丙二醛含量测定方法.ppt
植物组织或器官中植物组织或器官中丙二醛含量的测定丙二醛含量的测定 一、实验目的一、实验目的1.1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。方法。2.2.了解丙二醛积累对细胞的伤害了解丙二醛积累对细胞的伤害二、实验原理：二、实验原理：硫代巴比妥酸硫代巴比妥酸TBA丙二醛丙二醛3,5,5-三甲基恶唑三甲基恶唑2,4-二酮二酮 （三甲川）（三甲川）逆境逆境膜脂的过氧化作用膜脂的过氧化作用丙二醛丙二醛酸性酸性棕红色棕红色(最大吸收峰最大吸收峰 在在532nm)三、实验材料：三、实验材料：受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：实验仪器：实验仪器：紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计 离心机离心机四、实验步骤：四、实验步骤：l1 MDA的提取的提取 称称2g叶片，加入叶片，加入10三氯乙酸三氯乙酸(TCA)2ml及少量石英砂，研磨；进一步加入及少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA充分研磨，接着把匀浆液以充分研磨，接着把匀浆液以4000rmin离心离心10min，其上清液即为其上清液即为MDA提取液。提取液。l2 MDA显色反应及测定显色反应及测定 取取2ml MDA提取液（对照提取液（对照组取组取2ml 蒸馏水），在加蒸馏水），在加2ml 0.6TBA混匀，在试混匀，在试管上加棉塞，置沸水中加热管上加棉塞，置沸水中加热15min，迅速拿出水浴锅，迅速拿出水浴锅冷却，冷却，以以4000rmin离心离心15min，于波长，于波长532nm和和450nm下测定下测定OD值。值。五、结果计算五、结果计算l以测得的以测得的OD532OD532减去减去OD600OD600的非特异吸收值，分别计算的非特异吸收值，分别计算衰老和对照组的值。衰老和对照组的值。MDAMDA浓度浓度(molmol/L)=6.45OD532-0.56OD450/L)=6.45OD532-0.56OD450 D450D450、D532D532分别代表分别代表450nm450nm、532nm532nm波长下的光密度值。波长下的光密度值。六、注意事项：六、注意事项：1.0.1-0.5的三氯乙酸对的三氯乙酸对MDATBA反应较合适，若高于反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；2.MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸下的光吸收值下降；收值下降；3.如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。4.低浓度的铁离子能增强低浓度的铁离子能增强MDA与与TBA的显色反应，当植物的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为（最终浓度为0.5 nmolL-1）5.可溶性糖与可溶性糖与TBA显色反应的产物在显色反应的产物在532 nm也有吸收（最也有吸收（最大吸收在大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。扰。
