汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定(精品).ppt

实验四实验四 汉防己中生物碱的汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定提取、分离和鉴定 实验目的：实验目的：1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。2、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。3、掌握生物碱的鉴定方法。、掌握生物碱的鉴定方法。实验原理：实验原理：根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵型生通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，在利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相在利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离。互分离。汉防己甲素汉防己甲素 R=CH3 汉防己乙素汉防己乙素 R=H实验器材：实验器材：试药：汉防己、试药：汉防己、85%乙醇、乙醇、1%盐酸、氯仿、盐酸、氯仿、氨水、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂等等仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、试管等试管等实验内容与方法：实验内容与方法：一、总生物碱的提取一、总生物碱的提取 取取汉汉防防己己粉粉末末100g，置置于于500ml圆圆底底烧烧瓶瓶中中，加加85%乙乙醇醇300ml，水水浴浴加加热热回回流流1小小时时，滤滤出出乙乙醇醇提提取取液液；药药渣渣重重新新加加入入85%乙乙醇醇200ml同同法法提提取取1次次，合合并并两两次次提提取取液液，过过滤滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。二、精制二、精制 将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐盐酸调酸调PH为为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄，边加边搅拌，静置，过滤，得澄明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为为10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化氢氧化钠溶液洗钠溶液洗2次，再用水洗次，再用水洗2-3次后加入约次后加入约5g无水无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱。量，得汉防己总碱。三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离 1.装柱装柱 取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性氧化铝端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目目20g，缓缓，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀。柱中填实均匀。2.上样上样 取取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加量丙酮溶解，另加0.5g色谱用氧化铝（作吸附剂），色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。3.洗脱洗脱 将色谱柱活塞打开，以环己烷将色谱柱活塞打开，以环己烷-丙酮（丙酮（4 1）洗脱，流速控制在洗脱，流速控制在5ml/min，收集各流分（，收集各流分（10ml15ml/份）。份）。4.检查检查 将各流分回收溶剂，依次点于硅胶将各流分回收溶剂，依次点于硅胶G-CMC-Na薄层板上，用氯仿薄层板上，用氯仿丙酮丙酮甲醇（甲醇（6 1 1）为展）为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的Rf值，合并相同值，合并相同Rf值的流分。值的流分。5.结晶结晶 将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉防己乙素结晶防己乙素结晶。四、检识四、检识1、化学检识、化学检识 将提取的氯仿液，用将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃的盐酸萃取，得盐酸溶液取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小毫升，分为四个小试管储存，分别在四个小试管中加入改试管储存，分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾、碘良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、碘化钾、碘化汞钾、硅钨酸试剂，观察各试管中的变化，记硅钨酸试剂，观察各试管中的变化，记录在如下表格中。录在如下表格中。2、色谱检识、色谱检识色谱材料：硅胶色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板硬板点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己乙素的乙素的0.1%醇溶液醇溶液展开剂：展开剂：氯仿氯仿丙酮丙酮甲醇（甲醇（6 1 1）氯仿氯仿乙醇（乙醇（10 1）甲苯甲苯丙酮丙酮乙醇（乙醇（4 5 1）显色剂：改良碘化铋钾试剂显色剂：改良碘化铋钾试剂 观察记录：记录图谱及斑点颜色观察记录：记录图谱及斑点颜色实验注意事项：实验注意事项：1、提取装置的安装要小心，不能打碎仪器。、提取装置的安装要小心，不能打碎仪器。2、提提取取总总生生物物碱碱时时，回回收收乙乙醇醇至至稀稀浸浸膏膏状状即即可可，过过干干时时，当当加加入入盐盐酸酸后后会会结结成成胶胶状状团块，影响提取效果。团块，影响提取效果。3、用用1%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液洗洗氯氯仿仿液液目目的的是是分分除除酚酚性性生生物物碱碱。汉汉防防己己乙乙素素结结构构中中的的酚酚羟羟基基由由于于空空间间效效应应和和氢氢键键的的形形成成，呈呈隐隐性性酚酚羟羟基基性性质质，酸酸性性减减弱弱，不不溶溶于于强强碱碱溶溶液液中中，在此步骤中仍留在氯仿液中在此步骤中仍留在氯仿液中。