构体多、降解物多同系物多、异构体多、降解物多活性活性组组分的分的变变异性异性生生产过产过程中条件的程中条件的变变化化不不稳稳定性定性不不稳稳定性定性结结构构 是指是指“生物在其生命活生物在其生命活动动中中产产生的，能在低生的，能在低微微浓浓度下有度下有选择选择地抑制或影响它种生物机能地抑制或影响它种生物机能的化学物的化学物质质的的总总称称”实用文档抗抗生生素素的的分分类类内内酰酰胺胺类类抗生素抗生素四四环环素素类类抗生素抗生素氨基糖苷氨基糖苷类类抗生素抗生素大大环环内内酯类酯类抗生素抗生素多多烯烯大大环类环类抗生素抗生素制菌霉素、两性霉素制菌霉素、两性霉素多多肽类肽类抗生素抗生素放放线线菌素、多黏菌素菌素、多黏菌素酰酰胺醇胺醇类类抗生素抗生素氯氯霉素霉素抗抗肿肿瘤瘤类类抗生素抗生素其他抗生素其他抗生素二、抗生素二、抗生素类药类药物的分物的分类类按化学按化学结结构分构分实用文档三、抗生素三、抗生素类药类药物的物的细细菌耐菌耐药药性性实用文档实用文档实用文档实用文档三、抗生素三、抗生素类药类药物的物的细细菌耐菌耐药药性性1、耐、耐药药性的种性的种类类固有耐固有耐药药性性：天然耐：天然耐药药性，由性，由细细菌染色体基因决定菌染色体基因决定获获得性耐得性耐药药性性：2、耐、耐药药的机制的机制（1）产产生生灭灭活活酶酶，使抗菌，使抗菌药药失活失活 如如-内内酰酰胺胺酶酶（2）抗菌）抗菌药药物作用靶位改物作用靶位改变变（3）降低）降低细细菌外膜通透性菌外膜通透性（4）影响主）影响主动动流出系流出系统统实用文档实用文档四、抗生素四、抗生素药药物的物的质质量分析量分析鉴别试验鉴别试验1、官能、官能团团的的显显色反色反应应特殊基特殊基团团的反的反应应2、光、光谱谱法法特征吸收特征吸收3、色、色谱谱法法保留行保留行为为4、生物学方法、生物学方法抗菌能力抗菌能力实用文档检查检查1、影响、影响产产品品稳稳定性的定性的检查项检查项目目水份、酸水份、酸碱度等碱度等2、控制有机和无机、控制有机和无机杂质杂质的的检查项检查项目目3、与、与临临床安全性密切相关的床安全性密切相关的检查项检查项目目异异常毒性、常毒性、热热原等原等4、其他、其他检查项检查项目目其他共存其他共存组组分分实用文档 含量或效价含量或效价测测定定1、微生物、微生物检检定法定法比比浊浊法法管碟管碟琼琼脂脂扩扩散法散法抑菌圈抑菌圈Potency:是指每是指每ml或每或每mg中含有某种抗中含有某种抗生素有效成分的多少生素有效成分的多少 U/mg是以抗生素是以抗生素对对微生物的微生物的杀伤杀伤或或抑制程度抑制程度为为指指标标来判断效价的来判断效价的一种方法一种方法方法方法实用文档灵敏度高、需用量少灵敏度高、需用量少适用范适用范围围广广纯纯品、不品、不纯纯品、已知的和新的品、已知的和新的可一次可一次测测定同定同类类型抗生素的型抗生素的总总效价效价无需分离无需分离纯纯化化与与临临床的床的应应用要求一致用要求一致操作繁操作繁琐琐、费时费费时费力力误误差差较较大大是是结结构复构复杂杂和多和多组组分抗生分抗生素效价素效价测测定的首先方法定的首先方法优优点点 含量或效价含量或效价测测定定1、微生物、微生物检检定法定法缺点缺点实用文档 2、物理化学法、物理化学法 HPLC LC-MS UV 容量法容量法准确可靠、准确可靠、专专属性高、操作属性高、操作简单简单、省、省时时、样样品用量少品用量少1、对结对结构已知或提构已知或提纯纯的抗生素的抗生素2、需要、需要标标准品准品对对照照仪仪器器分分析析方方法法 含量或效价含量或效价测测定定实用文档第二第二节节 -内内酰酰胺胺类类抗生素抗生素实用文档-内内酰酰胺胺类类抗生素抗生素6-氨基青霉氨基青霉烷烷酸酸（6-APA）；）；青青霉素霉素类类；7-氨基氨基头孢头孢菌菌烷烷酸（酸（7-ACA）；）；头孢头孢菌素菌素类类；一一、结结构构及及分分类类氢氢化化噻嗪环噻嗪环氢氢化化噻唑环噻唑环实用文档青霉素青霉素（青霉素（青霉素钾钾、钠钠）实用文档氨氨苄苄西林西林（氨（氨苄苄青霉素）青霉素）实用文档阿莫西林阿莫西林（羟羟氨氨苄苄青霉素）青霉素）实用文档普普鲁鲁卡因青霉素卡因青霉素实用文档实用文档头孢头孢氨氨苄苄实用文档头孢羟头孢羟氨氨苄苄实用文档 理化性理化性质质1、酸性与溶解性、酸性与溶解性2、旋光性、旋光性3、紫外吸收特性、紫外吸收特性4、不、不稳稳定性定性实用文档酸性酸性一、一、结结构特点与性构特点与性质质NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成成盐盐 （一）（一）羧羧基基 易溶于水易溶于水 实用文档与有机碱与有机碱(普普鲁鲁卡因卡因)成成盐盐 难难溶于水溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素实用文档实用文档（二）（二）手性手性C 头孢头孢菌素菌素类类 C6 C7青霉素青霉素类类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 实用文档实用文档 （三）共（三）共轭轭体系体系 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素青霉素类类 母核无明母核无明显显UV 多数有苯多数有苯环环取代基取代基 UV实用文档实用文档（四）（四）内内酰酰胺胺环环的不的不稳稳定性定性 水溶液水溶液 不不稳稳定定 干燥干燥纯净纯净 稳稳定定 不不稳稳定定性因素性因素四元四元环张环张力大力大 酰酰胺胺键键易水解易水解 含水量含水量 纯纯度度 实用文档青霉素类青霉素类 某些氧化剂某些氧化剂酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶（某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）降解降解失效失效（四）（四）内内酰酰胺胺环环 实用文档与与含含水水量量和和纯纯度度密密切切相相关关青霉素的降解途径青霉素的降解途径实用文档青霉素的降解青霉素的降解产产物物青霉青霉噻唑噻唑酸酸青霉素青霉素酶酶青霉酸青霉酸强强酸性酸性环环境境青霉青霉烯烯酸酸弱酸性弱酸性环环境境青霉青霉醛醛强强酸性酸性-加加热热青霉胺青霉胺强强酸性酸性-加加热热/青霉素青霉素酶酶-重金属重金属降降解解产产物物实用文档二、二、鉴别鉴别反反应应（一）（一）显显色反色反应应1、异异羟羟肟肟酸酸铁铁反反应应实用文档2.茚茚三三酮酮反反应应-氨基氨基-氨基氨基茚三酮茚三酮 蓝蓝紫色紫色实用文档3.双双缩脲缩脲反反应应似似肽键肽键（开环分解）（开环分解）-内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜紫紫实用文档实用文档4.与重氮苯磺酸反与重氮苯磺酸反应应橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸-56OHHC（偶合）（偶合）酚酚羟羟基基头孢哌酮头孢哌酮实用文档1.K+、Na+的火焰反的火焰反应应（二）各种（二）各种盐盐的反的反应应 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠 白白 K+实用文档2.沉淀反沉淀反应应（青霉素（青霉素盐盐）遇酸遇酸在在过过量量HCl或或有机溶有机溶剂剂中溶解中溶解白白青霉素青霉素青霉素青霉素钠钠青霉素青霉素钾钾+H+实用文档3.重氮化重氮化-偶合反偶合反应应 重氮化重氮化-偶合反偶合反应应芳伯氨基芳伯氨基实用文档光谱法光谱法（三）（三）1、UV法法 样样品、分解品、分解产产物物Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max=262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm=1.301.50实用文档实用文档2、IR法法3180cm-1 N-H内内酰酰胺胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲仲酰酰胺胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林以阿莫西林为为例例实用文档色谱法色谱法（四）（四）1、TLC法法对对照品照品对对照法照法2、HPLC法法实用文档三、三、杂质检查杂质检查 药药物物 检查项检查项目目 检查检查方法方法 头孢头孢他他啶啶 聚合物聚合物 HPLC法法 头孢头孢曲松曲松钠钠 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋头孢呋辛辛酯酯 有关物有关物质质和异构体和异构体 HPLC法法 头孢头孢氨氨苄苄 有关物有关物质质 反相反相TLC法法 青霉素青霉素钾钾（钠钠）吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 实用文档 1.头孢头孢他他啶啶聚合物聚合物的的测测定定 分子排阻色分子排阻色谱谱法法 固定相：葡聚糖凝胶固定相：葡聚糖凝胶G-10 流流动动相相A：3.5%硫酸硫酸铵铵的的0.01mol/L磷酸磷酸盐缓盐缓冲冲液液 流流动动相相B：0.01%十二十二烷烷基硫酸基硫酸钠钠 对对照品溶液：照品溶液：头孢头孢他他啶对啶对照品照品 100g/ml实用文档 1）系）系统统适用性适用性试验试验：理：理论论塔板数和拖尾因子塔板数和拖尾因子用用1mg/ml蓝蓝色葡聚糖色葡聚糖2000、流、流动动相相A测测定；重复定；重复性用性用对对照品溶液、流照品溶液、流动动相相B测测定。定。N不低于不低于900，拖尾因子拖尾因子0.751.5，峰面，峰面积积的的RSD应应小于小于5.0%2）测测定方法定方法 进样进样供供试试液，用流液，用流动动相相A；进样对进样对照液，用流照液，用流动动相相B。以外。以外标标法法计计算，含算，含头孢头孢他他啶啶聚合物以聚合物以头头孢孢他他啶计啶计不得超不得超过过0.3%。实用文档 2.头孢呋头孢呋辛辛酯酯中中有关物有关物质质和异构体和异构体的的检查检查 固定相：固定相：ODS 流流动动相：相：0.2mol/L磷酸二磷酸二氢铵氢铵-甲醇（甲醇（62:38）1）头孢呋头孢呋辛辛酯酯2-异构体的制异构体的制备备：头孢呋头孢呋辛辛酯对酯对 照品照品+流流动动相相 头孢呋头孢呋辛辛酯酯2-异构体。异构体。2）系）系统统适用性适用性试验试验：各异构体之各异构体之间间的的R1.5，以，以 头孢呋头孢呋辛辛酯酯A异构体异构体计计算算n1500。实用文档 3 3）异构体：）异构体：）异构体：）异构体：相相相相对对对对保留保留保留保留时间时间时间时间 1-1-被被被被测测测测物物物物 2-2-标标标标准物准物准物准物异构体异构体异构体异构体 相相相相对对对对保留保留保留保留时间时间时间时间 判断判断判断判断B B异构体异构体异构体异构体 0.85 0.85 供供供供试试试试液液液液谱图谱图谱图谱图中中中中A A异构体的峰面异构体的峰面异构体的峰面异构体的峰面积积积积A A异构体异构体异构体异构体 1.0 1.0 与与与与A A、B B异构体峰面异构体峰面异构体峰面异构体峰面积积积积和之比和之比和之比和之比应应应应 为为为为0.480.550.480.55。异构体异构体A异构体异构体B头孢呋头孢呋辛辛实用文档实用文档3.头孢头孢氨氨苄苄中中有关物有关物质质的的检查检查-反相反相TLC法法 固定相：活化后的硅胶固定相：活化后的硅胶G板置板置5%（V/V）正十四）正十四 烷烷的正己的正己烷烷溶液中，展至溶液中，展至顶顶部，凉干部，凉干 展开展开剂剂：0.1mol/L枸枸橼橼酸酸-0.2mol/L磷酸磷酸氢氢二二 钠钠-丙丙酮酮（120：80：3）供供试试液：本品液：本品 50mg/ml 对对照液（照液（1）：本品）：本品 0.5 mg/ml 对对照液（照液（2）：）：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml 对对照液（照液（3）：）：7-氨基去乙氨基去乙酰酰氧基氧基头孢烷头孢烷酸酸 0.5 mg/ml实用文档结结果判断果判断：供：供试试液如液如显杂质显杂质斑点，与斑点，与对对照液（照液（2）（）（3）位置相同上所的斑点比）位置相同上所的斑点比较较，其，其颜颜色不得更深；如色不得更深；如显显其他其他杂质杂质斑斑 点，与点，与对对照液（照液（1）所）所显显的主斑点比的主斑点比较较，其其颜颜色不得更深。色不得更深。实用文档4.青霉素青霉素钠钠（钾钾）的）的吸收度吸收度检查检查：供供试试液液 1.80mg/ml，结结果判断：果判断：A280不得大于不得大于0.10实用文档（一）高效液相色（一）高效液相色谱谱法法原理：利用青霉素原理：利用青霉素类类抗生素在一定条件下在反相抗生素在一定条件下在反相硅胶上的保留行硅胶上的保留行为为的不同而的不同而实现实现高效分离，并与高效分离，并与标标准品相准品相对对照，而照，而对对其其进进行定量的一种方法。行定量的一种方法。优优化色化色谱谱分析条件分析条件（1）Column -CN ODS C18 C8 -Ben（2）mobile phase/flow rate（3）column temperature（4）detection wavelength（5）workstation sample preparation四、含量四、含量测测定定-容量法和容量法和仪仪器分析法器分析法实用文档实验实验注意事注意事项项（1）色）色谱谱峰要达到峰要达到较较好的分离基好的分离基线线分离分离(base separation)（2）需要）需要标标准品准品对对照，用外照，用外标标法定量法定量（3）可同）可同时测时测定多个定多个组组分的含量分的含量（4）需要排除制）需要排除制剂剂中中辅辅料等料等杂质对测杂质对测定的干定的干扰扰实用文档（二）生物（二）生物样样本中本中-内内酰酰胺胺类类抗生素的分析抗生素的分析血血浆浆尿尿样样唾液唾液胆汁胆汁生生物物样样本本色色谱谱柱柱：Hypersil ODS C18(200 mm4.6 mm,I.D.5m)样样品制品制备备：取血：取血浆浆200L，加入内，加入内标标5L，再加入，再加入HCLO4，窝窝旋提取旋提取Internal standard IS实用文档实用文档第三第三节节 氨基糖苷氨基糖苷类类抗生素抗生素实用文档第三第三节节 氨基糖苷氨基糖苷类类抗生素抗生素链链霉素霉素 双双氢链氢链霉素霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆庆大霉素大霉素 巴巴龙龙霉素霉素实用文档链霉素链霉素链链霉胍霉胍+链链霉糖霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺实用文档链链霉素：霉素：链链霉胍霉胍链链霉糖霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺实用文档巴龙霉素巴龙霉素D-葡萄糖胺葡萄糖胺+脱氧脱氧链链霉胺霉胺+D-核糖核糖+巴巴龙龙霉糖霉糖巴巴龙龙胺胺苷元苷元巴巴龙龙二糖胺二糖胺 糖糖 实用文档庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红绛红糖胺糖胺 +脱氧脱氧链链霉胺霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 实用文档绛红绛红糖胺糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧脱氧链链霉胺霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺实用文档庆庆大霉素大霉素C复合物复合物 庆庆大霉素大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆庆大霉素大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆庆大霉素大霉素C1a R、R1、R2=H 庆庆大霉素大霉素C2a R=CH3 R1=R2=H 庆庆大霉素大霉素C2b R=R1=H R2=CH3实用文档一、一、结构与性质结构与性质多与硫酸成多与硫酸成盐盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）实用文档链链霉素霉素 pH57.5庆庆大霉素大霉素 pH212 稳定稳定稳定性稳定性（四）（四）UV（三）（三）实用文档坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应实用文档二、二、鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）羟羟基胺基胺结结构构实用文档 （2）Molisch反反应应 具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷类类抗生抗生素素经经酸水解后，在酸水解后，在盐盐酸作用下脱水生成酸作用下脱水生成糠糠醛醛或或羟羟甲基糠甲基糠醛醛，加入，加入 萘萘酚酚（红红紫色紫色）或）或蒽蒽酮酮（蓝蓝紫色紫色）实用文档红红紫色紫色实用文档 （3）Elson-Morgan反反应应 水解水解产产生的生的N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺在碱性溶在碱性溶液中与乙液中与乙酰酰丙丙酮酮合成吡咯衍生物，再与合成吡咯衍生物，再与对对二二甲氨基苯甲甲氨基苯甲醛醛的酸性醇溶液反的酸性醇溶液反应应，生成，生成樱樱桃桃红红色色缩缩合物。合物。蓝蓝紫色紫色实用文档 （4）麦芽酚反）麦芽酚反应应链链霉素的特征反霉素的特征反应应 链链霉素水解得到的霉素水解得到的链链霉糖霉糖经经分子重排使分子重排使环扩环扩大形成六元大形成六元环环，然后消除，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再甲基葡萄糖胺，再消除消除链链霉胍，生成霉胍，生成-甲基甲基-羟羟基基-吡喃吡喃酮酮（麦（麦芽酚），芽酚），该该化合物与化合物与Fe3+在弱酸性溶液中形成在弱酸性溶液中形成红红紫色紫色配位化合物。配位化合物。实用文档紫紫红红麦芽酚麦芽酚实用文档（5）坂口反）坂口反应应链链霉胍的特有反霉胍的特有反应应 向向链链霉素的水解霉素的水解产产物物链链霉胍与霉胍与NaBrO2反反应应得得产产物物1；8-羟羟基基喹喹啉啉也和也和NaBrO2反反应应得得产产物物2。产产物物1和和产产物物2再相互作用生成再相互作用生成橙橙红红色色化合物。化合物。实用文档（八）色（八）色谱谱法法（1）TLC法：硫酸法：硫酸庆庆大霉素的大霉素的鉴别鉴别 点点样样：供：供试试液：展开、凉干、碘蒸气中液：展开、凉干、碘蒸气中显显色色 对对照液照液 判断：供判断：供试试液与液与对对照液所照液所显显斑点的斑点的颜颜色与位色与位 置置应应一致。一致。点点样样：供：供试试液液 对对照液照液：硫酸：硫酸链链霉素霉素标标准品准品 对对照液照液：硫酸：硫酸链链霉素霉素标标准品准品+硫酸硫酸 新霉素新霉素标标准品准品+硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素标标准品准品实用文档判定法：供判定法：供试试液中主斑点的位置、液中主斑点的位置、颜颜色、大小色、大小 应应与与对对照液照液 相同，相同，对对照液照液应显应显示分离清晰的示分离清晰的3个斑点个斑点 否否则试验则试验无效。无效。（2）HPLC法：硫酸法：硫酸庆庆大霉素的大霉素的鉴别鉴别 比比较较供供试试液与液与对对照液各照液各组组分的保留分的保留时时间间。实用文档 特殊特殊杂质杂质的的检查检查（1）链链霉素中霉素中链链霉素霉素B的的检查检查TLC法法硅胶硅胶G板（板（使用前需活化使用前需活化）、展开）、展开剂剂 甲苯甲苯-冰乙冰乙酸酸-甲醇甲醇（50:25:25）、）、0.2二二羟萘羟萘的乙醇的乙醇20硫酸混合液硫酸混合液（2）庆庆大霉素中大霉素中组组分分C的的检查检查衍生化后衍生化后HPLC色色谱谱柱、流柱、流动动相、相、检测检测波波长长、衍生化条件的摸索、衍生化条件的摸索 组组分分C的毒副作用和耐的毒副作用和耐药药性与性与庆庆大霉素有差异，大霉素有差异，导导致致产产品的效价和品的效价和临临床床疗疗效效实用文档+410.pH吲哚吲哚衍生物衍生物巯巯基醋酸基醋酸邻邻苯二苯二醛醛氨基氨基max=330nm衍生化原理衍生化原理 1.实用文档1-烷烷基硫代基硫代-2-烷烷基基异异吲哚吲哚衍生物衍生物实用文档实用文档RPHPLC方法方法 2.规规定定 C1 2550%C1a 1540%C2a+C2 2050%计算计算 3.峰面峰面积归积归一化法一化法实用文档实用文档实用文档四、四、含量测定含量测定微生物微生物检检定法定法 各国各国药药典主要采用典主要采用HPLC法法 常用于体内常用于体内药药分分 返返 回回实用文档第四部分：四第四部分：四环环素素类类抗生素抗生素Trtracyclines TC实用文档 理化特性理化特性（1）酸碱两性）酸碱两性C4（二甲氨基二甲氨基）、）、C10（酚酚羟羟基基）（2）旋光性）旋光性含有手性中心含有手性中心（一般（一般为为左旋）左旋）（3）紫外吸收特性具有）紫外吸收特性具有共共轭轭双双键键体系（吸收波体系（吸收波长长为长为长波方向）波方向）（4）与金属离子的配位化合物反）与金属离子的配位化合物反应应酚酚羟羟基和基和烯烯醇醇基基（5）不）不稳稳定性定性对对各种外界条件，包括氧化各种外界条件，包括氧化剂剂、酸、酸、碱，易形成碱，易形成差向、脱水和异四差向、脱水和异四环环素素，颜颜色加深色加深实用文档弱酸性弱酸性环环境境ETC差向四差向四环环素素实用文档强强酸性酸性环环境境ATC脱水四脱水四环环素素实用文档碱性碱性环环境境EATC异四异四环环素素差向脱水四差向脱水四环环素素实用文档二、二、鉴别试验鉴别试验 浓浓H2SO4反应反应（一）（一）黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素4 42 2SOH盐酸美他环素盐酸美他环素橙红色橙红色实用文档FeCl3反应反应（二）（二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素3 3FeCl实用文档TLC法法（三）（三）盐盐酸土霉素的酸土霉素的鉴别鉴别 HPLC法法（五）（五）EDTA 克服痕量金属造成的克服痕量金属造成的 拖尾拖尾现现象象比比较较保留保留时间时间实用文档三、三、特殊特殊杂质检查杂质检查 4-差向四差向四环环素（素（ETC）脱水四脱水四环环素（素（ATC）差向脱水四差向脱水四环环素（素（EATC）盐盐酸金霉素（酸金霉素（CTC）有关物质有关物质（一）（一）HPLC法（法（2000版）版）盐盐酸四酸四环环素素实用文档四四环环素有关物素有关物质质TLC图图I.供试液供试液(5 mg/ml)II.ETCIII.(0.2 mg/ml)III.ATCIV.(0.025 mg/ml)IV.EATC(0.025 mg/ml)V.CTCVI.(0.1 mg/ml)VI.混合液混合液40.50.52实用文档实用文档吸收度吸收度（二）（二）nmmax355268l、盐盐酸四酸四环环素素实用文档实用文档杂质杂质吸收度吸收度 取取供供试试品品配配成成每每10mg/ml的的溶溶液液至至4cm的的吸吸收收池池中中，在在530nm处处测测定定，其其吸收度不得超吸收度不得超过过0.12。应严应严格控制温度和格控制温度和时间时间实用文档四、四、含量测定含量测定HPLC法法 盐盐酸四酸四环环素的素的测测定定 系系统统适用性适用性试验试验：盐盐酸四酸四环环素、有关素、有关 物物质质及及ATC峰峰间间的的 分离度均分离度均应应符合要符合要 求。求。定量方法：外定量方法：外标标法以峰面法以峰面积计积计。实用文档第五节 抗生素类药物中高分子 杂质的检查1.高分子高分子杂质杂质 分子量大于分子量大于药药物本身的物本身的杂质总杂质总称。称。实用文档 蛋白、多蛋白、多肽肽、多糖或抗生素与蛋白、多糖或抗生素与蛋白、多多肽肽、多糖的、多糖的结结合物。主要来自于合物。主要来自于发发酵工酵工艺艺，致敏，如青霉，致敏，如青霉噻唑噻唑蛋白、青霉蛋白、青霉噻唑噻唑多多肽肽。药药物的自身聚合物，来自于生物的自身聚合物，来自于生产产、贮贮存存过过程。可引程。可引发过发过敏。敏。外源性外源性杂质杂质内源性内源性杂质杂质实用文档2、基本特点、基本特点对对青霉素而言青霉素而言青霉青霉噻唑噻唑多多肽肽外源性的（外源性的（24003500）青霉素聚合物青霉素聚合物内源性的（聚合度）内源性的（聚合度）母核参与的聚合反母核参与的聚合反应应N型聚合反型聚合反应应 侧链侧链参与的聚合反参与的聚合反应应L型聚合反型聚合反应应分分类类实用文档（1）生）生产过产过程中的任何蛋白或碎片都可程中的任何蛋白或碎片都可带带入入产产品中，易与品中，易与药药物形成多物形成多肽类杂质肽类杂质（2）形成的聚合物也可）形成的聚合物也可发发生不同程度的降解生不同程度的降解（3）异构体之）异构体之间间可以相互聚合可以相互聚合L-L、D-D、L-D（4）高分子）高分子杂质杂质与生与生产产工工艺艺密切相关密切相关特特点点实用文档高分子高分子杂质杂质的控制方法的控制方法（1）高效液相色）高效液相色谱谱法法（2）凝胶色）凝胶色谱谱自身自身对对照外照外标标法法 Sephadex G-10（3）离子交）离子交换换色色谱谱凝胶色凝胶色谱谱法：法：利用凝胶的分子利用凝胶的分子筛筛作用，作用，让药让药物分子自由的物分子自由的进进入到凝胶入到凝胶颗颗粒内部，而高分粒内部，而高分子子杂质杂质被排阻的原理被排阻的原理进进行的。故此大分子行的。故此大分子则则先流出色先流出色谱谱柱，小分子后出峰而得以分离。柱，小分子后出峰而得以分离。实用文档高分子高分子杂质杂质的分析方法的分析方法（1）蓝蓝色葡聚糖在高分子分离中的色葡聚糖在高分子分离中的 N2500/m，拖尾因子，拖尾因子0.751.5（2）峰面）峰面积积的的RSD5色色谱谱适适用用性性条条件件HPLC系系统统简单测简单测定系定系统统分分析析方方法法实用文档练习练习与思考与思考A型型题题1.硫酸硫酸链链霉素、硫酸青大霉素的霉素、硫酸青大霉素的鉴别鉴别方法是方法是A.三三氯氯化化铁铁反反应应 B.硫色素反硫色素反应应 C.茚茚三三酮酮反反应应 D.与碱性酒石酸与碱性酒石酸铜试铜试液反液反应应 E.双双缩脲缩脲反反应应实用文档2.青青霉霉素素钠钠中中国国药药典典规规定定的的含含量量测测定方法定方法为为A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.旋光法旋光法 C.HPLC法法 D.紫外分光法紫外分光法 E.汞量法汞量法实用文档B型型题题A.焰色反焰色反应应 B.硫色素反硫色素反应应 C.硝酸反硝酸反应应 D.三三氯氯化化锑锑反反应应 E.麦芽酚和坂口反麦芽酚和坂口反应应反反应应 1.青霉素青霉素钠钠 2.硫酸硫酸链链霉素霉素 3.维维生素生素B1 4.维维生素生素AAEBD实用文档X型型题题1.用汞量法用汞量法测测定的定的药药物有物有A。青霉素。青霉素钠钠 B.青霉素青霉素V钾钾 C.维维生素生素C D.青霉素青霉素V钾钾片片 E.维维生素生素C注射液注射液实用文档 2.可用微生物法可用微生物法测测定含量的定含量的药药物有物有A硫酸硫酸链链霉素霉素 B.硫酸青大霉素硫酸青大霉素 C.罗红罗红霉素霉素D.青霉素青霉素钠钠 E.青霉素青霉素V钾钾 实用文档 简简答答题题：1、简简述青霉素与四述青霉素与四环环素的不素的不稳稳定性及不同条件下的降解定性及不同条件下的降解产产物？物？2、简简述述链链霉素的特征霉素的特征鉴别鉴别反反应应及原理？及原理？实用文档名名词词解解释释1、麦芽酚反、麦芽酚反应应2、坂口反、坂口反应应3、Elson-Morgan反反应应实用文档