不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白.ppt

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白一、实验目的一、实验目的1掌握凝胶电泳的三个效应。掌握凝胶电泳的三个效应。2了解该电泳的特点及适用范围。了解该电泳的特点及适用范围。二、基本原理二、基本原理讲解聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应：讲解聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应：1、浓缩效应。、浓缩效应。2、电荷效应。、电荷效应。3、分子筛效应。、分子筛效应。三、实验原理三、实验原理 本实验利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳支持物。电本实验利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳支持物。电荷数和分子大小不一的各种血清蛋白质通过浓缩效荷数和分子大小不一的各种血清蛋白质通过浓缩效应、电荷效应、分子筛效应而被精细地分离。由于应、电荷效应、分子筛效应而被精细地分离。由于具有以上三种效应，所以此方法分离效果好，分辨具有以上三种效应，所以此方法分离效果好，分辨率高，血清蛋白在纸上电泳仅能分成率高，血清蛋白在纸上电泳仅能分成57个组分，个组分，而在聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳中可分出而在聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳中可分出1230个组个组分分。四、实验材料四、实验材料 1圆盘电泳槽。圆盘电泳槽。2电泳仪。电泳仪。3玻璃管（玻璃管（100.6 cm）。）。450l微量注射器、微量注射器、5ml注射器。注射器。510 cm长的局麻针头，长的局麻针头，10号针头。号针头。6试剂试剂 五、实验方法五、实验方法（一）凝胶柱的制备（一）凝胶柱的制备 1凝胶玻璃管的准备凝胶玻璃管的准备 2分离胶的制备分离胶的制备 3浓缩胶的制备浓缩胶的制备 4.装柱装柱(二二)加样加样(三三)电泳电泳(四四)剥胶剥胶(五五)固定和染色固定和染色(六六)漂洗漂洗六、注意事项六、注意事项 1丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，并对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。大量操并对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。大量操作时应在通风橱中进行。作时应在通风橱中进行。2丙稀酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色丙稀酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，置冰箱内（瓶中，置冰箱内（4）保存。可贮存）保存。可贮存12个月。测个月。测定定pH（4.95.2）可检查其是否失效，失效不能聚）可检查其是否失效，失效不能聚合。合。3TEMED要密封保存，过硫酸铵溶液最好当要密封保存，过硫酸铵溶液最好当天配制，以防止氧化失效。天配制，以防止氧化失效。4凝胶的聚合速度与温度关系很大，温度低时，凝胶的聚合速度与温度关系很大，温度低时，聚合速度减慢，必须根据实验时的温度调整聚合速度减慢，必须根据实验时的温度调整3号、号、4号试剂的用量，以使凝胶在号试剂的用量，以使凝胶在30 min内聚合内聚合。实验思考实验思考1、解释聚丙烯酰胺凝胶电泳的三个效应。、解释聚丙烯酰胺凝胶电泳的三个效应。2、由本次实验结果解释醋纤薄膜电泳分离后、由本次实验结果解释醋纤薄膜电泳分离后各条区带清晰度的差别。各条区带清晰度的差别。