沙利度胺对人宫颈癌细胞增殖抑制的影响.docx
沙利度胺对人宫颈癌细胞增殖抑制的影响【摘要】目的：目的：讨论沙立度胺对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制的作用。方法方法方法:体外培养宫颈癌Hela细胞株，参加不同浓度的沙利度胺50、100、200ug/ml，同时设空白对照组；采用MTT法测量各组细胞增殖抑制率，Western-blot法检测细胞中环氧化酶-2COX-2的变化。结果：结果：结果：沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞的生长具有明显的抑制作用，并随药物浓度和时间的增加实验组中细胞的抑制率逐步增加，较对照组差异有显著性P0.05；实验组中COX的表达均低于对照组P0.05。结论：结论：结论：沙利度胺对宫颈癌Hela细胞的生长具有抑制作用，其机制可能与下调COX-2有关。【关键词】沙利度胺；宫颈癌细胞；环氧化酶-2.沙利度胺一个曾给人类带来上万名婴儿肢体畸形的药物，近期研究显示其具有广泛免疫调节作用和抗血管构成作用1，而被逐步引起重视。为进一步研究沙利度胺的抗肿瘤作用，本研究旨在观察沙利度对宫颈癌Hela细胞抑制作用，并讨论其可能的作用机制，为其在宫颈癌的临床应用提供理论根据。1材料与方法1.1材料人宫颈癌细胞株Hela购于河北医科大学第四附属医院细胞库，沙利度胺Thal、DMSO、0.25%姨酶均系购于美国Sigma公司产品，胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料公司，RPMI1640购自美国Gibco公司，兔人抗COX-2试剂盒购自美国Sigma公司。1.2方法1.2.1细胞培养将Hela细胞置于含10%小牛血清培养液，于37、5%CO2的培养箱中培养。以每周传代2-3次，取对数生长期细胞用于实验。1.2.2MTT法检测沙利度胺对宫颈癌Hela细胞增殖的影响取对数生长期的Hela细胞，以1x106ml，接种于96孔培养板每孔100ul,细胞贴壁生长24小时后，弃去培养液。实验组分三组高浓度组、中浓度组、低浓度组分别参加Thal浓度50、100、200ug/ml的培养液200ul，空白对照组参加DMSO的培养液200ul。每孔设6个复孔。分别培养24、48、72h后，每孔参加5mg/mlMTT100ul，继续培养4h,弃去培养液，参加DMSO100ul震荡10分钟，使结晶充分溶解，用全自动酶标仪检测490nm处每孔的吸光度A，计算增殖抑制率。细胞增殖抑制率%=1-实验组A值/空白对照组A值x100%，实验重复三次，取平均值。1.2.3Westernblot法对COX-2表达检测分组同上，分别取各组人宫颈癌Hela细胞，用蛋白裂解液充分的裂解细胞；离心，取上清提取总蛋白；采用酚试剂法进行对蛋白定量；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和电转仪将蛋白转印至PVDF膜，封闭，过夜；按讲明书要求参加待检测的一抗以及相应的二抗，显色，扫描测定杂交带的灰度值，用目的蛋白活性片段与内参-肌动蛋白灰度值的相比照值代表各COX-2活化蛋白的相对含量。操作步骤严格根据试剂盒讲明书进行。1.3统计学方法利用软件SPSS19.0进行统计学分析，各组数据以sx±的形式表示，组与组间均数用t检验，P0.05为差异具有统计学意义。2.1不同浓度沙利度胺对Hela细胞增殖的抑制作用采用MTT法测定细胞增殖抑制率可知沙利度胺实验组细胞生长出现明显抑制，随着沙利度胺浓度增加，抑制率显著升高P0.05，一样药物浓度，随着作用时间延长，抑制率显著升高P0.05，呈显剂量-效应依靠关系。宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及病死率在我国呈显上升和年轻化趋势，严重危害妇女健康和生命2。而传统化疗方案在宫颈癌治疗方面疗效欠佳，且毒副作用大、易发生耐药性，因而寻找新的、有效的、毒副作用小的化疗药物至关重要。沙利度胺反响停，酞咪哌叮酮，thalidomide曾因严重的致畸作用而被禁用。近年来研究表明沙利度胺具有抗肿瘤作用，并可通过抑制血管构成3,而抑制肿瘤的生长，但尚未见在宫颈癌中报道。本实验用不同浓度的沙利度胺作用于宫颈癌Hela细胞后，通过MTT法观察发现，沙利度胺可抑制细胞的生长，且随着药物浓度的增加及作用时间的延长而逐步加强，讲明沙利度胺对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用具有一定的量效、时效性,提示沙利度胺可能通过抑制肿瘤细胞增殖而起到抗肿瘤作用。COX-2(cyclooxgenase-2)是前列腺素合成限速酶，在正常组织中不表达或表达水平较低，而在很多恶心肿瘤中存在高表达，如肺癌、胰腺癌、大肠癌等45。COX-2可能通过某种机制上调某些因子如VEGF等的表达而促进了肿瘤细胞的浸润及转移能力6。而COX-2抑制剂可通过影响COX-2的活性来阻止肿瘤发生及诱导肿瘤细胞早期凋亡。研究证明，COX-2在宫颈癌中高表达，并与宫颈癌的发生发生展、侵袭转移相关78。本研究结果显示，肿瘤细胞COX-2表达情况随沙利度胺剂量增加逐步降低。综上所述，沙利度胺可抑制宫颈癌Hela细胞的生长，并可通过减少细胞内的COX-2表达，进而抑制宫颈癌细胞的增殖与迁移能力，为其在宫颈癌的分子靶向治疗提供了理论根据。参考文献：1SHORTTJ,HSUAK,JOHNSTONERW.Thalidomide-analoguebiologyimmunologicalmolecularandepigenetictargetsincancertherapyJ.Oncogene,2013,32(36):4191-4202.2张晗雪，张新.宫颈癌保留生育功能手术的临床病例报道及文献温习J,中华临床医师杂志，2015,95:865-868.6管小青,顾书成,吴骥,等.生存素和COX-2在乳腺癌复发及转移癌组织的表达J.江苏医药,2012,38(1):33-357徐惠勤,王琼.宫颈癌患者血清和组织MMPCOX-2CD147和IGF的变化研究.浙江临床医学,2015(17):535-536.8曹卉,刘颖.COX-2与Bcl-2蛋白在公家鳞癌中的表达及其与宫颈鳞癌发生发展的关系研究.临床和检验医学杂志,2015(14):1692-1695.
