实验六植物种子生命力的快速测定ppt课件.ppt
实验六实验六 植物种子生命力的快速测定植物种子生命力的快速测定 TTC法红墨水法BTB法种子生活力：种子生活力：是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。种子寿命：种子寿命：种子从发育成熟到丧失生活力所经历的时间。种子从发育成熟到丧失生活力所经历的时间。种子寿命既与植物种类有关，也与贮藏条件（种子含水量、种子寿命既与植物种类有关，也与贮藏条件（种子含水量、贮藏温度）有关。贮藏温度）有关。正常性种子：水稻、玉米、小麦等种子（正常性种子：水稻、玉米、小麦等种子（1-3年）年）短寿命：短寿命：柳树种子（柳树种子（12h）长寿命：长寿命：莲子（莲子（400年）年）贮存条件：低温、低湿，保存时间长贮存条件：低温、低湿，保存时间长种子活力检测评估方法：种子活力检测评估方法：(1)还原力：呼吸还原力：呼吸NADH 还原还原TTC，胚呈红色。胚呈红色。(2)原生质着色：活种子不易着色，原生质膜具有选择透性。原生质着色：活种子不易着色，原生质膜具有选择透性。(3)呼吸释放呼吸释放CO2，pH下降，酸碱指示剂显色。下降，酸碱指示剂显色。(4)细胞中的荧光物质：紫外照射发蓝、蓝紫色荧光。细胞中的荧光物质：紫外照射发蓝、蓝紫色荧光。(5)外外观观目目测测法法：用用肉肉眼眼观观察察玉玉米米种种胚胚形形状状和和色色泽泽。凡凡种种胚胚凸凸出出或或皱皱缩缩、显显黑黑暗暗无无光光泽泽的的，则则种种子子新新鲜鲜，生生活活力力强强，可可作生产用种。作生产用种。（6）浸种催芽法）浸种催芽法先先将将100粒粒种种子子用用水水浸浸约约两两小小时时吸吸胀胀，放放于于湿湿润润草草纸纸上上，盖盖以以湿湿润润草草纸纸，置置于于氧氧气气充充足足，室室温温10-20环环境境中中，让让种种子子充充分分发发芽芽；再再以以发发芽芽的的种种子子粒粒数数除除以以100，乘乘以以100%，求得发芽率。，求得发芽率。这种测定方法虽然准确，但需要这种测定方法虽然准确，但需要8天时间。天时间。1.实验目的实验目的 掌握快速测定植物种子生命力的方法掌握快速测定植物种子生命力的方法理解理解TTC/BTB/染料法测定种子活力的原理染料法测定种子活力的原理TTC法法红墨水法红墨水法BTB法法2.实验原理实验原理 2.1 TTC法法TTC（2,3,5-三三苯苯基基氯氯化化四四氮氮唑唑）的的氧氧化化态态是是无无色色的的，可可被被氢还原成不溶性的氢还原成不溶性的红色红色三苯甲腙（三苯甲腙（TTF）。）。当当TTC溶溶液液渗渗入入种种胚胚的的活活细细胞胞内内，并并作作为为氢氢受受体体被被脱脱氢氢辅辅酶酶（NADH或或NADPH）还还原原时时，可可产产生生红红色色的的三三苯苯甲甲腙腙（TTF），胚染成），胚染成红色红色。如如果果种种胚胚死死亡亡则则不不能能染染色色，种种胚胚生生命命力力衰衰退退或或部部分分丧丧失失生生活力则活力则染色较浅或局部被染色。染色较浅或局部被染色。因因此此，可可以以根根据据种种胚胚染染色色的的部部位位或或染染色色的的深深浅浅程程度度来来鉴鉴定定种种子的生命力。子的生命力。TTC还原反应：2,3,5-三苯基氯化四氮唑三苯基氯化四氮唑 三苯甲腙三苯甲腙TTCTTC法测定主要作物种子生活力要点法测定主要作物种子生活力要点法测定主要作物种子生活力要点法测定主要作物种子生活力要点 作作 物物种子准种子准备备TTC浓浓度度(%)在在35下下染色染色时间时间(h)水水 稻稻去壳去壳纵纵切切0.123高粱、玉米及麦高粱、玉米及麦类类作物作物纵纵切切0.10.51棉花、棉花、荞荞麦、蓖麻麦、蓖麻剥去种皮剥去种皮1.023花生、甜菜、大麻、花生、甜菜、大麻、向向日葵日葵剥去种皮剥去种皮0.134大豆、大豆、菜豆、菜豆、亚亚麻、麻、二叶草二叶草无无须须准准备备1.0342.2 染料（红墨水）染色法染料（红墨水）染色法 有有生生命命力力种种子子胚胚细细胞胞的的原原生生质质膜膜具具有有半半透透性性，有有选选择择吸吸收收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。胚部不染色。而而丧丧失失生生命命力力的的种种子子，其其胚胚部部细细胞胞原原生生质质膜膜丧丧失失了了选选择择吸吸收能力，染料可以自由进入细胞内，收能力，染料可以自由进入细胞内，使胚部染色。使胚部染色。因因此此，可可以以根根据据种种子子胚胚部部是是否否被被染染色色来来判判断断种种子子的的生生命命力力。2.3 BTB（溴麝香草酚蓝）法（溴麝香草酚蓝）法活活细细胞胞呼呼吸吸释释放放CO2，CO2溶溶于于水水成成H2CO3解解离离，使使种种胚胚周围环境酸度增加，用周围环境酸度增加，用BTB来反映酸度的改变。来反映酸度的改变。BTB变变色色范范围围为为pH6.07.6，酸酸性性呈呈黄黄色色，碱碱性性呈呈蓝蓝色色，中间经过绿色（变色点为中间经过绿色（变色点为pH7.1）。）。本实验观察种胚周围的黄色晕圈。本实验观察种胚周围的黄色晕圈。材料：材料：小麦种子小麦种子仪器设备：仪器设备：小烧杯；刀片；镊子；温箱小烧杯；刀片；镊子；温箱试剂：试剂：0.120.5TTC溶溶液液（TTC可可直直接接溶溶于于水水，溶溶于于水水后后，呈呈中性，中性，pH70.5，不宜久藏，应随用随配）。，不宜久藏，应随用随配）。0.020.2靛红溶液或靛红溶液或5红墨水（酸性大红红墨水（酸性大红G）。）。3.材料、仪器设备与试剂材料、仪器设备与试剂4.实验步骤实验步骤1）将种子用温水（约）将种子用温水（约30）浸泡）浸泡26h，使种子充分吸胀。，使种子充分吸胀。2）随随机机取取小小麦麦种种子子30粒粒，沿沿种种胚胚中中央央准准确确切切开开，每每切切1粒粒确确认认各半种子皆含胚后，分别放置两只培养皿中。各半种子皆含胚后，分别放置两只培养皿中。3）在在上上述述一一只只培培养养皿皿中中加加入入TTC溶溶液液（至至其其中中种种子子全全部部浸浸入入为为止止），恒恒温温箱箱（3035）中中保保温温至至少少30 min。从从TTC溶溶液中取出种子，直接观察种胚颜色变化。液中取出种子，直接观察种胚颜色变化。4）在在上上述述另另一一培培养养皿皿中中加加入入约约5 ml红红墨墨水水，室室温温下下浸浸5 min；倒倒出出红红墨墨水水后后，用用清清水水冲冲洗洗种种子子12次次（注注意意要要缓缓慢慢冲冲洗洗，不要让水流直接冲到种子上不要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情况。），观察种胚被染色的情况。TTC/TTC/红墨水法红墨水法TTC法：法：凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生命力的种子；凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生命力的种子；种胚不被染色的为死种子。种胚不被染色的为死种子。红墨水法：红墨水法：凡胚部不着色或表面略带浅红色者，即具有生活力的种子；凡胚部不着色或表面略带浅红色者，即具有生活力的种子；若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子。若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子。鉴定标准鉴定标准BTBBTB法法1）煮煮沸沸的的1BTB琼琼脂脂胶胶约约20 ml，倒倒胶胶至至培培养养皿皿（1/3皿皿），冷却。冷却。2）取取30粒粒完完好好的的小小麦麦种种子子，种种胚胚向向下下略略斜斜插插入入胶胶（不不软软不硬）。不硬）。3）将将培培养养皿皿置置于于35 下下培培养养 1 h，对对光光观观察察，如如果果种种胚胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。TTC/红墨水法：红墨水法：1）将种子用温水（约）将种子用温水（约30）浸泡）浸泡26h，使种子充分吸胀。，使种子充分吸胀。2）随随机机取取小小麦麦种种子子30粒粒，沿沿种种胚胚中中央央准准确确切切开开，每每切切1粒粒确确认认各各半半种种子子皆皆含胚后，分别放置两只培养皿中。含胚后，分别放置两只培养皿中。3）在在上上述述一一只只培培养养皿皿中中加加入入TTC溶溶液液（至至其其中中种种子子全全部部浸浸入入为为止止），恒恒温温箱箱（3035）中中保保温温至至少少30 min。从从TTC溶溶液液中中取取出出种种子子，直直接接观观察察种胚颜色变化。种胚颜色变化。4）另另一一培培养养皿皿中中加加入入约约5 ml红红墨墨水水，室室温温下下浸浸5 min；倒倒出出红红墨墨水水后后，用用清清水水冲冲洗洗种种子子12次次（注注意意要要缓缓慢慢冲冲洗洗，不不要要让让水水流流直直接接冲冲到到种种子子上上），观察种胚被染色的情况。观察种胚被染色的情况。BTB法：法：1）煮沸的）煮沸的1BTB琼脂胶约琼脂胶约20 ml，倒胶至培养皿（，倒胶至培养皿（1/3皿），冷却。皿），冷却。2）取）取30粒完好的小麦种子，种胚向下略斜插入胶粒完好的小麦种子，种胚向下略斜插入胶(不软不硬不软不硬)。3）将将培培养养皿皿置置于于35 下下培培养养 1 h，对对光光观观察察，如如果果种种胚胚附附近近呈呈现现较较深深黄黄色色晕圈是活种子，否则是死种子。晕圈是活种子，否则是死种子。实验步骤实验步骤不同方法测定种子生活力记录表不同方法测定种子生活力记录表方法方法供供试试粒数粒数有生活力种有生活力种子粒数子粒数无生活力无生活力种子粒数种子粒数有生活力种子有生活力种子占供占供试试粒数的粒数的%TTC30红墨水红墨水30BTB305.结果与分析结果与分析分析分析TTC法和红墨水法测定的种子生活力结果，比较三种法和红墨水法测定的种子生活力结果，比较三种方法快速检测种子活力的优缺点。方法快速检测种子活力的优缺点。6.注意事项注意事项1）TTC溶溶液液最最好好现现配配现现用用，如如需需贮贮藏藏则则应应贮贮于于棕棕色色瓶瓶中中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。2）TTC反应温度一般以反应温度一般以3035为宜。为宜。3）TTC反反应应结结束束，从从黑黑暗暗下下取取出出后后立立即即观观察察，因因光光下下久久放放TTC本身会变色。本身会变色。4）显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中。）显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中。TTC法：法：1）染料浸泡时要使漂浮的种子全部浸入试剂中；）染料浸泡时要使漂浮的种子全部浸入试剂中；2）染色时间不能太长，否则不易区分。）染色时间不能太长，否则不易区分。染料染色法：染料染色法：1）BTB溶溶胶胶层层厚厚度度取取决决于于种种子子大大小小，原原则则上上保保证证种种胚胚接接触触皿皿底底后后尚尚有有部部分分露露出出胶胶层层上上方方，胶胶层层厚厚度度可可使使种种子子稳稳定定在其中；在其中；2）取完好小麦种子，将种胚轻稳地向下插入）取完好小麦种子，将种胚轻稳地向下插入BTB琼脂胶中。琼脂胶中。BTB法法：7.思考题思考题TTC法法和和红红墨墨水水法法测测定定种种子子生生活活力力的的理理论论依依据据有何不同有何不同?
