霉菌形态及菌落特征的观察..pdf

实验五实验五霉菌形态及菌落特征的观察霉菌形态及菌落特征的观察一、目的要求一、目的要求1.掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。2.掌握常用的霉菌制片方法二、基本原理二、基本原理霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。三、器材三、器材曲霉（Aspergillussp），青霉（Penicillium sp），根霉（Rhizopus sp），毛霉（Mucor sp）；乳酸石炭酸棉蓝染色液，20甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基；无菌吸管，载玻片，盖玻片，U 形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。四、操作步骤四、操作步骤1一般观察法于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。2载玻片观察法(1)将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上 U 形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用105kg/cm2，1213灭菌 20 分钟或干热灭菌，备用。(2)将 67ml 灭菌的马铃薯葡萄糖培养基倒入直径为9cm 的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成 051cm 的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置 2 块。(3)用灭菌的尖细接种针或装有柄的缝衣针，取（肉眼方能看见的）一点霉菌孢子，轻轻点在琼脂块的边缘上，用无菌镊子夹着立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，再盖上皿盖。2(4)在培养皿的滤纸上，加无菌的20甘油数毫升，至滤纸湿润即可停加。将培养皿置28培养一定时间后，取出载玻片置显微镜下观察。3玻璃纸透析培养观察法(1)向霉菌斜面试管中加入5ml 无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。(2)用无菌镊子将已灭菌的、直径与培养皿相同的圆形玻璃纸覆盖于查氏培养基平板上。(3)用 1ml 无菌吸管吸取 0 2ml 孢子悬液于上述玻璃纸平板上，并用无菌玻璃刮棒涂抹均匀。(4)置 28温室培养 48 小时后，取出培养皿，打开皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀剪取一小片玻璃纸置载玻片上，用显微镜观察。五、实验报告五、实验报告1结果绘图说明你所观察到的霉菌形态特征。2思考题(1)比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌形态上的异同。(2)玻璃纸应怎样进行灭菌？为什么？