第四章 中药制剂的含量测定精选文档.ppt

第四章 中药制剂的含量测定本讲稿第一页，共一百一十四页第一节第一节 含量测定的目的与意义含量测定的目的与意义 在我国药品质量标准中，在我国药品质量标准中，鉴别鉴别、检检查查 和和 含量测定含量测定 项目是判定中药制剂质量优项目是判定中药制剂质量优劣的标准。劣的标准。中药制剂的鉴别是研究某种原料药或成中药制剂的鉴别是研究某种原料药或成分的存在与否，从而判定药物的真伪，而含分的存在与否，从而判定药物的真伪，而含量测定项目是研究某种成分的含量高低是否量测定项目是研究某种成分的含量高低是否符合规定来判定药物的优劣。中药制剂的含符合规定来判定药物的优劣。中药制剂的含量测定是质量控制中的一项重要指标。量测定是质量控制中的一项重要指标。通过测定制剂中有效成分、毒性成分或通过测定制剂中有效成分、毒性成分或某些指标性成分的含量来衡量其制剂工艺的某些指标性成分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣，以保证中药制稳定性和中药材的质量优劣，以保证中药制剂的质量，达到临床用药安全、有效和中药剂的质量，达到临床用药安全、有效和中药制剂进入国际市场的需要。制剂进入国际市场的需要。本讲稿第二页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 中药制剂样品的基质和成分组成十分复杂，而且样品中被测成分中药制剂样品的基质和成分组成十分复杂，而且样品中被测成分往往含量较低，因此需要对样品进行各种处理，使其符合所选定分析往往含量较低，因此需要对样品进行各种处理，使其符合所选定分析方法的要求。方法的要求。样品处理的主要作用有：样品处理的主要作用有：将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样。的稳定试样。除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。本讲稿第三页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 一、样品的粉碎一、样品的粉碎 样品的粉碎有两个目的：样品的粉碎有两个目的：W 是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精密度是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精密度和准确度；和准确度；W 是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。粉碎时注意事项：粉碎时注意事项：S 不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成过滤困难，因不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成过滤困难，因此可视实际情况进行粉碎过筛。此可视实际情况进行粉碎过筛。S 避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损或不干净等原避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损或不干净等原因而玷污样品，因而玷污样品，S 防止粉尘飞散或挥发性成分的损失。防止粉尘飞散或挥发性成分的损失。S 过筛时，通不过筛孔的部分颗粒决不能丢弃，必须反复粉碎或碾磨，过筛时，通不过筛孔的部分颗粒决不能丢弃，必须反复粉碎或碾磨，让其全部通过筛孔。让其全部通过筛孔。本讲稿第四页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 二、样品的提取二、样品的提取 对于中药材和固体制剂样品，在粉碎后，取粉末适量对于中药材和固体制剂样品，在粉碎后，取粉末适量精密称定，首先用溶剂进行提取，使被测组分和某些共存精密称定，首先用溶剂进行提取，使被测组分和某些共存组分从中溶解出来（前者必须完全溶出），与滤渣分离后，组分从中溶解出来（前者必须完全溶出），与滤渣分离后，再对被测组分进行含量测定。再对被测组分进行含量测定。下面介绍几种常见的提取方法：下面介绍几种常见的提取方法：Y 冷浸法冷浸法 Y 回流提取法回流提取法 Y 连续回流提取法连续回流提取法 Y 超声提取法超声提取法 Y 超临界流体提取法超临界流体提取法本讲稿第五页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（一）冷浸法（一）冷浸法 按所需准确度要求称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀后按所需准确度要求称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀后放置，浸泡提取，溶剂用量为样品重量的放置，浸泡提取，溶剂用量为样品重量的10105050倍，并称重。浸倍，并称重。浸泡时间泡时间12122424小时，浸泡期间应注意经常振摇，浸泡后再称重，小时，浸泡期间应注意经常振摇，浸泡后再称重，补足溶剂充分摇匀，浸泡后的溶液，可取部分测定，也可全部测补足溶剂充分摇匀，浸泡后的溶液，可取部分测定，也可全部测定。定。部分测定法（即等量法）是将浸泡后的溶液，用适宜滤器过滤，部分测定法（即等量法）是将浸泡后的溶液，用适宜滤器过滤，精密量取一定量体积的滤液，与一定重量的样品相当，进行测定。精密量取一定量体积的滤液，与一定重量的样品相当，进行测定。此此法不适宜挥发性较大的提取溶剂。法不适宜挥发性较大的提取溶剂。全部测定法（即总量测定法）是将浸泡后的溶液滤过，滤全部测定法（即总量测定法）是将浸泡后的溶液滤过，滤渣充分用溶剂洗涤至提取完全，合并滤液及洗液，浓缩或蒸干渣充分用溶剂洗涤至提取完全，合并滤液及洗液，浓缩或蒸干得残留物用另一溶剂溶解，定量转入容量瓶，稀释至刻度，摇得残留物用另一溶剂溶解，定量转入容量瓶，稀释至刻度，摇匀，进行测定。匀，进行测定。此法可克服部分测定法的缺陷，且提取时溶剂用量不此法可克服部分测定法的缺陷，且提取时溶剂用量不必精密加入。必精密加入。本讲稿第六页，共一百一十四页（一）冷浸法（一）冷浸法 另外全部测定法中提取液的浓缩蒸干，可根据具体情况采另外全部测定法中提取液的浓缩蒸干，可根据具体情况采用下列方法：用下列方法：6 常压或减压蒸发，后者具有温度低、速度快，适常压或减压蒸发，后者具有温度低、速度快，适于对热不稳定样品之优点；于对热不稳定样品之优点；6 自然挥散或氮气流下吹干。适于小体积样品和挥自然挥散或氮气流下吹干。适于小体积样品和挥发性溶剂，氮气流能防止氧化；发性溶剂，氮气流能防止氧化；6 冷冻干燥（常为水溶液），更适于热不稳定的样品。冷冻干燥（常为水溶液），更适于热不稳定的样品。冷浸法的优点是操作简单，适于热不稳定的样品，且提取冷浸法的优点是操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。其缺点是费时、费溶剂。杂质少。其缺点是费时、费溶剂。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第七页，共一百一十四页（二）回流提取法（二）回流提取法 它是将冷浸法中的带塞容器换成回流装置，用它是将冷浸法中的带塞容器换成回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热回流提取，其余单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热回流提取，其余操作方法同冷浸法。操作方法同冷浸法。优点：优点：1 1、提取效率高于冷浸法；、提取效率高于冷浸法；2 2、且可缩短提取时间，每次提取时间为、且可缩短提取时间，每次提取时间为 0.50.52 2小时，直至提取完全为止。小时，直至提取完全为止。缺点：缺点：1 1、提取杂质较多；、提取杂质较多；2 2、该法对热不稳定或具有挥发性的成分、该法对热不稳定或具有挥发性的成分 不宜使用。不宜使用。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第八页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（三）连续回流提取法三）连续回流提取法 样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进行反复样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进行反复提取（相当于总是在使用新鲜溶剂提取），一般提取数小时方提取（相当于总是在使用新鲜溶剂提取），一般提取数小时方可完全。可完全。优点：优点：1 1）无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管，就可）无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管，就可回收溶剂，再回收溶剂，再 用适宜溶剂溶解，定容，用适宜溶剂溶解，定容，进行测定。进行测定。2 2）提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少，操作）提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少，操作简便。简便。缺点：受热易分解的成分不宜使用。缺点：受热易分解的成分不宜使用。本讲稿第九页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（四）超声提取法（四）超声提取法 样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声振样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器中进行提取。一般样品荡器中进行提取。一般样品3030分钟内即可完成，最多不分钟内即可完成，最多不超过超过1 1小时。小时。优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中提高优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中提高提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分子化合缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分子化合物的降解和解聚合作用等）。物的降解和解聚合作用等）。对于由浸膏制成的固体制剂，用上述方法提取时，通常是精密对于由浸膏制成的固体制剂，用上述方法提取时，通常是精密称取适量药粉于量瓶中，定量加适当溶剂提取后，以干燥滤纸过滤，称取适量药粉于量瓶中，定量加适当溶剂提取后，以干燥滤纸过滤，弃去滤液，取续滤液（防止滤纸吸附或污染被测组分），按部分测弃去滤液，取续滤液（防止滤纸吸附或污染被测组分），按部分测定法测定。定法测定。本讲稿第十页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（五）超临界流体提取法（五）超临界流体提取法（Supercritical-fluid Supercritical-fluid extraction,SFEextraction,SFE）它是以超临界流体（常用它是以超临界流体（常用CO2CO2）作提取溶剂，有效、快速提取）作提取溶剂，有效、快速提取固体或半固体中的被测成分的样品预处理新技术。固体或半固体中的被测成分的样品预处理新技术。超临界流体（超临界流体（SFSF）是指高于临界压力（）是指高于临界压力（PcPc）和临界温度（）和临界温度（TcTc）时）时所形成的单一相态，它既不是液体，又不是气体，而具如下特性：所形成的单一相态，它既不是液体，又不是气体，而具如下特性：1)1)对样品组分溶解能力强。超临界流体（对样品组分溶解能力强。超临界流体（SFSF）的密度与液体的相近）的密度与液体的相近（如（如CO2CO2超临界流体的密度为超临界流体的密度为0.30.30.9g/cm30.9g/cm3），而其具有与液体相似），而其具有与液体相似的溶剂作用；的溶剂作用；2)2)有利于样品中的被测成分扩散进入有利于样品中的被测成分扩散进入SFSF中。中。SFSF的粘度与气体相近，的粘度与气体相近，比液体的略低比液体的略低2 2个数量级，扩散系数却比液体的高个数量级，扩散系数却比液体的高1 1个数量级以上，个数量级以上，使其具有良好的传质性能；使其具有良好的传质性能；本讲稿第十一页，共一百一十四页3)3)SFSF能使提取效率和提取速度大大提高。能使提取效率和提取速度大大提高。SFSF的表面张力几的表面张力几乎为零，而较容易渗透进样品基质空隙中，有利于乎为零，而较容易渗透进样品基质空隙中，有利于SFSF与样品与样品的充分接触；的充分接触；4)4)同一种同一种SFSF在不同温度和压力下可以提取极性或分子大小在不同温度和压力下可以提取极性或分子大小都不相同的化学成分。都不相同的化学成分。SFSF的密度、粘度和扩散系数等都与温的密度、粘度和扩散系数等都与温度、压力和流体组成有关。温度和压力稍高于临界点时，度、压力和流体组成有关。温度和压力稍高于临界点时，SFSF的压缩系数最大，压力的微小变化将导致较大的密度变化，的压缩系数最大，压力的微小变化将导致较大的密度变化，而控制密度就可控制而控制密度就可控制SFSF对溶质的溶解能力，目前也常用升压对溶质的溶解能力，目前也常用升压力（即升密度）提取法进行分步提取。力（即升密度）提取法进行分步提取。最常用的最常用的SFSF是是CO2CO2，它的性质稳定，使用安全，价格，它的性质稳定，使用安全，价格低廉，临界点低（低廉，临界点低（Tc=31Tc=31和和Pc=7.4MPaPc=7.4MPa），易于操作。），易于操作。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第十二页，共一百一十四页本讲稿第十三页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 SFESFE具有优点：具有优点：Z 速度快速度快Z 萃取效率高、萃取效率高、Z 方法准确度高、方法准确度高、Z 选择性较高、选择性较高、Z 节省溶剂、节省溶剂、Z 易于自动化，易于自动化，Z 可避免使用易燃，有毒的有机溶剂，可避免使用易燃，有毒的有机溶剂，Z 能与色谱和光谱等分析仪器直接联用的特点。能与色谱和光谱等分析仪器直接联用的特点。SFE SFE不仅常用于热不稳定成分或挥发性成分的萃取，不仅常用于热不稳定成分或挥发性成分的萃取，而且也越来越多地用于热稳定性成分的萃取。而且也越来越多地用于热稳定性成分的萃取。缺点：对设备要求高。缺点：对设备要求高。本讲稿第十四页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 三、样品的分离净化三、样品的分离净化 （一）沉淀法（一）沉淀法 原理：它是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，原理：它是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离沉淀或保留溶液以得到精制的方法。分离沉淀或保留溶液以得到精制的方法。这种方法须注意：这种方法须注意：1 1）过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法）过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法除去；除去；2 2）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分应不因产）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分应不因产生共沉淀而损失；生共沉淀而损失；3 3）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或直接用重量法测定。溶解或直接用重量法测定。本讲稿第十五页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（二）蒸馏法（二）蒸馏法 原原理理：利利用用某某些些被被测测成成分分具具有有挥挥发发性性，可可采采用用蒸蒸馏馏法法，收收集集馏馏出出液液进进行行含含量量测测定定，或或某某些些成成分分经经蒸蒸馏馏分分解解生生成成挥挥发发性性成成分分，利利用用分分解解产产物物（要要求求结结构构明明确确）进进行行测测定定。目目前以水蒸气蒸馏法应用较多。前以水蒸气蒸馏法应用较多。1 1）它它可可分分为为共共水水蒸蒸馏馏法法（即即直直接接加加热热法法）、通通水水蒸蒸汽汽蒸蒸馏馏法法和和水水上上蒸蒸馏馏法法。如如中中药药制制剂剂中中的的挥挥发发油油，某某些些小小分分子子生生物物碱碱（麻麻黄黄碱碱、於於碱碱、槟槟榔榔碱）及丹皮酚等，都可用蒸馏法提取和分离净化。碱）及丹皮酚等，都可用蒸馏法提取和分离净化。2 2）为为了了使使挥挥发发性性成成分分更更完完全全地地蒸蒸馏馏出出来来，有有时时也也可可用用盐盐析析作作用用，即即在在蒸馏液中加入一定量的无机盐，常用蒸馏液中加入一定量的无机盐，常用NaCl NaCl、NaSO4NaSO4、MgSO4MgSO4等。等。本讲稿第十六页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（三）液一液萃取法（三）液一液萃取法（LLELLE）常用的两种常用的两种LLELLE方法是有机溶剂方法是有机溶剂直接萃取法直接萃取法和和离子对萃取法离子对萃取法。直接萃取法直接萃取法 原理：利用试样中被测成分与干扰成分在有机溶剂（萃取剂）中的原理：利用试样中被测成分与干扰成分在有机溶剂（萃取剂）中的溶解度不同溶解度不同，通过多次萃取来达到分离净化的目的。通过多次萃取来达到分离净化的目的。多次萃取虽然有利于提高萃取回收率和结果的准确度，但多次溶液转移等操作又会多次萃取虽然有利于提高萃取回收率和结果的准确度，但多次溶液转移等操作又会带来误差。有时对于组分复杂，含量低的样品，由于样品数量多，多次萃取费时等原因，带来误差。有时对于组分复杂，含量低的样品，由于样品数量多，多次萃取费时等原因，只要每次测得的回收率重现性好，常在可接受的回收率前提下可采用单次提取。只要每次测得的回收率重现性好，常在可接受的回收率前提下可采用单次提取。直接萃取法常用的溶剂有氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯和乙醚等。可根据被测组分直接萃取法常用的溶剂有氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯和乙醚等。可根据被测组分疏疏水性水性的相对强弱来选择极性适当的溶剂，既保证被测组成的充分萃取，又有很好的选择的相对强弱来选择极性适当的溶剂，既保证被测组成的充分萃取，又有很好的选择性。对于弱酸性成分应调节水相的性。对于弱酸性成分应调节水相的pHKa-2pHKa-2。而弱碱性成分应调节水相的。而弱碱性成分应调节水相的pHPKa+2pHPKa+2（此处为其共轭酸的（此处为其共轭酸的pKapKa），以使弱酸、弱碱性成分主要以非离子化的游离酸、或碱形），以使弱酸、弱碱性成分主要以非离子化的游离酸、或碱形式存在，而提高萃取率。在提取过程中也常利用中性盐的盐析作用，如水相用式存在，而提高萃取率。在提取过程中也常利用中性盐的盐析作用，如水相用NaClNaCl饱和，饱和，使被测组分进入有机相而提高提取率。使被测组分进入有机相而提高提取率。本讲稿第十七页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 离子对萃取法：其原理是在适当的离子对萃取法：其原理是在适当的pHpH介质中，某些有机酸（碱）性物质形成的离子与带介质中，某些有机酸（碱）性物质形成的离子与带相反电荷的离子（也称离子对试剂）定量地结合成为弱极性的离子对，而易溶于有机溶剂，使相反电荷的离子（也称离子对试剂）定量地结合成为弱极性的离子对，而易溶于有机溶剂，使之萃取分离。之萃取分离。它最适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取（不能用直接法萃取），在中它最适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取（不能用直接法萃取），在中药制剂分析中主要用于生物碱（药制剂分析中主要用于生物碱（B B）的分析，其离子对试剂常为酸性染料（）的分析，其离子对试剂常为酸性染料（In-In-）如）如溴麝香草酚蓝（溴麝香草酚蓝（BTBBTB）和溴甲酚绿（）和溴甲酚绿（BCGBCG）等，在水相中的定量反应为）等，在水相中的定量反应为 BH+BH+（水相）（水相）+In_(+In_(水相水相)BH+)BH+In-In-（水相）（水相）BH+BH+In-In-（有机相）（有机相）形成的离子对形成的离子对BH+BH+In-In-常用成氢键能力强的氯仿或二氯甲烷提取。常用成氢键能力强的氯仿或二氯甲烷提取。由上反应可知要求水相中生物碱和酸性染料均有较高的离子化程度，因此必须由上反应可知要求水相中生物碱和酸性染料均有较高的离子化程度，因此必须注意水相的注意水相的pHpH和离子对试剂的选择。通常生物碱与和离子对试剂的选择。通常生物碱与BTBBTB形成形成1111的离子对，最好在的离子对，最好在pH5.2pH5.26.46.4提取，而二元碱形成提取，而二元碱形成1212离子对，最好在离子对，最好在pH3.0pH3.05.85.8提取（二元碱的碱提取（二元碱的碱性弱，需要在较低的性弱，需要在较低的pHpH下离子化后形成离子对）。下离子化后形成离子对）。若氯仿层中的微量水份引起浑浊，可通过加入少许乙醇或久置分层变得澄清，若氯仿层中的微量水份引起浑浊，可通过加入少许乙醇或久置分层变得澄清，也可分离有机相后加入脱水剂（常用无水也可分离有机相后加入脱水剂（常用无水Na2SO4Na2SO4）或经滤纸滤过除去微量水份，另）或经滤纸滤过除去微量水份，另外液一液萃取时应尽量避免发生乳化现象。外液一液萃取时应尽量避免发生乳化现象。本讲稿第十八页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（四）色谱法（四）色谱法 吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱皆可作为中药制剂分析中的吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱皆可作为中药制剂分析中的净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱和纸色谱。净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱和纸色谱。其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液固萃取（固萃取（LSELSE）具有设备简单，）具有设备简单，使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此做一简介。使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此做一简介。LSE LSE通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长5515cm15cm，内径，内径0.50.51cm1cm的色谱柱中，将被测成分保留于柱上，洗去杂质后，再的色谱柱中，将被测成分保留于柱上，洗去杂质后，再洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留于柱上，直接洗脱被测洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。用这种选择性好而柱效较低的方法进行样品的净化分离，成分进行测定。用这种选择性好而柱效较低的方法进行样品的净化分离，尤其适用于一类总成分的含量测定，也可将色谱柱流出的样品进一步用尤其适用于一类总成分的含量测定，也可将色谱柱流出的样品进一步用GCGC、HPLCHPLC、TCLTCL分离后测定。分离后测定。LSE LSE的常用净化剂（填料）有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅胶、活性炭、的常用净化剂（填料）有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅胶、活性炭、大孔树脂离子交换树脂、键合相硅胶大孔树脂离子交换树脂、键合相硅胶C8C8、C18C18、聚酰胺等。视其性质可分为亲、聚酰胺等。视其性质可分为亲脂型、亲水型和离子交换型填料。脂型、亲水型和离子交换型填料。本讲稿第十九页，共一百一十四页固相萃取操作一般有四步：活化-除去柱子内的杂质并创造一定的溶剂环境环境。上样-将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在柱上。淋洗-除去不需要的组分。洗脱-用小体积的溶剂将组分淋洗下来并收集。本讲稿第二十页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 硅胶、氧化铝等：硅胶、氧化铝等：它们是传统的吸附剂，多以它们是传统的吸附剂，多以0.070.070.15mm(2000.15mm(200100100目目)的颗粒的颗粒1 15g5g用于用于样品的净化处理，其作用机制为溶质在吸附剂表面的极性吸附作用。通常是样品的净化处理，其作用机制为溶质在吸附剂表面的极性吸附作用。通常是当溶于有机溶剂的样品加到柱上时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，当溶于有机溶剂的样品加到柱上时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。再用适当极性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。氧化铝能将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、苷类等的测定。例如氧化铝能将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、苷类等的测定。例如用法（吸收系数法）用法（吸收系数法）硅胶适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留碱性化合物。若把硅胶适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留碱性化合物。若把样品提取液加到柱上，依次用极性由小到大的溶剂洗脱，则可以将杂样品提取液加到柱上，依次用极性由小到大的溶剂洗脱，则可以将杂质和被测成分分离。另外，硅胶也和下面所述的硅藻土等一样，还可质和被测成分分离。另外，硅胶也和下面所述的硅藻土等一样，还可作亲水型填料使用，常见的商品硅胶柱为作亲水型填料使用，常见的商品硅胶柱为Sep-pak SilicaSep-pak Silica，通常以甲，通常以甲醇、水处理后上样。醇、水处理后上样。本讲稿第二十一页，共一百一十四页键合相硅胶：键合相硅胶：十八烷基键合相硅胶（简称十八烷基键合相硅胶（简称C18C18或或ODSODS）是常用的固体萃取剂，其次有烷基、）是常用的固体萃取剂，其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水溶性杂质或成分。也常用于萃苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药物。该类取，纯化水基质体液中憎水性药物。该类LSELSE的一般操作程序为：的一般操作程序为：1)1)柱的活化。用柱的活化。用2ml2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.50.5毫升水洗去柱中毫升水洗去柱中的甲醇。的甲醇。2)2)上样。上样。3)3)清洗。用清洗。用2 25ml5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、氨基酸、亲的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、氨基酸、亲水的蛋白质、糖以及中等保留成分的极性化合物、低肽等。水的蛋白质、糖以及中等保留成分的极性化合物、低肽等。4)4)洗脱。用洗脱。用2 25ml5ml甲醇或甲醇甲醇或甲醇-水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂的水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂的药物等强保留的待测组分。药物等强保留的待测组分。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第二十二页，共一百一十四页大孔树脂：它可分为极性和非极性型大孔树脂：它可分为极性和非极性型 极性极性 丙烯酰胺聚合物丙烯酰胺聚合物;非极性非极性 苯乙烯和二乙烯苯的共聚物苯乙烯和二乙烯苯的共聚物.其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用对非极性其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用对非极性水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂中的黄芪甲苷时，水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂中的黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用30%30%乙醇洗脱黄芪甲苷。乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂的主要特点是表面积极大，传质速率较高和具有不同的大孔树脂的主要特点是表面积极大，传质速率较高和具有不同的极性及适于吸附较大分子。极性及适于吸附较大分子。树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量常机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量常为为1 12g2g，有时，有时 也用也用100100150mg150mg来萃取血、尿中药物，来萃取血、尿中药物，操作程序类似操作程序类似ODSODS填料。填料。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第二十三页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 聚酰胺：聚酰胺：它是常用的有机吸附剂，主要通过与溶它是常用的有机吸附剂，主要通过与溶质形成氢键而产生吸附作用。质形成氢键而产生吸附作用。常用于含酚、酸、醌类药物样品液的净化常用于含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离，分离，如测定黄酮时，用样品的乙醇提取液上柱，水如测定黄酮时，用样品的乙醇提取液上柱，水洗去部分杂质，以洗去部分杂质，以95%95%乙醇洗脱总黄酮后测定。乙醇洗脱总黄酮后测定。本讲稿第二十四页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 硅藻土、纤维素：硅藻土、纤维素：它它们们为为常常用用的的亲亲水水型型填填料料，其其原原理理为为分分配配作作用用。填填料料作作为为支支持持剂剂，多多以以水水基基质质液液作作为为固固定定相相，与与水水不不混混溶溶的的有有机机溶溶剂剂为为流流动动相相，较较亲亲脂脂的的成成分分从从固固定定相相转转移移到到流流动动相相，而而被被洗洗脱脱，达达到到萃萃取取的的目目的的。其其萃萃取取率率较较高高（一一般般大大于于80%80%），无无浓浓集集作作用用，萃萃取取液液较较纯纯净净，但但洗洗脱脱剂剂用用量量较较大大（一一般般大大于于5ml5ml）硅硅藻藻土土柱柱则则用用干干柱柱直直接接上上样样，柱柱可可再再生生。常常见见牌牌号号为为ExtretutExtretut。纤维素柱的使用与硅藻土柱相似。纤维素柱的使用与硅藻土柱相似。本讲稿第二十五页，共一百一十四页离子交换树脂：离子交换树脂：憎水基质的离子交换树脂兼有离子交换剂憎水基质的离子交换树脂兼有离子交换剂及大孔树脂的一些性质，所以对于在水中溶解及大孔树脂的一些性质，所以对于在水中溶解度不大的药物、洗脱剂中需含一定量的有机溶度不大的药物、洗脱剂中需含一定量的有机溶剂。剂。离子交换树脂柱可用于除去样品中的离离子交换树脂柱可用于除去样品中的离子，防止组分分解，更常用于萃取样品液中子，防止组分分解，更常用于萃取样品液中可离解化合物。可离解化合物。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第二十六页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 此外，近年来发展起来的固相微萃此外，近年来发展起来的固相微萃取取(Solid-Phase microextraction,(Solid-Phase microextraction,SPME)SPME)和液相微萃取和液相微萃取(Liquid-Phase(Liquid-Phase microextraction,LPME)microextraction,LPME)技术有良好的技术有良好的应用前景。应用前景。SPMESPME是一种无溶剂的萃取技是一种无溶剂的萃取技术，取样方式有直接取样和顶空取样。术，取样方式有直接取样和顶空取样。本讲稿第二十七页，共一百一十四页（五）消化法五）消化法 对样品进行有机破坏，常用于中药制剂中重金属的检查。对样品进行有机破坏，常用于中药制剂中重金属的检查。常用的破坏方法有湿法消化和干法消化法。常用的破坏方法有湿法消化和干法消化法。湿法消化：根据所用试剂不同，下面介绍三种常见的消化方法。湿法消化：根据所用试剂不同，下面介绍三种常见的消化方法。（1 1）硝酸）硝酸高氯酸法高氯酸法 该法破坏能力强，反应较激烈，故进行破坏时，必该法破坏能力强，反应较激烈，故进行破坏时，必须严密注意切勿将容器中的溶液蒸干，以免发生爆炸。本法适用于血，尿、须严密注意切勿将容器中的溶液蒸干，以免发生爆炸。本法适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏，经破坏后所得无机金属离子均为组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏，经破坏后所得无机金属离子均为高价态，本法对含氮杂环类有机物破坏不够完全。高价态，本法对含氮杂环类有机物破坏不够完全。（2 2）硝酸）硝酸硫酸法硫酸法 该法适用于大多数有机物质的破坏，无机该法适用于大多数有机物质的破坏，无机金属离子均氧化成高价态，与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子金属离子均氧化成高价态，与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。的测定，不宜采有此法。第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 本讲稿第二十八页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理（3 3）硫酸）硫酸硫酸盐法硫酸盐法 本法所用硫酸盐为硫酸钾或无水硫酸纳，加入硫本法所用硫酸盐为硫酸钾或无水硫酸纳，加入硫酸盐的目的是为了提高硫酸的沸点，以使样品破坏加酸盐的目的是为了提高硫酸的沸点，以使样品破坏加速完全。同时防止硫酸在加热过程中过早地分解为速完全。同时防止硫酸在加热过程中过早地分解为SO3SO3而损失。经本法破坏所得金属离子，多为低价态。而损失。经本法破坏所得金属离子，多为低价态。本法常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到本法常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到三价砷或锑。三价砷或锑。湿法消化所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的湿法消化所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏瓶（直火加热）或聚四氟乙烯消化罐（烘箱中加热）。凯氏瓶（直火加热）或聚四氟乙烯消化罐（烘箱中加热）。所用试剂应为优级纯，水应为去离子水或高纯水，同时必所用试剂应为优级纯，水应为去离子水或高纯水，同时必须按相同条件进行空白实验校正。操作时应在通风橱内进须按相同条件进行空白实验校正。操作时应在通风橱内进行。行。本讲稿第二十九页，共一百一十四页第二节第二节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 干法消化干法消化 本法是将有机物灼烧灰化以达分解的目的，将适量样品置于瓷本法是将有机物灼烧灰化以达分解的目的，将适量样品置于瓷坩锅、镍坩锅或铂坩埚中，常加无水坩锅、镍坩锅或铂坩埚中，常加无水Na2CO3Na2CO3或轻质或轻质MgOMgO等以助灰化，等以助灰化，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全即可。本法不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）使其灰化完全即可。本法不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。有机样品的破坏。应用本法时要注意以下几个问题：应用本法时要注意以下几个问题：1 1）加热灼烧时，控制温度在）加热灼烧时，控制温度在420420以下，以免某些被测金属化合以下，以免某些被测金属化合物的挥发。物的挥发。2 2）灰化完全与否，直接影响测定结果的准确度。如欲检查灰化是否完全，）灰化完全与否，直接影响测定结果的准确度。如欲检查灰化是否完全，可将灰分放冷后，加入稍过量的稀可将灰分放冷后，加入稍过量的稀HCl-HCl-水（水（1:31:3）或硝酸）或硝酸-水（水（1:31:3）溶液，振）溶液，振摇。若呈色或有不溶有机物，可于水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行摇。若呈色或有不溶有机物，可于水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼烧。灼烧。3 3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。本讲稿第三十页，共一百一十四页第三节第三节 常用定量分析方法常用定量分析方法|分类重量分析和滴定分析。分类重量分析和滴定分析。|化学分析法所用仪器简单，结果准确。化学分析法所用仪器简单，结果准确。|主要用于测定制剂中含量较高的一些成分及含矿物药主要用于测定制剂中含量较高的一些成分及含矿物药制剂中的无机成分，如总生物碱类、总酸类、总皂苷及矿制剂中的无机成分，如总生物碱类、总酸类、总皂苷及矿物药制剂等。物药制剂等。|化学分析法有一定的局限性，其灵敏度低，操化学分析法有一定的局限性，其灵敏度低，操作繁琐、耗时长，专属性不高，对于微量成分准确作繁琐、耗时长，专属性不高，对于微量成分准确性不理想。性不理想。本讲稿第三十一页，共一百一十四页第三节第三节 常用定量分析方法常用定量分析方法（一）重量分析法（一）重量分析法 重量法可分为挥发法、萃取法和沉淀法。重量法可分为挥发法、萃取法和沉淀法。1 1、挥发法可测定具有挥发性或能定量转化为挥发性物质的组分含量。、挥发法可测定具有挥发性或能定量转化为挥发性物质的组分含量。如：如：供试品的干燥失重测定；供试品的干燥失重测定；水分测定均属挥发法；水分测定均属挥发法；中药制剂分析中药制剂分析中灰分及炽灼残渣的测定等。中灰分及炽灼残渣的测定等。2 2、萃取法是根据被测组分在互不相溶的两相中溶解度的不同，、萃取法是根据被测组分在互不相溶的两相中溶解度的不同，达到分离的目的。如达到分离的目的。如冰硼散中冰片的含量测定；冰硼散中冰片的含量测定；地奥心血康胶囊地奥心血康胶囊中甾体总皂苷含量测定；中甾体总皂苷含量测定；昆明山海棠片中总生物碱的含量测定；昆明山海棠片中总生物碱的含量测定；甘草浸膏中甘草酸的含量测定即采用萃取法。甘草浸膏中甘草酸的含量测定即采用萃取法。3 3、沉淀法是将被测组分定量转化为难溶化合物，测定其含量的方法，适、沉淀法是将被测组分定量转化为难溶化合物，测定其含量的方法，适用于制剂中纯度较高的成分。如用于制剂中纯度较高的成分。如西瓜霜润喉片中西瓜霜的含量测定；西瓜霜润喉片中西瓜霜的含量测定；苦苦参片中苦参总碱的含量测定；参片中苦参总碱的含量测定；复方元胡注射液总碱的测定。复方元胡注射液总碱的测定。本讲稿第三十二页，共一百一十四页第三节第三节 常用定量分析方法常用定量分析方法（二）滴定分析法二）滴定分析法 滴定分析法分为酸碱滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法和氧化还原滴定分析法分为酸碱滴定法、沉淀滴定法、配位滴定