DPPH自由基清除实验教学(详细版).pdf

DPPHDPPH 实验步骤实验步骤一、原理：一、原理：DPPH 是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自 3 个苯环的共振稳定作用及空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。作为一种稳定的自由基，DPPH 可以捕获(清除)其他的自由基。因此通过加入DPPH 后观察某一化学反应的速率是否减慢，来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。由于DPPH 自由基在以 520nm 为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。DPPH 在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为 517nm 下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH 的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。二、实验步骤：二、实验步骤：1.配制的 DPPH 溶液：配两次，每次取溶于50mL 乙醇，避光保存。2.配制 mL 的 Vc 溶液，至少 2mL（设为阳性对照，选择性做）3.配制一定浓度的样品溶液，至少2mL母液（也可以配制不同溶度梯度样品，计算IC50）4.上板（避光操作，上完板后，室温避光30 分钟，测吸光度）96 孔板，三组，每组设3 个复孔，每孔加入量及 96 孔板分布如下：sample（样品组）：样品溶液 100uL+DPPH 醇溶液 100uL(每个浓度 3 个孔)blank（空白组）：样品溶液 100uL+无水乙醇 100uL（每个浓度 3 个孔）control（对照组）：DPPH 醇溶液 100uL+水 100uL（一块板可共用一个对照组,3 个孔）样品 VC浓度 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6sampleblankcontro5.检测并计算清除率测 517nm517nm 处的吸光度，取平均値，计算每个浓度的 DPPH 清除率，做出折线图。清除率=（1-（Asample-Ablank）/Acontrol）X 100%